金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)

金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!概況金黃色葡萄球菌(StaphyloccocusaureusRosenbach)是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），可引起多種嚴重感染。有“嗜肉菌"的別稱。

金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!金黃色葡萄球菌的生物學特性典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。

金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為β型溶血?？僧a(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、VP試驗多為陽性，不產(chǎn)生靛基質。觸酶陽性。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!Baird-Parker瓊脂平板金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤，直徑約2~3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶而可見無混濁帶和透明圈的非典型菌落。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!金黃色葡萄球菌的重要鑒定-

血漿凝固酶試驗

試驗原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉變?yōu)槔w蛋白，附著于細菌表面，產(chǎn)生凝固。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細胞壁結合的凝固酶，為結合凝固酶；另一種是菌細胞釋放于培養(yǎng)基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。結果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復實驗。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!法:平板計數(shù)法金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!典型菌落計數(shù)與計算公式的應用計數(shù)范圍要求：選擇合計菌落數(shù)在20~200的平板，計數(shù)典型菌落。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!公式二的使用范圍：平板菌落數(shù)均在20cfu～200cfu之間。N=∑T/1.1d∑T：兩個稀釋度平板上確認的金黃色葡萄球菌菌落總數(shù)之和；d：稀釋因子(稀釋度)。公式引用于ISO6888-1:1999(E)公式二金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!第二法MPN法金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!結果報告計算血漿凝固酶試驗陽性菌落對應的管數(shù)，查MPN檢索表。結果報告：MPN/g或MPN/mL金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!適用范圍PetrifilmTM測試片法適用于肉及其制品，奶制品等。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!金黃色葡萄球菌PetrifilmTM測試片，含具有顯色功能、經(jīng)改良的Baird-Parker培養(yǎng)基，對金黃色葡萄球菌的生長有很強的選擇。金黃色葡萄球菌在測試片上生成為暗紫紅色的菌落，可以直接完成鑒定和計數(shù)。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!培養(yǎng)特性：易培養(yǎng)，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長良好。需氧或兼性厭氧。最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4。耐鹽性強，在含10～15%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長，可用于篩選菌種。在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落。可產(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內，不滲至培養(yǎng)中。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!金黃色葡萄球菌的檢測程序檢樣25g(mL)＋225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯36±1℃Baird-Parker平板，血平板涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告血平板18~24h，Baird-Parker平板18~24h或45~48h。BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面36±1℃18~24h金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的β溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!血漿凝固酶試驗挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽性結果。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!結果報告如血漿凝固酶試驗陽性，可判定為金黃色葡萄球菌。報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!檢驗程序檢樣25g(mL)＋225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液10倍稀釋選擇三個連續(xù)的適宜濃度的樣品勻液，接種Baird-Parker平板計數(shù)及血漿酶試驗報告36±1℃45~48h金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!公式一T=AB/CdT:樣品中金黃色葡萄球菌落數(shù)；A:某一稀釋度典型菌落的總數(shù)；B:某一稀釋度血漿凝固酶陽性的菌落數(shù)；C:某一稀釋度用于血漿凝固酶試驗的菌落數(shù)；d:某一稀釋度。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!結果報告單位：cfu/g或者cfu/mL；若T或者N為0，報告<1d-1

cfu/mL(g)。金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!MPN檢驗程序25g(mL)檢樣+225mL稀釋液，勻質10倍系列稀釋選擇3個適宜稀釋度的樣品勻液，吸1mL樣液，每稀釋度各接種3管胰酪胨大豆肉湯，樣品的最高稀釋度，能達到獲得陰性終點36±1℃45~48h接種Baird-Parker平板血漿凝固酶試驗45~48h36±1℃查MPN表報告結果金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!第三法PetrifilmTM測試片法金黃色葡萄球菌檢驗與計數(shù)共26頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!PetrifilmTM測試片法檢驗程序檢樣25g(mL)+225mL稀釋，勻質，10倍系列稀釋選擇適宜稀釋度的樣品勻液，各取1mL分別加入紙片36±1℃24±2h判讀沒有