菌種保藏技術(shù)

微生物發(fā)酵技術(shù)-菌種保藏原理及方法主講人:XXX菌種保藏原理及方法菌種保藏原理02菌種保藏方法03菌種保藏意義01菌種保藏原理及方法菌種保藏意義：首先是使菌種不致死亡，同時還要盡可能設(shè)法把菌種的優(yōu)良特性保持下來而不致向壞的方面轉(zhuǎn)化。菌種保藏原理及方法菌種保藏原理：1.

低營養(yǎng)2.

干燥3.隔氧4.低溫降低代謝速率或使細(xì)胞處于休眠狀態(tài)菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：1.斜面冰箱保藏法短期、過渡的保藏方法，方法簡便，用新鮮斜面接種后，置最適條件下培養(yǎng)到菌體或孢子生長豐滿后，放在4℃冰箱保存。原理：低溫。保存期：三個月到六個月。適用：普遍適用于各類菌種的傳代保藏。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：2.沙土管保藏法國內(nèi)常采用的一種方法。先將沙與土洗凈烘干過篩后，按沙與土的比例為(l－2)∶l混合均勻，分裝于小試管中，裝料高度約為1厘米左右，121°C間歇滅菌三次，滅菌試驗合格后烘干備用。一般沙用80目過篩，土用30－100目過篩。其次，將斜面孢子制成孢子懸浮液接入沙土管中或?qū)⑿泵骀咦庸蜗轮苯优c沙土混合，于干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱內(nèi)保存，簡便有效。原理：低溫、干燥、無營養(yǎng)。保存期：約為1-10年。適用：產(chǎn)孢子或芽孢的微生物，如：霉菌、放線菌。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：3.菌絲速凍法通?？刹捎酶视途z速凍法。先配百分之五十甘油溶液，121℃滅菌，再配菌體懸浮液，等體積混合。保藏溫度為-20℃，為避免微生物受損致死，需用甘油作為保護(hù)劑。原理：低溫。保存期：約10年。適用：不產(chǎn)孢子或芽孢的微生物。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：4.石蠟油封存法向培養(yǎng)成熟的菌種斜面上，倒入一層滅過菌的石蠟油，用量要高出斜面一厘米，然后保存在冰箱中。原理：低溫、缺氧。保存期：一到兩年左右。適用：可通用于不能利用石蠟油作碳源的細(xì)菌、霉菌、酵母等微生物的保存。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：5.真空冷凍干燥保藏法基本操作：先將微生物制成懸浮液，再與保護(hù)劑混合，然后放在特制的安瓿管內(nèi)，用低溫酒精或干冰，使其迅速凍結(jié)，在低溫下用真空泵抽干，最后將安瓿管真空熔封，并低溫保藏。保護(hù)劑一般采用脫脂牛奶或血清。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：5.真空冷凍干燥保藏法原理：在較低的溫度下（-15℃），快速將細(xì)胞凍結(jié)，并且保持細(xì)胞完整，然后在真空中使水分升華。微生物的生長和代謝都暫時停止，不易發(fā)生變異。保存期：一般5年左右。適用：對各種微生物都適用這種方法雖然需要一定的設(shè)備，要求亦比較嚴(yán)格，但由于該方法保藏效果好，所以國內(nèi)外都已較普遍地應(yīng)用。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：6.液氮超低溫保藏法（1）安瓿管要求加棉塞后滅菌，烘干后備用。（2）菌種準(zhǔn)備及分裝常用的保護(hù)劑為10％甘油。一般安瓿管的裝量為0.2-1mL。（3）凍結(jié)先把微生物從常溫降溫到0℃，再以每分鐘降低1℃的速度，一直降低到-38℃，然后才把裝有菌液的安瓿管放入液氮罐。（4）重新培養(yǎng)室溫或35-40℃水浴中迅速解凍，當(dāng)升溫至0℃時即可打開安瓿管。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：6.液氮超低溫保藏法原理：超低溫。-196℃，菌種的代謝活動已停止，化學(xué)作用亦隨之消失。保存期：最長，5-15年，甚至大于15年。適用：適用于所有微生物、動物和植物細(xì)胞的保存。適用范圍最廣的保藏法。尤其是一些不產(chǎn)孢子的菌絲體，用其它保藏方法不理想，可用液氮保臧法。菌種保藏原理及方法菌種保藏方法：7.活體保藏法即寄主保藏法。適用于一些難于用常規(guī)方法保藏的動植物病原體和病毒。米孢子保存：密封，4℃冰箱3-6個月；真空抽干后密封，保藏6-12個月。適用于霉菌的保藏。思考題