體外放射分析-4 體外分析的質(zhì)量控制教材課件

蔡華偉四川大學(xué)華西醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科第四節(jié)

體外分析的質(zhì)量控制Page

2什么是質(zhì)量控制？體外分析的基本目的是為了獲得真實準確的結(jié)果。理論上講，同一病人標(biāo)本樣品的分析物，無論在一次測定中的任何位置，無論重復(fù)測定幾次，甚或在不同實驗室所測得的結(jié)果應(yīng)該都是一致的，而且所測得的這個值應(yīng)該是該樣品的真值。但是，實際工作中，這種“完美”的測定是不可能達到的。質(zhì)量控制，就是為了盡可能的使同一實驗室，以及不同實驗室之間的測試結(jié)果接近標(biāo)準化，真實化。Page

3為什么臨床體外分析要做質(zhì)量控制？質(zhì)量控制是臨床檢驗的基礎(chǔ)質(zhì)量控制是臨床診斷的保證

質(zhì)量控制是學(xué)科發(fā)展的靈魂P(guān)age

4質(zhì)量控制的定義與作用體外分析的質(zhì)量控制，就是以合適的方法，來檢查、表示，和消除體外分析中來自試劑藥盒和測量體系的誤差，并使這種誤差降低到某一允許的水平，以保持和改進它們的質(zhì)量。它的具體作用是：1.檢查誤差的程度，決定測定結(jié)果的取舍；2.識別誤差的來源并消除其原因；3.改進測定的設(shè)計以提高檢測質(zhì)量Page

5質(zhì)量控制與誤差誤差即測定值與真實值之間的差異。系統(tǒng)誤差（systematicerror）通常表現(xiàn)為測定結(jié)果呈現(xiàn)出傾向性的偏高或偏低，是一些可以確定的因素所導(dǎo)致。隨機誤差（randomerror）這種誤差通常是由難以確定且無法控制的偶然因素引起，誤差的出現(xiàn)是隨機的，與真值的偏差是雙向的。Page

6質(zhì)量控制的類別內(nèi)部質(zhì)量控制一個實驗室內(nèi)，一個測定方法中產(chǎn)生的誤差，包括批間誤差和批內(nèi)誤差；一個實驗室內(nèi)，一種測定項目在不同方法（兩個藥盒）之間產(chǎn)生的誤差；外部質(zhì)量控制同一測定方法，在不同實驗室之間產(chǎn)生的誤差；一種測定項目用不同的方法（或藥盒）在各實驗室之間產(chǎn)生的誤差。Page

7質(zhì)量控制有關(guān)系統(tǒng)誤差的評價指標(biāo)Page

8（一）精密度（Precision）精密度，是指在一定條件下，同一試驗方法多次測定的結(jié)果之間的一致性。精密度評價測定方法或藥盒的基本參數(shù)為它們的重復(fù)性；醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)中，常用標(biāo)準差（SD）和變異系數(shù)（CV，Coefficientofvariation）來表示。Page

9標(biāo)準差，表示各個測定值與平均值的偏離程度，偏離程度越大，則平均值的代表性越小，精密度越低；偏離程度越小，則精密度越高，重復(fù)性越好。一般而言，批內(nèi)變異系數(shù)需小于5%，批間變異系數(shù)小于10%。放免測定中通常采用復(fù)管法，SD=二管之差/2.計算變異系數(shù)須對同一樣品做多份或多次測定，求得平均值X與SD后，CV=×100%SDX（一）精密度（Precision）Page

10精密度估測對某次實驗的精密度估測有兩種方法：反應(yīng)誤差關(guān)系（responseerrorrelationship）或平均變異系數(shù)（ABCV）RER=誤差均值/反應(yīng)均值

誤差均值為每份復(fù)管的SD均值，反應(yīng)均值為所有樣本測量計數(shù)的均值，一般RER小于0.04（或ABCV小于4%）。Page

11精密度圖（Precsiondoseprofile）免疫分析中測定反應(yīng)是非線性的，其不同濃度分析物的變異也是不一致的。Ekins提出，使用變異系數(shù)為縱坐標(biāo)，已知分析物濃度為橫坐標(biāo)，作圖表示整個試驗精密度。從上圖可見，在特定的方法學(xué)中，先是CV隨劑量增大而減小，到一定量后，CV又隨計量增大而增大，國際上一般以CV10%為界，在CV<10%以下的劑量范圍為高精密度的工作范圍。Page

12精密度圖的應(yīng)用建立方法時可以了解并確定該方法和藥盒的工作范圍。所有的測量方式，都是為精密地測定一定范圍內(nèi)的某物質(zhì)而設(shè)計的，被測物的量如超出該范圍，測定的精密度都會出現(xiàn)明顯降低；可比較不同方法或不同批次的工作范圍或精密度差異，以根據(jù)分析目的而選用合適的方法；在相同條件下，可比較不同操作者的操作水平；用作質(zhì)量控制中，需整批舍棄或僅個別剔除的測定值的比照。Page

13（二）準確度（Accuracy）體外分析中的準確度，是指測量值與真值的符合程度，其偏離真值的誤差，被稱為偏差（Bias）。準確度不僅取決于偏離度，也取決于精密度，在很多方面互相重疊。Ekins的精密度、準確度、偏差關(guān)系靶圖精密度高，準確度好精密度差，準確度較好精密度好，準確度差精密度差，準確度差SDSDSDBiasSDBiasPage

14準確度檢測偏差=真值－測定值/真值×100實際測定回收率測定在含有被測物的標(biāo)本中，加入不同量的標(biāo)準品后進行測定，比較其已知值和測定值的相符情況，以百分比表示?；厥章实钠谕翟?0-110%之間。健全性測定參考標(biāo)準所制備的劑量反應(yīng)曲線，與不同含量的待測樣品所制備的劑量反應(yīng)曲線應(yīng)當(dāng)具有平行的性質(zhì)，健全性測定可用被測物的高濃度血清做不同稀釋度的樣品，來觀測其測定值的線性關(guān)系。其測定結(jié)果在一直線上，說明健全性良好。Page

15質(zhì)量控制的分析指標(biāo)（三）靈敏度即檢測方法或試劑盒所能測出的被測物的最小濃度，實際取決于最小可測量的結(jié)合率和零標(biāo)準結(jié)合率之間的差別。

常用的測定最小檢測值的兩種方法：多管測定各標(biāo)準管的結(jié)合率后，一是以B/T值做劑量反應(yīng)曲線，以零管結(jié)合率均值減去2SD的結(jié)合率的劑量響應(yīng)值為最小可測量；采用B/Bo計算法繪制出劑量反應(yīng)曲線，B/Bo=90%時的劑量響應(yīng)值即最小可測量。Page

16對體外分析來說，發(fā)生結(jié)合反應(yīng)的配體和結(jié)合體的結(jié)合/離解常數(shù)，是影響體外分析的最主要原因，親和常數(shù)Ka越大，靈敏度越高；另一個影響檢測靈敏度的因素是定量的方法，相對而言，放射性計數(shù)的定量最為準確，其次是化學(xué)熒光定量，再次是酶免的可見光定量。影響體外分析靈敏度的主要因素Page

17質(zhì)量控制的分析指標(biāo)（四）特異性體外分析的特異性是指一種檢測方法或試劑盒專一地檢出某種特定物質(zhì)而不受樣品中其他物質(zhì)干擾的能力。（五）可靠性體外分析的可靠性即多次平行實驗所得結(jié)果的差別。（六）穩(wěn)定性體外分析的穩(wěn)定性，可通過分析標(biāo)準曲線的斜率和截距，零標(biāo)準管結(jié)合率的3點劑量值（ED75%,ED50%,ED25%），比較它們在有效期內(nèi)多次測量的變化情況。Page

18質(zhì)量控制中誤差的來源（一）系統(tǒng)誤差

體外分析的系統(tǒng)誤差主要來源于抗原、抗體、第二抗體等試劑和材料。（二）隨機誤差

體外分析的隨機誤差主要來自操作步驟中的加樣，B/F分離以及大批樣本測定中發(fā)生的“漂移”。Page

19體外分析的系統(tǒng)誤差主要來源于抗原、抗體、第二抗體等試劑和材料。試劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性對測定結(jié)果有直接的影響，上述試劑材料均具有可變性和易變性，就是待測樣品也可能因采集或貯存條件變化而影響測定結(jié)果。質(zhì)量控制中系統(tǒng)誤差的來源

在放射免疫分析系統(tǒng)中，抗體質(zhì)量的好壞是影響放射免疫分析的關(guān)鍵因素之一，一個高質(zhì)量的抗體要滿足以下幾點要求：抗體的質(zhì)量控制高特異性(Specificity)；高親和力(Affinityconstant)；高滴度(Titer)。Page

21隨機誤差的來源

1.加樣誤差——體外分析的手工操作部分主要是移液，加樣和分離，因此測定過程中任何一次移液不準均會造成精密度差。加樣的一致性是控制誤差的重要措施，除器材選擇外，加樣的手法仍是關(guān)鍵。2.分離誤差——分離步驟是體外分析中最容易引起誤差的部分。所有分離系統(tǒng)中多少都有錯分誤差(misclassificationerror)存在，即將B分到了F或反之。減少錯分誤差的方法：仔細選擇分離劑與分離參數(shù)；嚴格訓(xùn)練沉淀與上清的分離手法。Page

22隨機誤差的來源3.漂移——在一批測定中，會發(fā)現(xiàn)在測定的不同部分（如開頭和結(jié)尾）的測定值，由于測定系統(tǒng)的原因，常常出現(xiàn)一系列“漸進”的誤差，而使彼此的結(jié)果相差明顯；這種與時間相關(guān)的誤差，被成為“漂移”。漂移的原因：大批樣本測定管的作用時間差，操作人員和加樣器的疲勞，設(shè)備長時間計數(shù)中的電壓變化引起的計數(shù)漂移。Page

23批內(nèi)誤差與批間誤差的來源批內(nèi)誤差——移液不準；分離系統(tǒng)產(chǎn)生的錯分誤差；技術(shù)誤差；樣本預(yù)處理誤差；漂移。批間誤差——試劑變異，包括標(biāo)準品的變質(zhì)，抗血清的效價改變，標(biāo)記品衰變，緩沖體系改變等；操作條件的變化；批間標(biāo)準曲線的繪制；批內(nèi)精密度變化。Page

24實驗室內(nèi)部開展質(zhì)控措施后，將依據(jù)規(guī)定對某些數(shù)據(jù)進行舍棄或重復(fù)測定。1.統(tǒng)計并觀察劑量反應(yīng)曲線的正常波動范圍；2.復(fù)管測定，WHO建議，復(fù)管計數(shù)差>復(fù)管均數(shù)的10%者應(yīng)考慮舍棄；3.計算RER或ABCV，國際上一般認為0.04為界，若高于通常的3倍，應(yīng)考慮整批舍棄；質(zhì)量控制與結(jié)果的取舍Page

25質(zhì)量控制與結(jié)果的取舍4.繪制精密度圖，以復(fù)管測定為前提，凡個別管測定CV大于該計量正常CV的2倍者應(yīng)舍棄；5.應(yīng)用參考血清估計測定結(jié)果的偏離，WHO要求，一批實驗中，下列情況均應(yīng)考慮整批舍棄：a,3個質(zhì)控血清中有一個測定值超過3SD；b，3個質(zhì)控血清中有2個在同一方向上超過2SD；c，3個質(zhì)控血清在同一方向上超過1SD。Page

26質(zhì)量控制與結(jié)果的取舍Page

27實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制設(shè)備配置和技術(shù)要求所用設(shè)備，應(yīng)根據(jù)制定的評價標(biāo)準，在設(shè)備安裝和使用前應(yīng)驗證其性能達到標(biāo)準，并符合檢測要求。設(shè)備的建檔，唯一性標(biāo)識，并統(tǒng)一管理。設(shè)備必須編寫標(biāo)準操作規(guī)程（SOP）。計量器具和設(shè)備必須按規(guī)定分類進行定期和不定期的強制檢定與校準。設(shè)備必須按制造商建議進行定期維護和保養(yǎng)。Page

28實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制試劑、耗材的質(zhì)量保證試劑耗材的采購應(yīng)符合國家及單位規(guī)定，銷售單位必須保證資質(zhì)齊全。試劑耗材的驗收質(zhì)檢程序：外包裝，內(nèi)包裝，運輸過程。試劑耗材的保存管理需由專人按儲存要求存放并記錄。試劑耗材的使用必須在有效期內(nèi)使用，不同批號試劑不可混用。Page

29實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制方法學(xué)評價新的設(shè)備和檢測試劑使用前，設(shè)備重大維修及校準后，大型設(shè)備搬遷后，試劑配方出現(xiàn)調(diào)整等情況下，應(yīng)逐步進行方法學(xué)評價。定量檢測項目：準確度，精密度，靈敏度，線性范圍，臨床可報告范圍，生物參考區(qū)間。定型檢測項目：符合率，檢出限值。Page

30實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制分析前的質(zhì)量控制分析前階段包括檢測申請、患者準備及識別、原始標(biāo)本采集、運送及傳遞。體外分析實驗室應(yīng)當(dāng)為臨床提供檢測項目指南?；颊郀顟B(tài)及生物學(xué)變異對檢測結(jié)果有直接影響。標(biāo)本采集前必須認真核對患者信息。制定標(biāo)本采集手冊，標(biāo)本采集過程應(yīng)當(dāng)嚴格遵照采集手冊進行，并標(biāo)記采樣人及采集時間。標(biāo)本應(yīng)由專人運送并保證運送途中的安全，及時。標(biāo)本接收和存儲前應(yīng)進行信息核對及合格率統(tǒng)計。Page

31實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制分析中的質(zhì)量控制分析中使用的檢測程序或相關(guān)活動作業(yè)必須有現(xiàn)行有效的標(biāo)準操作規(guī)程。定量檢測分析項目中建議選用第三方質(zhì)控品，定型檢測項目應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控品。質(zhì)控品選擇原則：

基質(zhì)——盡量選擇人血清基質(zhì)；

穩(wěn)定性——開瓶有效期和凍干質(zhì)控品復(fù)溶后的有效期；

濃度和頻次——三級醫(yī)院每批24小時內(nèi)使用2個濃度水平質(zhì)控品，二級、一級醫(yī)院每批24小時內(nèi)使用一個濃度水平質(zhì)控品。Page

32實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制分析中使用的質(zhì)控品必須嚴格按照說明書步驟進行操作，與患者標(biāo)本在同樣條件下完成測定。完成質(zhì)控圖繪制，標(biāo)記分析儀器，方法學(xué)，檢測項目，試劑及批號，質(zhì)控品批號及有效期，質(zhì)控圖中心線及上下控制限，質(zhì)控結(jié)果及每個數(shù)據(jù)點時間，質(zhì)控人員、審核人員簽字。建立本實驗室中使用的明確質(zhì)控規(guī)則，建議使用多規(guī)則控制法，至少應(yīng)選取一個隨機誤差規(guī)則和一個系統(tǒng)誤差規(guī)則。Page

33實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制測定結(jié)果失控時質(zhì)量控制當(dāng)發(fā)生檢測結(jié)果失控時，應(yīng)根據(jù)SOP，對失控原因進行分析并采取措施，同時要檢查該失控對之前標(biāo)本檢測結(jié)果的影響。失控后，質(zhì)檢管理員應(yīng)報告質(zhì)控小組或質(zhì)量負責(zé)人。根據(jù)質(zhì)控規(guī)則按步驟尋找原因：立即重新測定同一質(zhì)控品；如繼續(xù)失控，使用新的質(zhì)控品重新測定；如繼續(xù)失控，進行儀器維護或更換在機試劑；如繼續(xù)失控，對儀器進行重新校準，再行測定；如校準后仍失控，與廠家聯(lián)系技術(shù)支持。失控期間患者結(jié)果處理：暫停失控項目檢測，已檢測報告暫停審核，待失控糾正后重測或抽樣驗證已測結(jié)果。Page

34實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制分析后的質(zhì)量控制管理建立相應(yīng)的檢測結(jié)果審核報告程序，對基本信息、項目結(jié)果完整性及技術(shù)性問題進行審核。審核人員資質(zhì)，三級醫(yī)院審核及結(jié)果發(fā)布者應(yīng)具有中級及以上技術(shù)職稱，二級醫(yī)院最好具備中級職稱，特殊情況下可選定在本崗位工作2年以上，工作經(jīng)驗豐富的人選，由科室質(zhì)量管理小組考核授權(quán)，并經(jīng)質(zhì)量管理部門認可。審核內(nèi)容應(yīng)包括：當(dāng)日/批室內(nèi)質(zhì)控狀態(tài)，儀器狀態(tài)；與患者特征和既往結(jié)果比較；是否與臨床診療信息相符；決定是否發(fā)送、復(fù)檢、危機值報告等決策。Page

35實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制檢測報告與危急值控制檢測報告內(nèi)容模板應(yīng)與臨床科室協(xié)商后確定，包括：單位名稱，實驗室名稱，患者基本信息及唯一識別號，檢測申請科室及申請人，臨床診斷，標(biāo)本來源與類型，標(biāo)本采集信息，標(biāo)本接收信息，檢測人、檢測時間、審核人，檢測方法，SI單位制的項目結(jié)果及異常標(biāo)示，生物參考區(qū)間，備注等。紙質(zhì)報告發(fā)布前應(yīng)考慮生物及輻射安全，發(fā)送后有簽收記錄留存；電子報告須記入日志。危急值應(yīng)由醫(yī)院醫(yī)務(wù)質(zhì)量管理部門組織臨床專家及實驗室聯(lián)合確定，包括危急值報告項目及范圍。Page

36實際臨床體外分析實驗室中的質(zhì)量控制室間質(zhì)量評價和比對有正式資格的體外分析實驗室必須定期參加省級以上臨床檢驗中心開展的室間質(zhì)量評價項目。實驗室應(yīng)對室間結(jié)果差異建立標(biāo)準分析和糾正措施。無正式室間質(zhì)量評價的項目，實驗室須定期（建議半年1次）進行評估，如與參考實驗室比對，交換樣本檢測，評估檢測結(jié)果與臨床診斷的一致性等。實驗室內(nèi)部組間比對，主要是為了驗證實驗室內(nèi)不同設(shè)備、不同地點、不同方法、不同人員檢測結(jié)果之間的可比性。