微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座

微生物試驗(yàn)操作基本要求無(wú)菌操作微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第1頁(yè)無(wú)菌指在環(huán)境中一切有生命活動(dòng)微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞及其芽孢或孢子都不存在狀態(tài)。無(wú)菌操作在微生物分離、接種、培養(yǎng)操作過(guò)程中預(yù)防培養(yǎng)物被其它微生物污染操作技術(shù)稱為無(wú)菌操作技術(shù)。無(wú)菌操作創(chuàng)造無(wú)菌培養(yǎng)環(huán)境預(yù)防在操作過(guò)程中其它微生物侵入微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第2頁(yè)

無(wú)菌環(huán)境

一無(wú)菌器具、培養(yǎng)基

二無(wú)菌操作技術(shù)

三基本規(guī)則

四一、無(wú)菌操作技術(shù)微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第3頁(yè)

無(wú)菌環(huán)境一1、無(wú)菌室2、超凈工作臺(tái)3、生物安全柜4、火焰周圍微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第4頁(yè)1、無(wú)菌室

無(wú)菌環(huán)境一標(biāo)準(zhǔn)無(wú)菌室要求：房間設(shè)置（外面有緩沖室）、空氣過(guò)濾、墻面、墻角、微生物操作相關(guān)設(shè)備、紫外燈等。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第5頁(yè)

無(wú)菌環(huán)境一如條件有限，可在微生物試驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間作為無(wú)菌室。能夠用板材和玻璃建造，面積4-5平方米即可。板材和玻璃隔出無(wú)菌室微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第6頁(yè)

無(wú)菌環(huán)境一2、超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)是一個(gè)提供局部無(wú)塵無(wú)菌工作環(huán)境垂直單向流型空氣凈化設(shè)備。超凈工作臺(tái)微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第7頁(yè)3、生物安全柜

無(wú)菌環(huán)境一生物安全柜外形與超凈臺(tái)類似，也提供局部無(wú)塵無(wú)菌工作環(huán)境。但它設(shè)置了風(fēng)槽，氣流不會(huì)吹向使用者，能夠有效保護(hù)使用者。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第8頁(yè)一

無(wú)菌環(huán)境4、火焰周圍通常使用酒精燈、煤氣燈，其火焰周圍是無(wú)菌區(qū)域（直徑10cm左右）。首先，利用高溫殺死細(xì)菌，而后利用酒精燃燒時(shí)向上形成單向氣流形成一個(gè)無(wú)菌區(qū)域?；鹧嬷車菬o(wú)菌區(qū)域微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第9頁(yè)無(wú)菌器具、培養(yǎng)基

二1、玻璃、金屬等器具干熱滅菌法2、玻璃、金屬、含水物品高壓蒸汽滅菌法3、金屬、玻璃器具火焰滅菌法4、液體或水溶性物質(zhì)過(guò)濾除菌法微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第10頁(yè)1、玻璃、金屬等器具--干熱滅菌法設(shè)備：電烘箱用途：用于玻璃器皿、金屬器具等耐熱物品烤干和滅菌。條件：160-165℃，滅菌1-2小時(shí)。

微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第11頁(yè)2、玻璃、金屬、含水物品等--高壓蒸汽滅菌法設(shè)備：高壓蒸汽滅菌鍋用途：培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄物、采樣器、紗布、衣物滅菌。條件：121℃水蒸氣20~30分鐘

培養(yǎng)基普通使用高壓蒸汽滅菌法微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第12頁(yè)3、一些金屬、玻璃器具--火焰滅菌法即在火焰外焰上灼燒進(jìn)行滅菌。用途：接種環(huán)、接種針；涂布器；試管管口、錐形瓶瓶口等滅菌。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第13頁(yè)4、液體或水溶性物質(zhì)--過(guò)濾除菌法器具：細(xì)菌過(guò)濾器用途：不耐高溫液體、水溶性物質(zhì)除菌。細(xì)菌過(guò)濾器微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第14頁(yè)無(wú)菌操作技術(shù)

三我們經(jīng)過(guò)一定技術(shù)來(lái)確保目標(biāo)微生物、培養(yǎng)基不被環(huán)境微生物污染，這些技術(shù)就是無(wú)菌操作技術(shù)。包含手部清潔消毒，用接種針、接種環(huán)、吸量管、涂布棒等工具進(jìn)行各種操作等等。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第15頁(yè)1、手部清潔消毒洗手：手部有可見灰塵時(shí)、飯前、便后，用水和肥皂洗手；Handrub（揉手）：手部較清潔時(shí)，75%乙醇或者醇基消毒劑揉手。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第16頁(yè)動(dòng)作：手掌-手背-指縫-手指-拇指-指尖-手腕微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第17頁(yè)2、培養(yǎng)皿操作培養(yǎng)皿開合：?jiǎn)问执蜷_和蓋上皿蓋，包含持皿法和皿加法兩種。此操作用于制作培養(yǎng)基平板、接種等。持皿法微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第18頁(yè)皿加法微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第19頁(yè)3、接種環(huán)操作包含灼燒接種環(huán)、接種、劃線等。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第20頁(yè)灼燒接種環(huán)先斜放外焰灼燒接種環(huán)，然后垂直放置后繼續(xù)灼燒，再斜燒金屬桿?，F(xiàn)在紅外接種環(huán)滅菌器使用也比較廣泛。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第21頁(yè)用接種環(huán)進(jìn)行接種微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第22頁(yè)用接種環(huán)進(jìn)行劃線微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第23頁(yè)4、涂布棒操作灼燒滅菌：能夠沾酒精然后灼燒，灼燒范圍要包含其桿部。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第24頁(yè)涂布：將菌液滴在培養(yǎng)基表面中央。右手拿涂布棒將菌液沿一條直線往返推進(jìn)，然后沿一垂直線來(lái)回推進(jìn)，平板邊緣處可改變方向再涂幾次。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第25頁(yè)5、試管操作單試管操作（注意左右手使用）微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第26頁(yè)雙試管操作5、試管操作無(wú)菌操作視頻微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第27頁(yè)操作前準(zhǔn)備1

必須明確物品無(wú)菌區(qū)和非無(wú)菌區(qū)。工作人員需先戴帽子、口罩及洗手，并將手擦干，注意空氣和環(huán)境清潔。操作中2

夾取無(wú)菌物品，必須使用無(wú)菌持物鉗。

進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)，凡未經(jīng)消毒手、臂，均不可直接接觸無(wú)菌物品或超出無(wú)菌區(qū)取物。無(wú)菌物品管理3

無(wú)菌物品必須保留在無(wú)菌包或滅菌容器內(nèi)，不可暴露在空氣中過(guò)久。無(wú)菌物品和非無(wú)菌物應(yīng)分開放置。無(wú)菌包一經(jīng)打開即不能視為絕對(duì)無(wú)菌，應(yīng)盡早使用。凡已取出無(wú)菌物品雖未使用也不可再放回?zé)o菌容器內(nèi)。無(wú)菌操作標(biāo)準(zhǔn)微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第28頁(yè)二、微生物試驗(yàn)室要求（1）試驗(yàn)室內(nèi)要經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生。（2）試驗(yàn)室應(yīng)井然有序，不得存放試驗(yàn)室外及個(gè)人物品、儀器等。（3）測(cè)試用過(guò)廢棄物要倒在固定箱筒內(nèi)，并及時(shí)處理。（4）試驗(yàn)室應(yīng)含有優(yōu)良采光條件和照明設(shè)備。（5）試驗(yàn)室工作臺(tái)面應(yīng)保持水平和無(wú)滲漏，墻壁和地面應(yīng)該光滑和輕易清洗。（6）試驗(yàn)室布局要合理，普通應(yīng)有準(zhǔn)備間和無(wú)菌室。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第29頁(yè)三、微生物試驗(yàn)安全要求（一）普通要求（1）進(jìn)入試驗(yàn)室工作時(shí)，衣、帽、鞋必須穿戴整齊。（2）在進(jìn)行高壓、干燥、消毒等工作時(shí)，不得私自離開現(xiàn)場(chǎng)，認(rèn)真觀察溫度、時(shí)間。蒸餾易揮發(fā)、易燃液體時(shí)，不準(zhǔn)直接加熱，應(yīng)置水浴鍋上進(jìn)行。（3）禁止用口直接吸收藥品和菌液，按無(wú)菌操作進(jìn)行，如發(fā)生菌液濺出容器外時(shí)，應(yīng)馬上用有效消毒劑進(jìn)行徹底消毒，安全處理后方可離開現(xiàn)場(chǎng)。（4）工作完成，兩手用肥皂洗凈，必要時(shí)可用新潔爾滅、過(guò)氧乙酸泡手，然后用水沖洗。工作服要經(jīng)常清洗，保持整齊，必要時(shí)高壓消毒。（5）試驗(yàn)完成及時(shí)清理現(xiàn)場(chǎng)和試驗(yàn)用具，對(duì)染菌物品進(jìn)行消毒滅菌處理。（6）試驗(yàn)結(jié)束后認(rèn)真檢驗(yàn)水、電和正在使用得儀器設(shè)備，關(guān)好門窗，方可離去。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第30頁(yè)三、微生物試驗(yàn)安全要求（二）消防安全要求（1）注意預(yù)防供電線路老化造成漏電著火。（2）注意設(shè)備原因造成失火。設(shè)備超出正常使用壽命；設(shè)備出現(xiàn)故障未及時(shí)發(fā)覺(jué)和維修?！柽^(guò)夜而無(wú)人看管恒溫培養(yǎng)箱和干燥鼓風(fēng)箱等。儀器操作不妥，溫度設(shè)置過(guò)高，引發(fā)失火?！銣馗稍锕娘L(fēng)箱（3）預(yù)防未關(guān)電源引發(fā)失火。（4）預(yù)防操作不慎，使火源接觸易燃物質(zhì)，引發(fā)著火。（5）防止出現(xiàn)爆炸事故?！獪缇佄⑸飳?shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第31頁(yè)三、微生物試驗(yàn)安全要求（三）藥品使用安全擦拭顯微鏡鏡頭二甲苯——易揮發(fā)——吸入過(guò)多影響健康；芽孢染色孔雀石綠——致癌；慣用于顯微鏡鏡頭香柏油——?jiǎng)《?；濃硫酸、苯酚等——腐蝕試驗(yàn)儀器，傷害皮膚，眼睛等。微生物實(shí)驗(yàn)操作基本要求專家講座第32頁(yè)三、微生物試驗(yàn)安全要求（四）細(xì)菌感染和污染

細(xì)菌易發(fā)生變異，在一些特定條件下由非致病菌轉(zhuǎn)變?yōu)?/p>