CpGODN的免疫刺激作用

CpGODN的免疫刺激作用第1頁(yè)/共33頁(yè)Th1免疫應(yīng)答慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫低下HBV免疫耐受，持續(xù)感染腫瘤微小殘留病的清除第2頁(yè)/共33頁(yè)CPG提高PBMC中Th1細(xì)胞第3頁(yè)/共33頁(yè)Th1占淋巴細(xì)胞百分比第4頁(yè)/共33頁(yè)CPG提高PBMC中Th1、Tc1細(xì)胞百分率***：與對(duì)照組比較，P<0.05

第5頁(yè)/共33頁(yè)CPG刺激BPMC分泌細(xì)胞因子**：與對(duì)照組比較，P<0.05

第6頁(yè)/共33頁(yè)CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細(xì)胞收集CPG活化的PBMC細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：效應(yīng)細(xì)胞為CPG活化的PBMC；靶細(xì)胞為CFSE預(yù)染的K562細(xì)胞。對(duì)照組效應(yīng)細(xì)胞為未經(jīng)CPG活化的PBMC。效：靶＝20：1，混合培養(yǎng)2h。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)靶細(xì)胞死亡率。第7頁(yè)/共33頁(yè)CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細(xì)胞第8頁(yè)/共33頁(yè)CFSE染色靶細(xì)胞濃度為5μmol/L的CFSE（2羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯）工作液取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的靶細(xì)胞濃度108/L細(xì)胞懸液與等體積CFSE工作液混合37℃孵育10min。離心洗滌兩次后懸浮細(xì)胞備用第9頁(yè)/共33頁(yè)CFSE染色靶細(xì)胞第10頁(yè)/共33頁(yè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

CpG活化PBMC對(duì)K562細(xì)胞的殺傷作用(N=5)CPG活化PBMC

16.85±5.14%對(duì)照組8.62±2.83%**：與對(duì)照組比較，P<0.05

第11頁(yè)/共33頁(yè)CIK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞第12頁(yè)/共33頁(yè)CIK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞第13頁(yè)/共33頁(yè)研究背景

通過(guò)主動(dòng)免疫、過(guò)繼特異性免疫、過(guò)繼非特異性免疫等方式，清除慢性乙肝患者體內(nèi)殘存的HBV，達(dá)到治療效果。第14頁(yè)/共33頁(yè)研究背景

B淋巴細(xì)胞具有抗原遞呈細(xì)胞的性質(zhì)，同時(shí)具有CpG-ODN受體：TLR-9。本研究探討CpG-ODN誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞成為高效APC，使之具有類(lèi)似于樹(shù)突狀細(xì)胞功能的可行性。第15頁(yè)/共33頁(yè)TOLL受體第16頁(yè)/共33頁(yè)TOLL受體在血細(xì)胞中的表達(dá)第17頁(yè)/共33頁(yè)活化B細(xì)胞負(fù)載核心抗原磁珠分選B淋巴細(xì)胞CPG活化B淋巴細(xì)胞核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡檢測(cè)抗原負(fù)載狀況第18頁(yè)/共33頁(yè)磁珠分選B細(xì)胞分選前B細(xì)胞7.89%

分選后B細(xì)胞89.6%

第19頁(yè)/共33頁(yè)活化B細(xì)胞負(fù)載抗原肽第20頁(yè)/共33頁(yè)活化B細(xì)胞負(fù)載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細(xì)胞負(fù)載HBcAg18-27肽

第21頁(yè)/共33頁(yè)APC與T細(xì)胞作用機(jī)制第22頁(yè)/共33頁(yè)CPG對(duì)B細(xì)胞抗原遞呈相關(guān)分子的作用研究CpG2006、2216由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，全硫代化修飾對(duì)照組為含10%FCS的RPMI1640＋外周血PBMC，細(xì)胞量107/孔，37℃、5%CO2、48小時(shí)實(shí)驗(yàn)組加入CpG2006或CpG2216，終濃度均為1umol/mL，余同上第23頁(yè)/共33頁(yè)CpG提高淋巴細(xì)胞CD69表達(dá)

T淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞

CD69表達(dá)率（%）***：與對(duì)照組比較，P<0.05

第24頁(yè)/共33頁(yè)B細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)對(duì)照組加CPG-ODN組加CPG-ODN組第25頁(yè)/共33頁(yè)CpG提高B細(xì)胞表面CD80、CD86的表達(dá)

CD80

CD86CD80、CD86表達(dá)率（%）*****：與對(duì)照組比較，P<0.05

第26頁(yè)/共33頁(yè)B細(xì)胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表達(dá)對(duì)照組加CPG-ODN組第27頁(yè)/共33頁(yè)CpG提高B細(xì)胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表達(dá)MHC-Ⅰ

MHC-ⅡMHC表達(dá)量（MFI）*****：與對(duì)照組比較，P<0.05

第28頁(yè)/共33頁(yè)活化B細(xì)胞誘導(dǎo)CTL負(fù)載了抗原的活化B細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)(含IL-2的RPMI1640培養(yǎng)液).收集細(xì)胞,以五聚體技術(shù)檢測(cè)HBV特異性CTL.實(shí)驗(yàn)組特異性CTL為0.50±0.19%，對(duì)照組為0.20±0.10%。

第29頁(yè)/共33頁(yè)特異性CTL誘導(dǎo)Pro5TMMHCPentamers檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組HBcAg18-27抗原特異性CTL（Q2-1區(qū)）。前者為對(duì)照組（未加APC），后者為實(shí)驗(yàn)組（加APC）。第30頁(yè)/共33頁(yè)結(jié)論CpG能夠活化B細(xì)胞，對(duì)T細(xì)胞無(wú)明顯的作用CpG能夠提高B細(xì)胞表面抗原遞呈相關(guān)分子的表達(dá)CPG誘導(dǎo)PBMC產(chǎn)生高水平的IFN-γCPG