分析化學(xué)色譜分析法

分析化學(xué)色譜分析法第一頁，共九十七頁，2022年，8月28日色譜法的分類和發(fā)展色譜過程和基本原理基本類型色譜方法及其分離機(jī)制色譜法基本理論第二頁，共九十七頁，2022年，8月28日高分離效能高靈敏高選擇性分析速度快應(yīng)用范圍廣色譜法的特點(diǎn):第三頁，共九十七頁，2022年，8月28日色譜學(xué)的重要作用諾貝爾化學(xué)獎：1948年，瑞典Tiselins，電 泳和吸附分析；1952年，英國馬丁(Martin)和辛格(Synge)，分配色譜。應(yīng)用的科學(xué)領(lǐng)域：生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán) 境科學(xué)等。（科學(xué)的科學(xué)）藥學(xué)（藥物分析）：各國藥典收載了許多色 譜分析方法。中國藥典二部，700多，純 度檢查、定性鑒別或含量測定，一部，600多鑒別或含量測定。第四頁，共九十七頁，2022年，8月28日第一節(jié)色譜法的分類和發(fā)展一、色譜法的分類按流動相的分子聚集狀態(tài)分類:

GC、LC、SFC等。按固定相的分子聚集狀態(tài)分類:

GSC、GLC、LSC、LLC等。第五頁，共九十七頁，2022年，8月28日按操作形式分類:

柱色譜法、平面色譜法、毛細(xì)管電泳法等。按色譜過程的分離機(jī)制分類:

分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法、空間排阻色譜法、毛細(xì)管電泳法等。第六頁，共九十七頁，2022年，8月28日毛細(xì)管電色譜法

（CEC）色譜法GSC液相色譜法（LC）柱色譜法平面色譜法毛細(xì)管電泳法

（CE）LLCLSCSECIECBPC紙色譜法薄層色譜法

（TLC）LLCLLCLSC氣相色譜法（GC）柱色譜法GLC超臨界流體色譜法

（SFC）第七頁，共九十七頁，2022年，8月28日二、色譜法的發(fā)展

（一）色譜法的歷史（二）色譜法的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢

1．新型固定相和檢測器的研制

2．色譜新方法的研究

3．色譜聯(lián)用技術(shù)

4．色譜專家第八頁，共九十七頁，2022年，8月28日第二節(jié)色譜過程和基本原理

一、色譜過程

實(shí)現(xiàn)色譜操作的基本條件是必須具備相對運(yùn)動的兩相，固定相(stationaryphase)和流動相(mobilephase)。色譜過程是組分的分子在流動相和固定相間多次“分配”的過程。第九頁，共九十七頁，2022年，8月28日第十頁，共九十七頁，2022年，8月28日色譜過程

組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)微小差異與固定相作用差異隨流動相移動的速度不等差速遷移色譜分離。第十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日二、色譜流出曲線和有關(guān)概念色譜流出曲線是由檢測器輸出的電信號強(qiáng)度對時間作圖所繪制的曲線，又稱為色譜圖。基線是在操作條件下，沒有組分流出時的流出曲線。基線反映儀器(主要是檢測器)的噪音隨時間的變化。色譜峰是流出曲線上的突起部分。正常色譜峰、拖尾峰和前延峰第十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日對稱因子fs

(symmetryfactor)

：衡量色譜峰的對稱性

第十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日到20頁到19頁第十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日保留時間(retentiontime;tR)：從進(jìn)樣到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時的時間間隔。死時間(t0)：分配系數(shù)為零的組分，即不被固 定相吸附或溶解的組分的保留時間。調(diào)整保留時間()：某組分由于溶解（或被吸附）于固定相，比不溶解（或不被吸附）的組分在柱中多停留的時間。

定性參數(shù)1第十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日定性參數(shù)2

保留體積(VR)：從進(jìn)樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時，所需通過色譜柱的流動相體積。死體積(V0)：由進(jìn)樣器至檢測器的流路中未被固定相占有的空間。固定相顆粒間間隙、導(dǎo)管的容積、檢測器內(nèi)腔容積的總和。第十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日定性參數(shù)3調(diào)整保留體積(adjustedretentionvolume)：由保留體積扣除死體積 后的體積相對保留值(r)

：兩組分的調(diào)整保留值之比注意：VR’是定值，tR’與FC成反比第十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日定性參數(shù)4

保留指數(shù)(retentionindex；I):在GC中，以正構(gòu)烷烴系列作為組分相對保留值的標(biāo)準(zhǔn)，用兩個保留時間緊鄰待測組分的基準(zhǔn)物質(zhì)來標(biāo)定組分，這個相對值稱為保留指數(shù)，又稱Kovats指數(shù)，定義式：z與z+n為正構(gòu)烷烴對的碳原子數(shù)，Z為6，7，8，I為600，700，800第十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日定量參數(shù)峰高(peakheight；h)：組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時的檢測信號，即色譜峰頂至基線的距離。峰面積(peakarea；A)：色譜曲線與基線間包圍的面積。返回第十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日返回柱效參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(standarddeviation；σ)：正態(tài)色譜流出曲線上兩拐點(diǎn)間距離之半，即0.607倍峰高處的峰寬之半。σ的大小表示組分被帶出色譜柱的分散程度。σ越大，組分越分散；反之越集中。半峰寬(W1/2)：峰高一半處的峰寬W1/2=2.355σ

峰寬

(peakwidth；W)：色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)作切線在基線上所截得的距離。

W=4σ

或W=1.699W1/2

第二十頁，共九十七頁，2022年，8月28日總分離效能指標(biāo)分離度(resolution；R)：又稱分辨率。是相鄰兩色 譜峰保留時間之差與兩色譜峰峰寬均值之比。第二十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日分離度設(shè)正常峰，W1≈W2=4σ

，則R=1.5時，99.7%面積(tR±3σ)被分開，?

tR=6σ

，稱6σ分離。第二十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日三、分配系數(shù)與色譜分離(一)分配系數(shù)和容量因子分配系數(shù)

(distributioncoefficient；K)是在一定溫度和壓力下，達(dá)到分配平衡時，組分在固定相(s)與流動相(m)中的濃度(C)之比。分配系數(shù)僅與組分、固定相和流動相的性質(zhì)及溫度（和壓力）有關(guān)。是組分的特征常數(shù)。第二十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日容量因子(capacityfactor；k)：在一定溫度和壓力下，達(dá)到分配平衡時，組分在固定相和流動相中的質(zhì)量(m)之比。（摩爾數(shù)？）又稱為質(zhì)量分配系數(shù)或分配比。分配系數(shù)與色譜分離還與固定相和流動相的體積有關(guān)。容量因子與分配系數(shù)的關(guān)系第二十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日分配系數(shù)與色譜分離（二）分配系數(shù)和容量因子與保留時間的關(guān)系tR=t0(1+k)tR=t0(1+K)v=L/tRu=L/t0第二十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日（三）色譜分離的前提KA≠KB

或kA≠kB

是色譜分離的前提。

=t0(1+KA

)

=t0(1+KB

)

tR=t0(KA－KB)tR≠0KA≠KBkA≠kB分配系數(shù)與色譜分離推導(dǎo)過程：第二十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日第三節(jié)基本類型色譜方法及其分離機(jī)制分配色譜法吸附色譜法離子交換色譜法空間排阻色譜法第二十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日一、分配色譜法第二十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日分配色譜法

分離原理

利用被分離組分在固定相或流動相中的溶解度差別而實(shí)現(xiàn)分離。溶質(zhì)分子在固定相中溶解度越大，或在流動相中溶解度越小，則K越大。在LLC中K主要與流動相的性質(zhì)(種類與極性)有關(guān)；在GLC中K與固定相極性和柱溫有關(guān)。第二十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日分配色譜法固定相又稱固定液（涂漬在惰性載體顆粒上的一薄層液體；化學(xué)鍵合相（通過化學(xué)反應(yīng)將各種有機(jī)基團(tuán)鍵合到載體上形成的固定相）。流動相

氣液分配色譜法：氣體，常為氫氣或氮?dú)?。液液分配色譜法：與固定相不相溶的液體。正相液液分配色譜：流動相的極性弱于固定相的極性。反相液液分配色譜：流動相的極性強(qiáng)于固定相的極性。第三十頁，共九十七頁，2022年，8月28日分配色譜法洗脫順序由組分在固定相或流動相中溶解度的相對大小而決定。正相液液分配色譜：極性強(qiáng)的組分后被洗脫。（庫侖力和氫鍵力）。反相液液分配色譜：極性強(qiáng)的組分先出柱。第三十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日二、吸附色譜法分離原理利用被分離組分對固定相表面吸附中心吸附能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。吸附過程是試樣中組分的分子(X)與流動相分子(Y)爭奪吸附劑表面活性中心的過程，即為競爭吸附過程。第三十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日吸附系數(shù)與吸附劑的活性、組分的性質(zhì)和流動相的性質(zhì)有關(guān)。第三十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日吸附色譜法固定相多為吸附劑，如硅膠、氧化鋁。硅膠表面硅醇基為吸附中心。經(jīng)典液相柱色譜和薄層色譜：一般硅膠高效液相色譜：球型或無定型全多孔硅 膠和堆積硅珠。氣相色譜：高分子多孔微球等第三十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日吸附色譜法流動相有機(jī)溶劑（硅膠為吸附劑）洗脫能力：主要由其極性決定。強(qiáng)極性流動相占據(jù)吸附中心的能力強(qiáng)，洗脫能力強(qiáng)，使k值小，保留時間短。Snyder溶劑強(qiáng)度o：吸附自由能，表示洗脫能力。o值越大，固定相對溶劑的吸附能力越強(qiáng)，即洗脫能力越強(qiáng)。第三十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日表16-1一些溶劑在硅膠上的o值溶劑

溶劑強(qiáng)度（o）溶劑

溶劑強(qiáng)度（o）正戊烷0.00甲基特丁基醚0.48正己烷0.00醋酸乙酯0.48氯仿0.26乙腈0.52二氯甲烷0.40異丙醇0.60乙醚0.43甲醇0.70第三十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日洗脫順序

ka=KaSa/Vm在色譜柱（Sa與Vm一定）時，Ka大的組分保留強(qiáng)，后被洗脫，Ka小的組分在吸附劑上保留弱，先被洗脫。Ka與組分的性質(zhì)（極性、取代基的類型和數(shù)目、構(gòu)型有關(guān)）。吸附色譜法第三十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日以硅膠為吸附劑：極性強(qiáng)的組分吸附力強(qiáng)。①飽和碳?xì)浠衔餅榉菢O性化合物，不被吸附。②基本母核相同，引入的取代基極性越強(qiáng)，則分子的極性越強(qiáng)，吸附能力越強(qiáng)；極性基團(tuán)越多，分子極性越強(qiáng)(但要考慮其他因素的影響)。③不飽和化合物的吸附力強(qiáng)，雙鍵數(shù)越多，吸 附力越強(qiáng)。④分子中取代基的空間排列第三十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日分離原理利用被分離組分離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。陽離子交換：陰離子交換：離子交換通式：33++RNR+OH-ClRNR+ClOH交換再生交換再生+3++RSOH+Na+Na+3HRSO三、離子交換色譜法第三十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日第四十頁，共九十七頁，2022年，8月28日離子交換色譜法交換反應(yīng)的平衡常數(shù)即選擇性系數(shù)：KA/B是離子對樹脂親和能力相對大小的度量，KA/B越大，A的交換能力大，越易保留。常選擇某種離子（如H+或Cl－）作參考。

KA、KB為A、B的分配系數(shù)。第四十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日離子交換色譜法固定相離子交換劑(ionexchanger)：離子交換樹脂（resin）和硅膠化學(xué)鍵合離子交換劑。離子交換樹脂:有網(wǎng)狀骨架及可離解、可交換基團(tuán)，如磺酸基(－SO3H)、羧基(－COOH)及季胺基(－NR3+OH－)等。性能指標(biāo)常用交聯(lián)度、交換容量和粒度等?；瘜W(xué)鍵合離子交換劑：鍵合在薄殼型和全多孔微粒硅膠上。用于HPLC中的固定相第四十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日離子交換色譜法流動相一定pH和離子強(qiáng)度的緩沖溶液，有 時也加入少量有機(jī)溶劑，如乙醇、四氫呋 喃、乙腈等，以提高選擇性。

第四十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日離子交換色譜法影響保留行為的因素被分離離子、離子交換 劑、流動相的性質(zhì)等(1)離子的電荷和水合半徑：價態(tài)高選擇性系數(shù)大。同價陽離子在酸性陽離子交換劑上,水合離子半徑,選擇性系數(shù)小。稀溶液中陽離子在強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂上的交換順序是：

Fe3+＞Al3+＞Ba2+≥Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Ni2+＞Cd2+≥Cu2+≥Co2+≥Mg2+≥Zn2+≥Mn2+＞Ag+＞Cs+＞Rb+＞K+≥NH4+＞Na+＞H+＞Li+

第四十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日離子交換色譜法常見陰離子在強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂上的交換順序通常為：檸檬酸根＞PO43＞SO42＞I

＞＞SCN＞＞Cl

＞＞CH3COO＞OH＞F保留順序？洗脫順序？第四十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日離子交換色譜法(2)離子交換劑的交聯(lián)度和交換容量:在一定的范圍內(nèi)樹脂的交聯(lián)度越大，交換容量越大，則組分的保留時間越長。(3)流動相的組成：交換能力強(qiáng)的離子組成的流動相有較強(qiáng)的洗脫能力。流動相的離子強(qiáng)度高，使組分的保留值降低。流動相的pH：溶質(zhì)的離解受到抑制則保留時間變短。弱離子交換樹脂的交換容量在某一pH值有極大值。第四十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日四、空間排阻色譜法分離原理

根據(jù)被分離組分分子的線團(tuán)尺寸進(jìn)行分離。

也稱為分子排阻色譜法。第四十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日空間排阻色譜法

根據(jù)空間排阻（stericexclusion）理論，孔內(nèi)外同等大小的溶質(zhì)分子處于擴(kuò)散平衡狀態(tài)：滲透系數(shù)：

Kp=Xs/Xm

（0＜Kp＜1

）

由溶質(zhì)分子的線團(tuán)尺寸和凝膠孔隙的大小所決定。在一定分子線團(tuán)尺寸范圍內(nèi)，Kp與分子量相關(guān)，即組分按分子量的大小分離。第四十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日空間排阻色譜法固定相多孔凝膠：軟質(zhì)、半軟質(zhì)和硬質(zhì)

主要性能參數(shù)平均孔徑排斥極限（Kp=0）：不能滲透進(jìn)入凝膠的任何孔隙最低分子量分子量范圍：排斥極限（Kp=0）與全滲透點(diǎn)（Kp=1）之間的分子量范圍圍。選擇凝膠時應(yīng)使試樣的分子量落入此范圍。第四十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日空間排阻色譜法流動相

要求：能溶解試樣、潤濕凝膠，粘度要低水溶性試樣選擇水溶液為流動相(稱為凝膠過濾色譜gelfiltrationchromatography；GFC)；非水溶性試樣選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑為流動相

(凝膠滲透色譜gelpermeationchromatography；GPC)。第五十頁，共九十七頁，2022年，8月28日空間排阻色譜法保留體積與滲透系數(shù)的關(guān)系

Vm≈V0分子線團(tuán)尺寸（分子量）大的組分，其滲透系數(shù)小，保留體積也小，因而先被洗脫出柱。第五十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日小結(jié)色譜過程方程式：分配系數(shù)大的組分保留時間長（保留體積大），晚流出色譜柱。第五十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日K在分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和凝膠色譜中，分別為狹義分配系數(shù)K、吸附系數(shù)Ka、選擇性系數(shù)KA/B和滲透系數(shù)Kp，Vs分別為色譜柱（或薄層板）內(nèi)固定液體積、吸附劑表面積、離子交換劑總交換容量和凝膠孔內(nèi)總?cè)莘e。小結(jié)第五十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日第四節(jié)色譜法基本理論

第五十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日要使R大，必須：

1、?tR大---?k大----熱力學(xué)

2、W小---峰展寬小---動力學(xué)第五十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日色譜理論包括兩方面:熱力學(xué)理論：研究分配(分離)過程，塔板理論（platetheory）。動力學(xué)理論：研究各種動力學(xué)因素對峰展寬的影響，速率理論（ratetheory）。第五十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日一、塔板理論

始于馬?。∕artin）和辛格（Synge）提出的塔板模型。分餾塔：在塔板上多次氣液平衡，按沸點(diǎn)不同而分離。色譜柱：組分在兩相間的多次分配平衡，按分配系數(shù)不同而分離。

第五十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日塔板理論假定：①在色譜柱內(nèi)每一“塔板”H內(nèi)，組分在兩相間瞬間達(dá)到分配平衡。②流動相間歇式進(jìn)入色譜柱，每次進(jìn)入一個塔板體積。③分配系數(shù)在各塔板內(nèi)是常數(shù)。④縱向擴(kuò)散可以忽略。第五十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日（一）質(zhì)量分配和轉(zhuǎn)移

1、單一組分B（kB=0.5）的分配和轉(zhuǎn)移①設(shè)色譜柱的塔板數(shù)n=5，即r=0、1、2、3、4（或n-1）號。②將單位質(zhì)量的B加到第0號塔板上。③分配平衡后，0號塔板內(nèi)ms/mm＝0.333/0.667。④進(jìn)入一個塔板體積的流動相（一次轉(zhuǎn)移），第五十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日第六十頁，共九十七頁，2022年，8月28日經(jīng)過N次轉(zhuǎn)移后，質(zhì)量分布符合二項(xiàng)式(ms+mm)N的展開式。如N=3，展開式為：(0.333+0.667)3=0.037+0.222+0.444+0.296

0123號在固定相和流動相中的質(zhì)量分布由k(K)決定第六十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日轉(zhuǎn)移N次后，第r號塔板中的質(zhì)量Nmr：

第六十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日例：轉(zhuǎn)移3次后，在第2號塔板內(nèi)的溶質(zhì)分?jǐn)?shù)第六十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日

組分B(kB=0.5)在n=5的色譜柱內(nèi)及出口的分布

Nr01234柱出口

010000010.3330.667000020.1110.4440.44500030.0370.2220.4440.2960040.0120.0990.2690.3950.198050.0040.0410.1640.3290.3290.13260.0010.0160.0820.2190.3290.219700.0060.0380.1280.2560.219800.0020.0170.0680.1700.1709000.0070.0330.1020.11410000.0020.0160.0560.068第六十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日注意：1、柱出口處的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的計(jì)算。2、質(zhì)量（濃度）最大點(diǎn)的N，即保留體積。第六十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日2、兩組分的分離A(kA=1)和B(kB=0.5)兩組分第六十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日

組分A(kA=1)在n=5的色譜柱內(nèi)和出口的分布

Nr01234柱出口

010000010.50.5000020.250.50.2500030.1250.3750.3750.1250040.0630.2500.3750.2500.063050.0320.1570.3130.3130.1570.03260.0160.0950.2350.3130.2350.07970.0080.0560.1650.2740.2740.118

80.0040.0320.1110.2200.2740.137

90.0020.0180.0720.1660.2470.137100.0010.0100.0450.0940.2070.124第六十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日結(jié)果：

組分B:k=0.5,當(dāng)N=6和7時，柱出口產(chǎn)生B的濃度最大點(diǎn)。組分A：k=1，N=8和9時，柱出口處達(dá)到濃度最大點(diǎn)。兩組分開始分離，k小的組分B在柱后先出現(xiàn)濃度極大值,即先出柱。第六十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日

一根色譜柱n=103以上，組分有微小的分配系數(shù)(容量因子)差別即可實(shí)現(xiàn)完全分離。 分配系數(shù)(容量因子)不等是分離的前提。第六十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日

(二)流出曲線方程

1.二項(xiàng)式分布曲線 以組分A在柱出口處的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對N作圖。第七十頁，共九十七頁，2022年，8月28日N柱出口001020304050.03260.07970.11880.13790.137100.124

k=1的組分從n=5色譜柱中的流出曲線圖第七十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日2.色譜流出曲線當(dāng)塔板數(shù)很大時，流出曲線趨于正態(tài)分布曲線。第七十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日第七十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日3、色譜流出曲線方程（正態(tài)分布方程） 描述組分流出色譜柱的濃度變化：為標(biāo)準(zhǔn)差，tR為保留時間，C為任意時間t時的濃度，C0為峰面積A，即相當(dāng)于某組分的總量。第七十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日t=tR時，C有極大值：Cmax即流出曲線的峰高h(yuǎn)。σ一定時，峰高h(yuǎn)取決于C0。C0一定時，峰高h(yuǎn)取決于σ。第七十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日流出曲線方程的常用形式：不論t＞tR或t＜tR時，濃度C恒小于Cmax。C隨時間t向峰兩側(cè)對稱下降。σ越小，峰越銳。σ是柱效的標(biāo)志。第七十六頁，共九十七頁，2022年，8月28日色譜峰面積以A代替C0，h代替Cmax，且W1/2=2.355σ，峰面積:A=hσ(2π)1/2A=1.065×W1/2×h色譜定量的參數(shù)第七十七頁，共九十七頁，2022年，8月28日(三)理論塔板高度和理論塔板數(shù)(heightequivalenttoatheoreticalplate或plateheight,H)(platenumber,n)是色譜柱效參數(shù)。第七十八頁，共九十七頁，2022年，8月28日理論塔板數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差（峰寬或半峰寬）和保留時間的關(guān)系：第七十九頁，共九十七頁，2022年，8月28日理論塔板高度

H=L/n

注意：1.計(jì)算n時使標(biāo)準(zhǔn)差（峰寬或半峰寬）和保留時間單位一致

2.n的單位第八十頁，共九十七頁，2022年，8月28日例在柱長2m、5%阿皮松柱、柱溫100℃、記錄紙速為2.0cm/min的實(shí)驗(yàn)條件下，測定苯的保留時間為1.50min，半峰寬為0.10cm。求該柱的理論塔板高度和每米的理論塔板數(shù)。第八十一頁，共九十七頁，2022年，8月28日每米理論塔板數(shù)為：2.4×103/2=1.2×103(m1)解：第八十二頁，共九十七頁，2022年，8月28日有效理論塔板數(shù)和有效理論塔板高度Hef=L/nef第八十三頁，共九十七頁，2022年，8月28日塔板高度的統(tǒng)計(jì)概念：

單位柱長引起的分子的離散度H=σ2/Lσ2＝HLσ是組分分子在色譜柱內(nèi)離散的度量σ2是總的離散程度，即單位柱長內(nèi) 分子離散的累積第八十四頁，共九十七頁，2022年，8月28日小結(jié)塔板理論解釋了流出曲線的形狀說明了組分的分配和分離過程提出了評價柱效的指標(biāo)但某些假設(shè)與實(shí)際色譜過程不符第八十五頁，共九十七頁，2022年，8月28日二、速率理論塔板理論的不足：組分在兩相中不可能真正達(dá)到分配平衡； 組分在色譜柱中的縱向擴(kuò)散不能忽略;

沒有考慮各種動力學(xué)因素對傳質(zhì)過程的影響； 無法解釋柱效與流動相流速的關(guān)系；不能說明影響