2020版生物新優(yōu)化浙江大一輪優(yōu)選習(xí)題：第十部分 生物技術(shù)實踐 課時訓(xùn)練31

學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精課時訓(xùn)練31微生物的利用課時訓(xùn)練第61頁

1.(2018浙江金麗衢十二校8月高三第一次聯(lián)考)某同學(xué)要從土壤中分離出能分解尿素的細菌，并統(tǒng)計單位體積土壤樣液的活菌數(shù)目。按照培養(yǎng)基的配方稱取，并將各種物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容、滅菌，制成固體培養(yǎng)基備用?；卮鹣铝袉栴}。(1）配制該培養(yǎng)基應(yīng)加入的凝固劑和顯色劑分別是，加入培養(yǎng)基的三角瓶需用蓋上后滅菌。

（2）培養(yǎng)分解尿素的細菌時,在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。采用的檢測方法是

。

（3）若要統(tǒng)計土壤樣品中尿素分解菌的數(shù)目，宜采用法接種，根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積,統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)目就能大約推測出樣品中的活菌數(shù)。一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10—4的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為24.6，則每升樣品中的活菌數(shù)是個.與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的菌體數(shù)較，其原因是

.

答案（1)瓊脂糖和酚紅(順序不可顛倒）封口膜（2)將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時間（或37℃恒溫箱中培養(yǎng)),觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(3)稀釋涂布平板2.46×109少由于兩個或多個細菌連接在一起,往往統(tǒng)計的是一個菌落或死菌未計入,故用此方法測得的細菌數(shù)偏低(其他合理答案也可）解析（1）從土壤中分離能分解尿素的細菌用尿素作為唯一氮源，凝固劑要加入瓊脂糖，顯色劑用酚紅。滅菌時三角瓶要用封口膜蓋住。（2）檢測培養(yǎng)基是否被污染，將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時間（或在37℃恒溫箱中培養(yǎng)),觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生,若沒有菌落出現(xiàn)，說明沒有污染。(3)稀釋涂布平板法可用于計數(shù)。由于兩個或多個細菌連接在一起，往往統(tǒng)計的是一個菌落或死菌未計入，故用此方法測得的細菌數(shù)偏低。稀釋109倍,接種0。1mL平板菌落平均值為24。6，則每升活菌數(shù)為2.46×109個.2.回答與微生物培養(yǎng)及應(yīng)用有關(guān)的問題.（1)對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌時,滅菌時間應(yīng)從時開始計時。對于不耐熱的液體培養(yǎng)基，一般可將其轉(zhuǎn)入G6玻璃砂漏斗中,采用方式可較快地進行過濾滅菌。

（2）與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的過程。某醋化醋桿菌培養(yǎng)基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇組成,其中甘露醇的主要作用是。

(3)為篩選胞外α-淀粉酶分泌型菌種，一般從(A.果園樹下B.肉類加工廠周圍C。米酒廠周圍D.枯樹周圍)獲得土樣,用無菌水稀釋,涂布到含有淀粉的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，一段時間后在培養(yǎng)基表面滴加碘液,可在菌落周圍觀察到透明的水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種，需挑選若干個比值大的菌落，分別利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)進行擴增。然后將培養(yǎng)液離心，取用于檢測酶活性。

（4)植物組織培養(yǎng)時,先配制MS培養(yǎng)基，再加入一定比例的植物激素，當(dāng)生長素相對較多時，可促進.

（5)植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是()A.接種環(huán)和鑷子B.三角瓶和廣口瓶C。發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基D.用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽答案（1)達到設(shè)定的溫度或壓力值抽濾（2）將淀粉分解成糖作為碳源（3)C水解圈直徑與菌落直徑上清液（4）生根（5)D解析（1)對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌時,滅菌時間應(yīng)從達到一定壓強(或自主設(shè)定的壓強或溫度值）時開始計時.對于不耐熱的液體培養(yǎng)基,一般可將其轉(zhuǎn)入G6玻璃砂漏斗中，采用抽濾方式可較快地進行過濾滅菌.（2)與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋,需增加將淀粉水解為糖的過程.某醋化醋桿菌培養(yǎng)基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇組成,其中甘露醇的主要作用是作為碳源，并維持反應(yīng)體系的滲透壓。（3)胞外α—淀粉酶分泌型菌種，主要存活在含有大量淀粉的場所,C項符合題意。微生物在選擇培養(yǎng)基上生長時，消耗相應(yīng)物質(zhì)，本題目中淀粉被水解消耗，會出現(xiàn)淀粉的水解圈,可通過判斷水解圈與菌落直徑比值確定菌種的分解能力,一般該比值越大,分解能力越強。該實驗獲取的是胞外α—淀粉酶,因此離心后取上清液用于檢測酶活性。(4)植物組織培養(yǎng)中生長素相對較多時，有利于生根,而細胞分裂素相對較多時,則有利于生芽。(5)高壓蒸汽滅菌常用于培養(yǎng)基、培養(yǎng)器材等的滅菌,而用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽則不能進行任何滅菌操作,否則會導(dǎo)致細胞死亡。3。飼養(yǎng)動物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質(zhì),很難被動物吸收利用,還影響對其他營養(yǎng)物質(zhì)的利用。若在飼料中添加植酸酶,則能催化其水解成為可以吸收利用的磷酸鹽等.以下是科研人員從作物根部土壤中分離出產(chǎn)植酸酶的菌株的過程示意圖。請分析回答下列問題.（1)為防止雜菌污染，要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿等進行,而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈狀態(tài)放置。

(2）接種以前進行的一系列稀釋操作,目的是在培養(yǎng)皿表面形成。根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積,統(tǒng)計平板上的就能大致推測出樣品中的活菌數(shù)。

(3）由于植酸鈣的不溶解性,使培養(yǎng)基中形成白色渾濁。產(chǎn)植酸酶的菌株會水解植酸鈣，菌落的周圍將形成透明的區(qū)域，根據(jù)透明區(qū)域的有無,可初步判斷該菌是否產(chǎn)植酸酶，實驗結(jié)果顯示A～E五種菌株中，是產(chǎn)植酸酶的最理想菌株。

（4）獲得目的菌以后，若要用于植酸酶的生產(chǎn),還需要進行。

答案（1)（高壓蒸汽）滅菌倒置(2）單個菌落菌落數(shù)(3)E(4)擴大培養(yǎng)解析(1）為防止雜菌污染，要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行（高壓蒸汽)滅菌處理，而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置,以防止污染.(2)接種以前對樣品進行稀釋的目的是在培養(yǎng)皿表面形成單個菌落；根據(jù)土壤樣品的稀釋倍數(shù)和接種稀釋液的體積,統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能大致推測出樣品中的活菌數(shù).（3）根據(jù)題意,菌落體積越小,透明圈越大，說明產(chǎn)植酸酶越多，故E是產(chǎn)植酸酶的最理想菌株。（4）獲得目的菌后,若用于植酸酶的生產(chǎn),還需要進行擴大培養(yǎng).4.自生固氮菌是一類能獨立固定氮氣的細菌,其中有些好氧種類能產(chǎn)生PHB(一種生物可降解的熱塑性塑料)?，F(xiàn)欲從活性污泥中分離、純化、篩選出高產(chǎn)PHB的固氮菌，操作流程如下,請回答下列問題。采集土樣→富集培養(yǎng)→分離、純化培養(yǎng)→初步篩選PHB固氮菌→篩選高產(chǎn)PHB固氮菌→保存?zhèn)溆茫?)富集培養(yǎng)時，為達到篩選自生固氮菌的目的,在配制培養(yǎng)液時不應(yīng)添加。培養(yǎng)時要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養(yǎng)，主要目的是為細菌的生長提供。

（2）篩選高表達菌株的方法之一是經(jīng)涂布分離獲得。進行分離、純化培養(yǎng)時,要先將培養(yǎng)基倒入中,制成平板,此時所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時有所不同，添加了一定量的.

(3)在純化過程中,在固體培養(yǎng)基上劃線時,下列操作正確的是。

A.接種環(huán)采用70%酒精滅菌B.接種時應(yīng)在酒精燈火焰附近進行C.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連D。劃線分離時，需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進行接種答案(1)含氮物質(zhì)(氮源)充足的氧氣（2）單菌落培養(yǎng)皿瓊脂（糖)(3)B解析(1）固氮菌能夠固定氮氣，因此培養(yǎng)該細菌時，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加含氮物質(zhì)。進行菌種擴大培養(yǎng)時，將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養(yǎng),主要目的是為細菌的生長提供充足的氧氣。(2）獲得高表達菌株的方法之一是經(jīng)涂布分離獲得單菌落。進行分離純化，需要先將培養(yǎng)基置于培養(yǎng)皿中，制備固體培養(yǎng)基平板,相比較液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中添加了一定量的凝固劑,由于本實驗中不能加入含氮物質(zhì)，因此凝固劑應(yīng)選擇瓊脂（糖）。(3)接種環(huán)采用灼燒滅菌,A項錯誤.接種操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進行,防止空氣中雜菌的污染,B項正確。劃線分離的目的是通過劃線，降低菌種密度，進而獲得單菌落,因此第一區(qū)不能與最后一區(qū)劃線相連,C項錯誤。劃線分離時，在培養(yǎng)基的表面上輕輕劃線,接種環(huán)不能深入到培養(yǎng)基中，D項錯誤。5.某村莊有一條小溪,近幾年由于上游幾家乳膠廠不斷向其中排放廢水,小溪變得不再清澈。某同學(xué)想測定該溪水中的細菌含量情況。回答下列問題。（1）先根據(jù)所學(xué)知識制備LB培養(yǎng)基。制備該培養(yǎng)基的步驟是計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，下列關(guān)于制備LB培養(yǎng)基的敘述,錯誤的是.

A。培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進行滅菌B。培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿C。熔化瓊脂時不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦D。滅菌時一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃,500g/cm2壓力下滅菌15min(2)該同學(xué)利用上述制備的培養(yǎng)基來檢測水樣中的細菌數(shù)量,他所選擇的分離方法應(yīng)是;該同學(xué)在接種前,隨機取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)了一段時間,這樣做的目的是。接種在超凈工作臺上進行,工作臺上實驗前一段時間需打開,實驗中需關(guān)閉的是（A.酒精燈B。照明燈C.紫外燈D.過濾風(fēng))。

（3）值得注意的是,他所選擇的這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往比實際細菌的數(shù)目要低,這是因為①；②。（不考慮實驗操作原因引起的細菌數(shù)目的變化）

（4）該同學(xué)欲將分離出的某種細菌臨時保藏,應(yīng)接種到試管的培養(yǎng)基上,等菌落長成后，放入冰箱低溫保藏。

答案(1)D（2)涂布分離法檢查平板滅菌是否徹底C(3)該方法只能統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，死菌無法統(tǒng)計當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落(4）斜面解析(1)高壓蒸汽滅菌一般滅菌條件是121℃，1kg/cm2滅菌15min,若是含有葡萄糖等易碳化的物質(zhì),則需要在121℃,500g/cm2下滅菌30min，D項錯誤。(2)涂布分離法可以用于菌種數(shù)量的檢測.在接種前，一般需準(zhǔn)備滅菌的空白平板先培養(yǎng)一段時間,主要目的是檢測平板是否滅菌徹底。紫外燈對生物體有傷害，進行倒平板、接種等操作時,需要關(guān)閉超凈臺上的紫外燈。（3）采用涂布分離法進行菌種的計數(shù)，通常會比實際數(shù)目偏低,主要原因是涂布分離法只能統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，死菌無法統(tǒng)計，并且當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落.(4）進行菌種的臨時保藏，需先將菌種接種在斜面上，然后在37℃下培養(yǎng)12～24h，最后置于4℃冰箱中保存。6.苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題。(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有.

(2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸,以達到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步，以便于菌落計數(shù)與分離.制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加.

(3)下圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中(填圖中序號）區(qū)域更易獲得單菌落.

答案（1）蛋白胨、苯酚（2)增加稀釋涂布凝固劑(瓊脂）(3）③解析本題考查土壤微生物的分離及計數(shù)。(1)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)一般都包括H2O、無機鹽、碳源、氮源，蛋白胨和苯酚中含有C元素，可作為碳源.(2）要富集該菌，應(yīng)提高苯酚含量。若菌落過于密集,說明稀釋倍數(shù)不夠,應(yīng)進一步稀釋，然后再涂布平板.制備固體培養(yǎng)基時需加入凝固劑瓊脂.(3)用平板劃線法接種菌體，隨劃線次數(shù)的增加，菌體數(shù)量逐漸減少，故③區(qū)域更易獲得單菌落。7?；卮鹋c微生物分離有關(guān)的問題。由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱,有人將地衣芽孢桿菌的α—淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過程如圖甲所示）。（1)圖甲中，①過程需要的酶有。為達到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以為唯一碳源。②③過程需要重復(fù)幾次，目的是進一步篩選純化獲得的酵母菌。

(2)某同學(xué)嘗試③過程的操作,其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示,該同學(xué)的接種方法是;推測該同學(xué)接種時可能的操作失誤是。

（3)上述工程酵母菌培養(yǎng)過程中,有關(guān)操作正確的是。

A.玻璃刮刀和接種環(huán)一樣,只需灼燒滅菌B。培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌C。倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進行D.獲得的菌種如果需要保存,可置于37℃恒溫保存答案（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶淀粉分解淀粉能力強(2）涂布分離法涂布不均勻（3）C解析(1）圖甲①過程表示基因表達載體的構(gòu)建,該過程先要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和質(zhì)粒,再用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來形成重組質(zhì)粒。普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉,所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基可以選出工程酵母菌。②③過程重復(fù)幾次的目的