第十三章革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌演示文稿

第十三章革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌演示文稿當(dāng)前1頁，總共62頁。優(yōu)選第十三章革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌當(dāng)前2頁，總共62頁。炭疽芽孢桿菌(B.anthracis)

簡稱炭疽桿菌，是人類、各種家畜和野生動(dòng)物炭疽病的病原體，該菌在獸醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)上均占有相當(dāng)重要的地位。當(dāng)前3頁，總共62頁。一、主要生物學(xué)特性（一）形態(tài)及染色G＋大桿菌（5～10μm），無鞭毛，不運(yùn)動(dòng)。動(dòng)物體內(nèi)常3～5個(gè)菌體連成短鏈，外有莢膜，不形成芽孢。培養(yǎng)基中

形成長鏈，形成芽孢。普通培養(yǎng)基中不形成莢膜，但在含血液、血清的培養(yǎng)基，CO2環(huán)境中培養(yǎng)則形成莢膜。當(dāng)前4頁，總共62頁。炭疽桿菌典型形態(tài)當(dāng)前5頁，總共62頁。炭疽桿菌培養(yǎng)物涂片當(dāng)前6頁，總共62頁。炭疽桿菌的芽孢當(dāng)前7頁，總共62頁。炭疽桿菌形成芽孢的條件：①有充分的O2②25～35℃③有一定的濕度④中性或弱堿性環(huán)境由于炭疽桿菌在體外可形成芽孢，所以，我國獸醫(yī)法規(guī)定：禁止解剖死于炭疽的動(dòng)物尸體。當(dāng)前8頁，總共62頁。（二）生長要求及培養(yǎng)特性

1、生長要求37℃、有氧、普通培養(yǎng)基當(dāng)前9頁，總共62頁。2、培養(yǎng)特性普通瓊脂形成灰白色、不透明、大而扁平、表面干燥、邊緣呈卷發(fā)狀的菌落。血瓊脂不溶血，個(gè)別菌株可輕微溶血。普通肉湯

24h后，上部液體透明，管底有白色絮狀沉淀，輕搖試管，沉淀物徐徐上升，卷繞成團(tuán)而不散開。明膠穿刺倒松樹狀生長，明膠上部逐漸液化呈漏斗狀。青霉素培養(yǎng)基

0.5IU／ml，串珠反應(yīng)當(dāng)前10頁，總共62頁。炭疽桿菌在普通瓊脂培養(yǎng)基上形成的卷發(fā)樣菌落當(dāng)前11頁，總共62頁。炭疽桿菌在血瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落當(dāng)前12頁，總共62頁。（三）抵抗力本菌繁殖體的抵抗力并不強(qiáng)，與一般細(xì)菌相似。75℃5～15min即可將其殺死。但該菌的芽孢抵抗力特別強(qiáng)。煮15min通常不能將其殺死，需高壓或干烤方能將其殺死。干燥皮毛上的芽孢，可存活10年以上。土壤被其污染，傳染性?？杀３?0～30年。當(dāng)前13頁，總共62頁。（四）抗原結(jié)構(gòu)1、莢膜抗原

為半抗原，成分為多肽，僅見于有毒菌株，與毒力有關(guān)。此抗原的抗體無保護(hù)作用，但其反應(yīng)性較特異，可用于血清學(xué)鑒定，如莢膜腫脹試驗(yàn)及免疫熒光抗體法等檢測的就是這種抗原。2、菌體抗原

成分為多糖，與毒力無關(guān)，但性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)腐敗和高溫處理不被破壞，可與炭疽陽性血清發(fā)生沉淀反應(yīng)，故可用于皮毛等畜產(chǎn)品的檢驗(yàn)。當(dāng)前14頁，總共62頁。3、保護(hù)性抗原（PA）

是一種胞外蛋白質(zhì)抗原，為炭疽毒素的組成成分之一，具有免疫原性，能使機(jī)體產(chǎn)生抗炭疽桿菌感染的保護(hù)力。4、芽孢抗原

是芽孢外膜層含有的抗原決定簇，它與皮質(zhì)一起組成炭疽芽孢的特異性抗原，具有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值。當(dāng)前15頁，總共62頁。二、致病性（一）毒力因子1、莢膜增強(qiáng)細(xì)菌的抗吞噬能力，有利于細(xì)菌擴(kuò)散。2、炭疽毒素(anthraxtoxin)包括水腫毒素及致死毒素兩種。毒性作用主要是損傷微血管的內(nèi)皮，增強(qiáng)微血管的通透性，改變血液循環(huán)動(dòng)力學(xué)，損害腎臟功能，干擾糖代謝，血液呈高凝狀態(tài)，易形成感染性休克和彌漫性血管內(nèi)凝血，最后導(dǎo)致動(dòng)物死亡。當(dāng)前16頁，總共62頁。炭疽毒素由三種亞單位構(gòu)成。水腫因子（edemafactor,EF）致死因子（lethalfactor,LF）保護(hù)性抗原（protectiveantigen,PA）三者單獨(dú)存在均無毒性，只有PA與EF或者LF結(jié)合才有毒性作用。當(dāng)前17頁，總共62頁。（二）所致疾病

本菌可致各種家畜、野獸和人類的炭疽病。主要通過消化道傳染，但也可經(jīng)呼吸道及皮膚創(chuàng)傷或通過吸血昆蟲傳播。草食動(dòng)物急性敗血癥肉食動(dòng)物胃腸炎、咽炎雜食動(dòng)物慢性咽喉腫脹或隱性感染人腸炭疽、肺炭疽或皮膚炭疽實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小白鼠、豚鼠、家兔均易感當(dāng)前18頁，總共62頁。死于炭疽的牛瘤胃鼓氣，天然孔流血，肛門突出當(dāng)前19頁，總共62頁。病豬咽喉部腫大當(dāng)前20頁，總共62頁。死于炭疽的牛脾臟顯著腫大當(dāng)前21頁，總共62頁。人的皮膚炭疽當(dāng)前22頁，總共62頁。

人的皮膚炭疽當(dāng)前23頁，總共62頁。三、微生物學(xué)診斷死于炭疽的病畜尸體嚴(yán)禁剖檢。炭疽尸體特征變化：天然孔出血、血凝不良、尸僵不全、腹部鼓脹、可視粘膜發(fā)紺、皮下結(jié)締組織呈黃色膠樣浸潤。確診可作細(xì)菌學(xué)檢查和血清學(xué)檢查。當(dāng)前24頁，總共62頁。（一）細(xì)菌學(xué)檢查1、病料采集生前：水腫液或血液死后：耳朵腸炭疽：糞便若已錯(cuò)剖畜尸，可采取脾、肝等進(jìn)行檢驗(yàn)，尸體就地深埋2米以下，表面用20%的石灰乳消毒。當(dāng)前25頁，總共62頁。2、鏡檢病料涂片干燥后，在10%的福爾馬林溶液或在0.1%升汞中浸泡10～15分鐘，然后用美藍(lán)或瑞氏染色法染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)有莢膜的竹節(jié)狀大桿菌，即可作出初步診斷。當(dāng)前26頁，總共62頁。

3、分離培養(yǎng)可用普通瓊脂或血瓊脂平板，得到的純培養(yǎng)物可作以下鑒定：①噬菌體裂解試驗(yàn)②青霉素抑菌試驗(yàn)③莢膜形成試驗(yàn)④串珠試驗(yàn)⑤溶血試驗(yàn)當(dāng)前27頁，總共62頁。4、動(dòng)物試驗(yàn)將被檢材料制成1：5懸液，皮下注射小鼠、豚鼠或家兔。動(dòng)物通常于注射后24～72h死于敗血癥。剖檢可見注射部位膠樣浸潤及脾臟腫大等病理變化。取血液、臟器涂片鏡檢，當(dāng)發(fā)現(xiàn)竹節(jié)狀有莢膜的大桿菌時(shí)，即可診斷。當(dāng)前28頁，總共62頁。（二）血清學(xué)檢查多用已知抗體檢查被檢的抗原。如：炭疽環(huán)狀沉淀反應(yīng)（Ascoli氏反應(yīng)）協(xié)同凝集試驗(yàn)串珠熒光抗體檢查瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)酶標(biāo)SPA間接染色法當(dāng)前29頁，總共62頁。四、免疫防治1、Ⅱ號(hào)炭疽芽孢苗用于牛、馬、驢、騾、駱駝、綿羊、山羊和豬。注射后14d即可產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)免疫力，免疫期一年。2、無毒炭疽芽孢苗

適用于牛、馬、驢、騾、綿羊和豬，免疫期一年。此苗對(duì)山羊反應(yīng)強(qiáng)烈，可引起嚴(yán)重局部反應(yīng)，有的甚至發(fā)生死亡，故禁用于山羊。3、抗炭疽血清

可用于治療，或在發(fā)生炭疽的疫區(qū)作緊急預(yù)防。當(dāng)前30頁，總共62頁。第二節(jié)梭菌屬(Clostridium)梭菌是一群G＋大桿菌，均能形成芽孢，芽孢直徑多超過菌體橫經(jīng)，芽孢位于菌體中央時(shí)，使菌體膨脹變形呈梭形，故名梭狀芽孢桿菌，簡稱梭菌。本屬細(xì)菌均為厭氧菌，絕大多數(shù)嚴(yán)格厭氧，少數(shù)可在微氧環(huán)境生長。當(dāng)前31頁，總共62頁。本屬有74個(gè)正式種和100多個(gè)位置不定的種。分布于土壤、污水、海洋沉積物、腐爛的植物、動(dòng)植物產(chǎn)品、人和其他動(dòng)物及昆蟲的腸道、人與動(dòng)物的傷口及軟組織感染灶。多數(shù)為非病原菌，約有30梭菌具有弱致病性，約有10種梭菌具有強(qiáng)致病性，多為人獸共患病病原。當(dāng)前32頁，總共62頁。常見病原梭菌及其所致疾病

細(xì)菌種型所致疾病

產(chǎn)氣莢膜梭菌A型(C.PerfringenstypeA)惡性水腫，人食物中毒產(chǎn)氣莢膜梭菌B型(C.PerfringenstypeB)羔羊痢，駒、綿羊、山羊腸毒血癥產(chǎn)氣莢膜梭菌C型(C.PerfringenstypeC)羊猝狙，犢牛、羔羊、仔豬腸毒血癥，人、禽類壞死性腸炎產(chǎn)氣莢膜梭菌D型(C.PerfringenstypeD)綿羊、山羊、牛腸毒血癥產(chǎn)氣莢膜梭菌E型(C.PerfringenstypeE)犢牛、羔羊痢疾氣腫疽梭菌(C.chauvoei)氣腫疽腐敗梭菌(C.septiccum)惡性水腫、羊快疫諾維梭菌A型(C.novyitypeA)惡性水腫諾維梭菌B型(C.novyitypeB)黑疫諾維梭菌C型(C.novyitypeC)水牛骨髓炎溶血梭菌(C.haemoiyticum)牛、羊細(xì)菌性血紅素尿肉毒梭菌A～F型(C.BotulinumtypeA～F)動(dòng)物和人肉毒中毒癥阿根廷梭菌(C.argentinense)人肉毒中毒癥（阿根廷）破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)破傷風(fēng)艱難梭菌(C.difficiie)人、犬、豬、駒腸炎、腹瀉當(dāng)前33頁，總共62頁。梭菌病的分類及診斷梭菌病，按性質(zhì)和癥狀大致可分為5類。①氣腫疽與惡性水腫②快疫與類快疫③痢疾與腸炎④食物中毒⑤破傷風(fēng)除第一類外，其余主要是由細(xì)菌毒素所致，所以診斷重點(diǎn)應(yīng)是毒素檢查。而氣腫疽與惡性水腫是由細(xì)菌感染引起，診斷應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。當(dāng)前34頁，總共62頁。一、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Cl.perfringens)

又名魏氏梭菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌。該菌是羔羊痢、羊猝狙和羊腸毒血癥的病原體，也可引起人惡性水腫。當(dāng)前35頁，總共62頁。（一）形態(tài)及染色

G＋大桿菌，長約l.3～19.0μm，單獨(dú)散在。無鞭毛。芽孢位于菌體中央，使菌體膨脹呈梭形。多數(shù)菌株可形成莢膜。當(dāng)前36頁，總共62頁。（二）生長要求及培養(yǎng)特性生長要求在厭氧，加葡萄糖、血液或血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。當(dāng)前37頁，總共62頁。培養(yǎng)特性生長迅速，8min繁殖一代。血瓊脂形成灰白色、邊緣整齊的圓頂狀菌落或邊緣呈鋸齒狀的大菌落。大多數(shù)菌株可產(chǎn)生雙層溶血環(huán)。葡萄糖血清瓊脂灰白色，半透明，“勛章”樣的大菌落。厭氧肝湯培養(yǎng)5～6h即呈均勻渾濁，并產(chǎn)生大量氣體。當(dāng)前38頁，總共62頁。（三）生化特性最突出的是對(duì)牛乳培養(yǎng)基的“暴烈發(fā)酵”。當(dāng)前39頁，總共62頁。（四）分型該菌至少可產(chǎn)生20種外毒素，毒素以小寫希臘字母表示，其中α、β、ε和ι是主要致死毒素，其余為次要致死毒素和非致死性毒素。根據(jù)主要致死毒素與其抗毒素的中和試驗(yàn)可將此菌分為A、B、C、D和E5個(gè)型。當(dāng)前40頁，總共62頁。（五）致病性本菌致病的主要物質(zhì)是其產(chǎn)生的毒素。A型菌人氣性壞疽和食物中毒B型菌羔羊痢C型菌羊猝狙(struck)D型菌羊、牛的腸毒血癥E型菌犢牛、羔羊腸毒血癥當(dāng)前41頁，總共62頁。羊腸毒血癥:腸道漿膜、粘膜充血、出血當(dāng)前42頁，總共62頁。仔豬梭菌性腸炎，小腸嚴(yán)重出血當(dāng)前43頁，總共62頁。（六）微生物學(xué)診斷A型所致氣性壞疽的微生物學(xué)診斷，主要依靠細(xì)菌分離鑒定。其余各型所致的疾病，均系細(xì)菌在腸道內(nèi)產(chǎn)生毒素所致，診斷重點(diǎn)是作腸毒素檢查。當(dāng)前44頁，總共62頁。毒素檢查方法取回腸內(nèi)容物，加5～10倍滅菌生理鹽水稀釋，離心沉淀取上清液，即檢樣。檢樣分成兩份，一份不加熱，一份煮沸30min，然后分別靜脈注射家兔(1～2m1)或小鼠(0.1～0.3m1)。如不加熱組動(dòng)物死亡，加熱組動(dòng)物不死亡，證明有毒素存在。確定毒素的型，須進(jìn)一步做毒素中和保護(hù)試驗(yàn)。當(dāng)前45頁，總共62頁。中和試驗(yàn)方法將未煮沸的上清液分為4份，每份1ml，分別加入B、C、D型抗毒素及生理鹽水1ml，混合均勻后在37℃下作用40min，然后分別靜脈注射小鼠或家兔一組，觀察24h，記錄各組動(dòng)物的死亡及存活情況，判定菌型。此外，毒素檢查亦可用PCR技術(shù)。當(dāng)前46頁，總共62頁。（七）免疫防治

預(yù)防羔羊痢、猝狙、腸毒血癥以及仔豬腸毒血癥等，可用厭氧菌三聯(lián)苗或五聯(lián)苗。三聯(lián)苗（快疫-猝狙-腸毒血癥）五聯(lián)苗（羊快疫-猝狙-腸毒血癥-羔羊痢疾-黑疫）五聯(lián)菌苗免疫期，除對(duì)羊快疫較短外，對(duì)其它四病可達(dá)一年。當(dāng)前47頁，總共62頁。二、肉毒梭菌(C1.botulinum)肉毒梭菌是一種腐生性的G＋大桿菌，專性厭氧。該菌分布于土壤，海洋和湖泊的沉積物，哺乳動(dòng)物、鳥類和魚的腸道，飼料以及食品中。當(dāng)有適宜營養(yǎng)且獲得厭氧環(huán)境時(shí)，即可生長繁殖并產(chǎn)生肉毒毒素。人畜食入含此毒素的食品、飼料時(shí)即可發(fā)生肉毒中毒癥(botulism)。當(dāng)前48頁，總共62頁。（一）主要特性

1、形態(tài)染色革蘭氏陽性大桿狀，形成芽孢，有周鞭毛。

2、培養(yǎng)專性厭氧，產(chǎn)毒最適溫度25～30℃。

血瓊脂：直徑1～6mm不規(guī)則菌落，β溶血當(dāng)前49頁，總共62頁。當(dāng)前50頁，總共62頁。3、肉毒毒素肉毒毒素是一類鋅結(jié)合蛋白質(zhì)，具蛋白酶活性，性質(zhì)穩(wěn)定，是毒性最強(qiáng)的神經(jīng)麻痹毒素之一。該毒素可作用于膽堿能神經(jīng)末梢，阻斷乙酰膽堿的釋放，導(dǎo)致肌肉麻痹。當(dāng)前51頁，總共62頁。（二）細(xì)菌分型及所產(chǎn)毒素

菌型毒素類型最易感動(dòng)物毒素來源

AA人、雞、貂蔬菜、水果、肉、魚

BB人肉及肉制品、蔬菜、魚

CαC1、D水禽無脊椎動(dòng)物

CβC2、D牛、馬、貂、犬尸體、青貯飼料

DC2、D牛、綿羊小動(dòng)物尸體

EE人、魚類、野鳥魚及魚制品、魚塘污泥

FF人肝醬、魚根據(jù)毒素抗原性的差異，分為7個(gè)型。當(dāng)前52頁，總共62頁。（三）致病性

A、B型毒素：引起馬、牛、水貂等動(dòng)物飼料中毒和雞軟頸病。

C型毒素：主要引起禽類、馬、牛、羊以及水貂肉毒中毒癥。

D型毒素：是南非和澳大利亞牛、綿羊肉毒中毒的病因。

A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒。當(dāng)前53頁，總共62頁。（四）微生物學(xué)診斷主要是檢查肉毒毒素，定型用毒素中和試驗(yàn)。此外，也可用間接血凝試驗(yàn)或瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測毒素。當(dāng)前54頁，總共62頁。（五）免疫防治在動(dòng)物肉毒中毒癥常發(fā)地區(qū)，可用明礬沉淀類毒素作預(yù)防注射，有效免疫期可持續(xù)半年至一年，也可用氫氧化鋁或明礬菌苗接種。當(dāng)前55頁，總共62頁。三、氣腫疽梭菌(C1.chauvoei)

（一）病原性又名費(fèi)氏梭菌(Cl.feseri)，俗稱黑腿病桿菌，為氣腫疽的病原體。此病主要發(fā)生于幼牛(6個(gè)月～3歲)，通過消化道或創(chuàng)傷感染而發(fā)病，癥狀主要是在肌肉豐滿部位發(fā)生氣性水腫，觸診時(shí)有捻發(fā)音。受害肌肉常呈暗紅色到黑色，并常伴有跛行，故又稱為黑腿病(Blackleg)。當(dāng)前56頁，總共62頁。（二）診斷主要根據(jù)鏡檢、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)及動(dòng)物試驗(yàn)等。要注意與腐敗梭菌鑒別。（三）免疫防治菌苗有氫氧化鋁甲醛菌苗和明礬甲醛菌苗兩種。注射后14d能產(chǎn)生可靠免疫力，免疫期均為半年。當(dāng)前57頁，總共62頁。四、腐敗梭菌(CI.septicum)

又名腐敗桿菌、腐敗弧菌、惡性水腫桿菌