實(shí)驗(yàn)一神經(jīng)干不應(yīng)期及神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)一神經(jīng)干不應(yīng)期及神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)第一頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)電刺激器、生理信號(hào)放大器和計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)的使用方法。

2．學(xué)習(xí)牛蛙坐骨神經(jīng)干標(biāo)本的制備方法。

3．神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位的記錄

4．測(cè)定牛蛙坐骨神經(jīng)的沖動(dòng)傳導(dǎo)速度和坐骨神經(jīng)不應(yīng)期第二頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日二、實(shí)驗(yàn)原理

神經(jīng)干在受到有效刺激后，可以產(chǎn)生動(dòng)作電位，標(biāo)志著神經(jīng)發(fā)生興奮。如果在神經(jīng)干另一端引導(dǎo)傳來(lái)的興奮沖動(dòng)，可以引導(dǎo)出雙相的動(dòng)作電位，如在兩個(gè)引導(dǎo)電極之間將神經(jīng)麻醉或損壞，則引導(dǎo)出的動(dòng)作電位即為單相動(dòng)作電位。神經(jīng)細(xì)胞的動(dòng)作電位是以“全或無(wú)”方式發(fā)生的。坐骨神經(jīng)干是由很多不同類型的神經(jīng)纖維組成的，所以，神經(jīng)干的動(dòng)作電位是復(fù)合動(dòng)作電位。復(fù)合動(dòng)作電位的幅值在一定刺激強(qiáng)度下是隨刺激強(qiáng)度的變化而變化的。第三頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日神經(jīng)干不應(yīng)期的測(cè)定原理

神經(jīng)在一次興奮的過(guò)程中，其興奮性也發(fā)生一個(gè)周期性的變化，而后才恢復(fù)正常。興奮性的周期變化，依次包括絕對(duì)不應(yīng)期、相對(duì)不應(yīng)期、超常期和低常期4個(gè)時(shí)期。為了測(cè)定坐骨神經(jīng)在一次興奮后興奮性的周期變化，首先要給神經(jīng)施加一個(gè)條件刺激（S1）引起神經(jīng)興奮，然后再用一個(gè)測(cè)試性刺激（S2），在前一興奮過(guò)程的不同時(shí)相給以刺激，用以檢查神經(jīng)閾值以及所引起的動(dòng)作電位的幅值，以判定神經(jīng)興奮性的變化。當(dāng)刺激間隔時(shí)間長(zhǎng)于25ms時(shí)，S1和S2分別所引起動(dòng)作電位的幅值大小基本形同。當(dāng)S2距離S1接近20ms左右時(shí)，發(fā)現(xiàn)S2所引起的第二個(gè)動(dòng)作電位幅值開始減小。在逐漸使S2向S1靠近，第二個(gè)動(dòng)作電位的幅值則繼續(xù)減小。最后可因S2落在第一個(gè)動(dòng)作電位的絕對(duì)不應(yīng)期內(nèi)而完全消失。

第四頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)速度的測(cè)定原理

神經(jīng)干受到有效刺激發(fā)生興奮后，產(chǎn)生的動(dòng)作電位將以一定的速度沿神經(jīng)傳導(dǎo)。對(duì)不同的神經(jīng)纖維，其傳導(dǎo)興奮的速度也不同，一般來(lái)說(shuō)直徑大、有髓的神經(jīng)纖維比直徑小、無(wú)髓的神經(jīng)纖維傳導(dǎo)速度快。蛙類的坐骨神經(jīng)干屬于混合型神經(jīng)，其中直徑最粗的有髓神經(jīng)為A類纖維，正常室溫下的傳導(dǎo)速度約為35~40m/s。

測(cè)定神經(jīng)纖維興奮的傳導(dǎo)速度v時(shí)，在遠(yuǎn)離刺激點(diǎn)的不同距離處分別用兩組引導(dǎo)電極引導(dǎo)動(dòng)作電位，測(cè)出兩引導(dǎo)點(diǎn)之間的距離m和分別引導(dǎo)出的動(dòng)作電位的時(shí)相差s，根據(jù)v=m/s即可計(jì)算出其傳導(dǎo)速度。

用尺子測(cè)量搭在前后兩組引導(dǎo)電極之間的神經(jīng)干長(zhǎng)度m約為12mm，又由圖6可測(cè)量得兩個(gè)動(dòng)作電位起始點(diǎn)的時(shí)間間隔s為0.40ms，故由公式v=m/s可計(jì)算實(shí)驗(yàn)用的神經(jīng)干標(biāo)本的興奮傳導(dǎo)速度約為：v=m/s=12/0.40=30mm/ms=30m/s。

第五頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日三、實(shí)驗(yàn)試劑與器材

牛蛙、任氏液、神經(jīng)屏蔽盒、Medlab計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)、普通剪刀、手術(shù)剪、眼科鑷（或尖頭無(wú)齒鑷）、金屬探針（解剖針）、玻璃分針、蛙板（或玻璃板）、蛙釘、細(xì)線、培養(yǎng)皿、滴管第六頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日四實(shí)驗(yàn)步驟（一）神經(jīng)干標(biāo)本的制備：1、雙毀髓：一只手握牛蛙，背部向上，用拇指壓住蛙的背部，食指按壓其頭部前端，使頭端向下低垂：另一只手持毀髓針，由兩眼之間沿中線向后觸畫，當(dāng)觸及到兩耳之間中間的凹陷處時(shí)，持針手感覺針尖下陷，此處即時(shí)枕骨大孔的位置，將針沿此處垂直刺入，然后將針尖向前刺入顱腔，在顱腔內(nèi)攪動(dòng)，以搗毀腦組織，再將針轉(zhuǎn)向后方，與脊柱平行刺入椎管，以搗毀脊髓，此時(shí)可看見動(dòng)物的后肢突然蹬直，而后癱軟如棉。第七頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日第八頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日第九頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日2、剝皮及去除內(nèi)臟和上部位肢體：將雙毀髓的牛蛙腹面向上放入解剖盤，一手持手術(shù)攝輕輕提取恥骨聯(lián)合上方的皮膚，另一手用手術(shù)剪橫向剪開皮膚，再剪開體壁肌肉（開口要大）。然后用手術(shù)攝輕輕提起內(nèi)臟，自恥骨部剪斷（勿損傷脊神經(jīng)）。一手輕輕托起牛蛙后肢，使頭部及內(nèi)臟向下，看清支配后肢的脊神經(jīng)發(fā)出部位，于其前方用金冠剪橫向剪斷脊柱，然后再沿脊柱兩側(cè)到橫向切口剪斷體壁，一手捏住斷開的脊柱后端，另一支手向后撕剝皮膚，并除去斷開脊柱以上部位肢體及內(nèi)臟。第十頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日3、分離兩后肢：將去皮的后肢腹面向上，用左手固定標(biāo)本的股部?jī)蓚?cè)肌肉，右手持手術(shù)刀，于恥骨聯(lián)合處向下按壓刀刃，切開恥骨聯(lián)合，然后用手托取標(biāo)本，用金冠剪剪開兩后肢相連的肌肉組織，并縱向剪開脊柱，使兩后肢完全分離，將分開的后肢，放入任氏液中備用。第十一頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日4、分離坐骨神經(jīng)：將一側(cè)后肢的脊柱端用面向上，趾端向外側(cè)翻轉(zhuǎn)，使其足底向上。用玻璃分針沿脊神經(jīng)向后分離坐骨神經(jīng)。股部沿腓腸肌正前方的肌二頭肌和半膜肌之間的肌縫，找出坐骨神經(jīng)，坐骨神經(jīng)基部（即與脊神經(jīng)相連的部位），背部有一梨狀肌蓋住神經(jīng)，用玻璃分針輕輕挑起肌肉，便可看清下面穿行的神經(jīng)，剪斷肌肉，完全暴露出坐骨神經(jīng)及其相連的脊神經(jīng)，，再用玻璃分針輕輕挑起神經(jīng)，自前向后剪去支配腓腸肌之外的神經(jīng)分支，將坐骨神經(jīng)分離至胳窩處。此處下行分為兩支，內(nèi)側(cè)為脛神經(jīng)，外側(cè)為腓神經(jīng)，沿這兩根神經(jīng)分離至踝部。用線結(jié)扎坐骨神經(jīng)干的脊柱端，然后再剪斷脛腓神經(jīng)的足端游離神經(jīng)干，將其放入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中，穩(wěn)定興奮性5分鐘。第十二頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日第十三頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日第十四頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日注意：在剝離時(shí)盡量將神經(jīng)干剝離長(zhǎng)一些，將神經(jīng)干周圍的組織剔除干凈（剝離時(shí)切勿損傷神經(jīng)干）。在分離過(guò)程中，應(yīng)經(jīng)常加任氏液保持神經(jīng)干濕潤(rùn)，以保留活性。第十五頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日（二）實(shí)驗(yàn)裝置連接將神經(jīng)屏蔽盒與計(jì)算機(jī)連在一起。打開MedLab信號(hào)采集系統(tǒng)，選用通道2記錄神經(jīng)干動(dòng)作電位、通道4顯示刺激的方波。㈢進(jìn)入信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。㈣觀察內(nèi)容：①動(dòng)作電位；②測(cè)傳導(dǎo)速度；③測(cè)不應(yīng)期.第十六頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日第十七頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日第十八頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日1.剝制神經(jīng)標(biāo)本時(shí)要仔細(xì)，須將神經(jīng)周圍的結(jié)締組織去干凈，避免與金屬接觸和戳傷神經(jīng)標(biāo)本。2.神經(jīng)標(biāo)本必須與五根電極良好接觸。

3.神經(jīng)干在空氣中不可暴露過(guò)久，應(yīng)時(shí)常用任氏液潤(rùn)濕，但不可向神經(jīng)盒內(nèi)滴加任氏液。

4.神經(jīng)干要伸直，防止彎曲，折疊和貼附5.兩對(duì)引導(dǎo)電極間距離應(yīng)盡可能大。

6.用剛能使神經(jīng)干產(chǎn)生最大動(dòng)作電位的最大刺激強(qiáng)度刺激神經(jīng)。

第十九頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日7.蓋上神經(jīng)盒的盒蓋，并接地，防止干擾。

8.在觀察雙相動(dòng)作電位時(shí)，如果第二相動(dòng)作電位波幅太小，可將兩個(gè)刺激電極的距離保持在最小，但不能碰在一起，引導(dǎo)電極2與刺激電極的距離保持在2cm左右，逐漸加大引導(dǎo)電極2與正負(fù)極之間的距離，則第二相動(dòng)作電位的振幅可逐漸增大。

9.神經(jīng)盒內(nèi)放入潤(rùn)濕紗布，以保持盒內(nèi)潤(rùn)濕，防止標(biāo)本干燥，切勿向盒內(nèi)直接滴加任氏液。

10.位于刺激電極和記錄電極外側(cè)端的神經(jīng)干及棉線要盡量短，不可與盒底接觸，更不要纏繞在電極上第二十頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日(1)神經(jīng)干興奮閾值的測(cè)定

刺激強(qiáng)度從0.1V開始，逐漸增加刺激強(qiáng)度，當(dāng)剛剛出現(xiàn)動(dòng)作電位時(shí)的刺激強(qiáng)度，即為神經(jīng)干的興奮閾值。

(2)雙相動(dòng)作電位

在刺激閾值的基礎(chǔ)上逐漸加大刺激強(qiáng)度，可見動(dòng)作電位的圖形為雙相，而且其幅值隨刺激強(qiáng)度增大而加大。當(dāng)刺激增加到一定強(qiáng)度時(shí)，可見動(dòng)作電位的幅值不再增大。

(3)單相動(dòng)作電位

在兩個(gè)引導(dǎo)點(diǎn)擊之間損傷神經(jīng)干標(biāo)本，可使原來(lái)的雙相動(dòng)作電位的下相小時(shí)，變?yōu)閱蜗?；注意上相?dòng)作電位的圖形有什么變化。

第二十一頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)報(bào)告1.注釋曲線2.簡(jiǎn)述神經(jīng)動(dòng)作電位產(chǎn)生的機(jī)制。3你所測(cè)量出的神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)速度是多少？4.當(dāng)兩個(gè)刺激脈沖的時(shí)間間隔逐漸縮短時(shí)，第二個(gè)動(dòng)作電位如何變化？為什么？第二十二頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日任氏液配方氯化鈉6.5氯化鉀)0.14氯化鈣0.12碳酸氫鈉0.4磷酸二氫鈉0.01葡萄糖(g)2(可不加)蒸餾水加至(ml)1000第二十三頁(yè)，共二十四頁(yè)，2022年，8月28日成份濃度(％)任氏溶液樂氏溶液臺(tái)氏溶液氯化鈉(NaCl)2032.5毫升45.6毫升40.0毫升氯化鉀(KCl)101.4毫升4.2毫升2.0毫升氯化鈣(CaCl2)101.2毫升2.4毫升2.0毫升磷酸二氫鈉(NaH2)11.0毫升—5.0毫升氯化鎂(MgCI2)5—