透析液細菌內毒素檢查

細菌內毒素限量檢查講義——透析用水、透析液講解董光宴1、試驗條件必備2、標準要求3、供試品溶液的制備4、限量檢查

湛江博康海洋生物有限公司3/4/20231博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第1頁!一、試驗條件必備1、經過培訓合格的實驗人員；2、實驗室條件；3、必備的實驗材料。3/4/20232博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第2頁!3必備的實驗材料3.1必備材料①鱟試劑盒：具有國家批準文號，并依法檢驗合格。如：湛江博康海洋生物有限公司，衛(wèi)藥準字（88）SJ-04。3/4/20233博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第3頁!②

實驗室要求潔凈，無塵埃流通，室內溫度要求20—25℃為宜。必要時應在超凈工作臺操作。3/4/20234博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第4頁!3.2取樣

取樣器具必須符合2010年版《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》310頁——細菌內毒素檢查法“3實驗準備”規(guī)定：無外源性內毒素。必要時可以用真空采血管（無添加劑）取樣。3/4/20235博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第5頁!5復用設備及用水要求5.1.3水質細菌學、內毒素檢測時間：最初應每周檢測1次，連續(xù)2次檢測結果符合要求后，細菌學檢測應每月1次，內毒素檢測應每3個月至少1次。3/4/20236博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第6頁!四限量檢查

透析用水、透析液已有內毒素檢驗標準，可直接進行內毒素檢查。3/4/20237博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第7頁!2、限值的確定內毒素限值L=1.0EU/ml。3/4/20238博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第8頁!4、操作方法

編號名稱A樣品管B樣品陽性對照C陽性對照D陰性對照3/4/20239博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第9頁!4.2陽性對照

檢驗鱟試劑活性及試驗有效性。4.3陰性對照檢驗試驗操作及環(huán)境是否對試驗有污染。0.25EU/ml3/4/202310博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第10頁!注意：1、只能在安瓿的易折點上部開啟內毒素，不能沿易折點開啟，防止振蕩過程中內毒素粘在封口膜上。2、只能取1ml的細菌內毒素檢查用水復溶細菌內毒素工作標準品。3/4/202311博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第11頁!4.4供試品陽性對照

目的是為了驗證透析用水中有內毒素可以被檢測出來。

0.25EU/ml/8倍3/4/202312博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第12頁!6加樣

其中2支加入0.1ml的0.25EU/ml的內毒素標準溶液作為陽性對照;2支加入0.1ml的透析用水8倍稀釋液作為供試品管;

2支加入0.1ml的透析用水8倍稀釋液和0.1ml的0.25EU/ml的內毒素標準溶液作為供試品陽性對照;

2支加入0.2ml的檢查用水作為陰性對照。3/4/202313博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第13頁!7結果判斷

保溫60分鐘±2分鐘后觀察結果。若陰性對照溶液D的平行管均為陰性，供試品陽性對照溶液B的平行管均為陽性，陽性對照溶液C的平行管均為陽性，試驗有效。

3/4/202314博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第14頁!供試品供試品陽性對照陽性對照陰性對照--++++--結果是否有效有效結果判斷合格8結果記錄3/4/202315博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第15頁!試劑名稱用途1鱟試劑反應主劑鱟試劑與2內毒素工作品陽性對照3檢查用水樣本溶解鱟試劑與樣本溶解4酸性調節(jié)劑調節(jié)透析液的PH值【組成成份】每盒試劑組成每盒試劑配套試驗耗材：無熱原試管5ml×6支；無熱原試管2ml×6支；無熱原吸嘴0.25ml×15支。3/4/202316博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第16頁!③

恒溫箱。④

旋渦振蕩器。⑤

其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。3/4/202317博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第17頁!二、復用設備及用水要求《血液透析器復用操作規(guī)范》5.1.2水質要求：應定期檢測復用用水細菌和內毒素的污染程度。應在血液透析器與復用系統(tǒng)連接處或盡可能接近此處進行水質檢測。內毒素含量不得超過2EU/ml，干預限度為1EU/ml。當達到干預限度時，繼續(xù)使用水處理系統(tǒng)是可以接受的，但應采取措施，防止系統(tǒng)污染進一步加重。3/4/202318博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第18頁!三、供試品溶液的制備

透析用水需進行稀釋。一般要求供試品溶液的PH值在6.0～8.0的范圍內。對于透析液，需調節(jié)PH值，可使用酸性調節(jié)劑調節(jié)PH值。3/4/202319博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第19頁!1、試劑和樣品鱟試劑盒（生產單位：湛江博康海洋生物有限公司，靈敏度：0.125EU/ml）細菌內毒素檢查用水細菌內毒素工作標準品（10EU）透析用水3/4/202320博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第20頁!3、計算稀釋倍數MVD=L/λ=1.0EU/ml/0.125EU/ml=8倍3/4/202321博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第21頁!透析用水8倍稀釋液0.2ml圖示4.1供試品溶液的制備1.4ml3/4/202322博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第22頁!補充：內毒素標準品的正確開啟方法

取細菌內毒素工作標準品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，用75%酒精棉球擦拭后啟開，啟開過程應防止玻璃屑落入瓶內。正確（易折點）錯誤3/4/202323博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第23頁!0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml圖示1EU/ml10EU/ml3/4/202324博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第24頁!5鱟試劑的準備

取規(guī)格為0.1ml/支的鱟試劑8支，放在試管架上，排成4列，每列2支。輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內。每支加入0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉動瓶壁，使內容物充分溶解。

3/4/202325博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第25頁!

加樣結束后，將鱟試劑用醫(yī)用膠布封口，輕輕振動混勻，連同試管架放入37℃水浴或適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫60分鐘。3/4/202326博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第26頁!

若溶液A的兩個平行管均為陰性，判供試品符合規(guī)定；若溶液A的兩個平行管均為陽性，判供試品不符合規(guī)定。若溶液A的兩個平行管中的一管為陽性，另一管為陰性，需進行復試。復試時，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均為陰性，判供試品符合規(guī)定；否則判供試品不符合規(guī)定。3/4/202327博康透析液細菌內毒素檢查共28頁，您現在瀏覽的是第27頁!