hbv分類醫(yī)學(xué)的課件資料

hbv分類醫(yī)學(xué)的課件資料第1頁/共27頁概要1、主要的類型2、世界性的分布3、在中國的分布4、現(xiàn)有的幾種實(shí)驗(yàn)室hbv感染模型第2頁/共27頁1、主要的類型HBV是肝臟DNA病毒屬的一位標(biāo)志性的代表。1、哺乳動(dòng)物肝臟DNA病毒感染人類的HBV可以分為八個(gè)基因型（以差別至少8%為依據(jù)）A、B、C、D、E、、F、G、H還有許多的亞基因型（以差別至少4%為依據(jù)）2、鳥類肝臟DNA病毒第3頁/共27頁具體的基因型（哺乳動(dòng)物的）圖片來自于WJGv13i1第24頁【白臂長臂猿】【猩猩】【大猩猩】【毛猴】【土撥鼠】【地松鼠】【北極松鼠】【土撥鼠】【地松鼠】【北極松鼠】【毛猴】【白臂長臂猿】【猩猩】地松鼠和土撥鼠只有8%的基因型差異第4頁/共27頁八種HBV（人）的基因型的區(qū)別基因型基因組長度開放閱讀框的差異A3221HBc插入氨基酸153和154B3215C3215D3182刪除preS1的1-11氨基酸E3212刪除preS1的11位氨基酸F3215G3248HBc插入12個(gè)氨基酸刪除preS1的11位氨基酸H3215第5頁/共27頁30000年前DHBV和它們共同的祖先，之后它們分離DHBV和它們共同的祖先，之后它們分離WBV和GSBV從HBV相互分離10000年前3000年前WBV和GSBV從HBV相互分離HBV和HBV的血清型相互分離根據(jù)HBV同義替代率為4.57×10-5位點(diǎn)每年推算得知第6頁/共27頁圖片來自于WJGv13i1第25頁【北京鴨】【灰短頸野鴨】【蒼鷺】【長毛鴨】【羅斯鵝】【雪白鵝】【白鸛】【Demoiselle鶴】【灰冠鶴】具體的基因型（鳥類動(dòng)物的）最遠(yuǎn)的基因型只有40%的同源性第7頁/共27頁【灰冠鶴】【羅斯鵝】【雪白鵝】【蒼鷺】【鸛】第8頁/共27頁2、世界性的分布第9頁/共27頁八種基因型分布的差異1、D1和D2、D3的分布是廣泛的，在東印度、南非和歐洲（塞爾維亞）都有發(fā)現(xiàn)。2、除了E和G其他的基因型都有亞基因型第10頁/共27頁3、HBV在中國第11頁/共27頁目的了解中國不同地區(qū)慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者中HBV基因型及基因亞型分布特點(diǎn)。方法從我國東部(山東、江蘇)、西部(新疆)、南部(廣東、廣西)、北部(吉林、北京)及中部(河南、河北)5個(gè)地區(qū)的9個(gè)省、自治區(qū)、直轄市收集735份慢性HBV感染者血清樣品,用本實(shí)驗(yàn)室建立的型特異性引物巢式聚合酶鏈反應(yīng)法(nPCR)檢測(cè)HBV基因型及基因亞型。第12頁/共27頁結(jié)果顯示在735份樣品中71.8%(528/735)為C型，C2亞型占94.0%(496/528),C1亞型占4.9%(26/528),C1+C2混合亞型占1.1%(6/528);10.3%(76/735)為B型，B2亞型占90.8%(69/76),B1亞型占5.3%(4/76),B1+B2混合亞型占3.9%(3/76)6.3%(46/735)為D型11.6%(85/735)為混合型C型樣品中,除西部新疆地區(qū)C型相對(duì)較少(31/116,26.7%)外,其他地區(qū)均以C型為主。D型主要分布在西部新疆地區(qū),占31.9%(37/116)。混合型在各地區(qū)均有發(fā)現(xiàn),但以西部和南部地區(qū)相對(duì)多見,分別占30.2%(35/116)和20.0%(22/110)。第13頁/共27頁結(jié)論結(jié)論我國HBV基因型和基因亞型的分布有明顯的地域性差異。除西部新疆地區(qū)以D型為主外,其他地區(qū)均以C型為主,且主要為C2亞型。B型中主要為B2亞型以上數(shù)據(jù)結(jié)果結(jié)論均引用自中國病毒病雜志2011.03第14頁/共27頁4、實(shí)驗(yàn)室用來研究乙肝感染的模型4.1靈長類動(dòng)物hhbv感染模型

barker等［2］首次報(bào)道黑猩猩感染hhbv（人乙肝病毒）模型實(shí)驗(yàn)獲得成功，研究中發(fā)現(xiàn)黑猩猩對(duì)四種亞型（adw、adr、ayw、ayr）hbsag陽性血清都可成功獲得感染，并在黑猩猩的血清中檢測(cè)出與接種物相同亞型的hbsag，其中以adr亞型的致病性較強(qiáng)。barker等［3］研究表明，恒河猴是最實(shí)用的hhbv易感動(dòng)物，但其敏感性低于黑猩猩。感染hhbv后的恒河猴，其血清中hbsag和hbvs呈陽性，但在急性期未出現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶異常升高和肝臟損害。張濤等［4］研究發(fā)現(xiàn)，獼猴感染hhbv后肝組織有類似人乙型肝炎的病理改變，免疫組化法與原位雜交法檢測(cè)結(jié)果相吻合。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，西里伯類人猿、palas猴，長尾黑顎猴、白臉猴、尤猴、新域猴、長臂猿、狒狒、卷毛猴、平頂猴、大猩猩及蜘蛛猴等均可用hhbv感染成功獲得乙型肝炎動(dòng)物模型，在它們體內(nèi)均可檢測(cè)出hbsag、抗hbs、抗-hbc、hbv-dna。第15頁/共27頁4.2鴨dhbv感染模型唐霓等［5］用不同日齡鴨接種dhbv建立急性和慢性感染模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性感染的形成與幼鴨免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善有關(guān)，即不同日齡的鴨肝細(xì)胞對(duì)dhbv易感性不同。姚云清等［6］用hbv-dna轉(zhuǎn)染的原代鴨肝細(xì)胞與dhbv感染的原代鴨肝細(xì)胞進(jìn)行比較，結(jié)果提示兩者的復(fù)制與表達(dá)相似。朱清靜等［7］用dhbv陽性血清反復(fù)攻擊成功獲得鴨乙型肝炎肝纖維化模型。鴨乙型肝炎并不能誘發(fā)肝細(xì)胞性肝癌，郝連杰［8］報(bào)道hans等經(jīng)過對(duì)鴨乙型肝炎病毒基因結(jié)構(gòu)的分析，證實(shí)鴨乙型肝炎病毒所有分離株中均存在一缺乏常規(guī)翻譯起始密碼子的x樣開讀框架，并不是沒有x基因。第16頁/共27頁4.3hbv部分片段的轉(zhuǎn)基因小鼠模型胡衛(wèi)江等［9］應(yīng)用受精卵原核顯微注射的方法，制備了含有2.0拷貝hbv

（adr亞型）基因組的轉(zhuǎn)基因小鼠，發(fā)現(xiàn)hbv基因在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)可以穩(wěn)定遺傳，并有病毒顆粒形成。劉紅等［10］采用受精卵顯微注射的方法，建立了hbv核心抗原（ayw亞型）轉(zhuǎn)基因小鼠模型，核心抗原基因能夠在小鼠肝臟中表達(dá)并可穩(wěn)定遺傳。金艷花等［11］采用原核顯微注射法將質(zhì)粒pcdna3.1-pres/st注射入小鼠受精卵雄原核，成功獲得了穩(wěn)定遺傳3′末端缺失的pres/s基因并表達(dá)pres2蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠，命名為c57-tgn（pres/st）smmu。訾曉淵等［12］研究發(fā)現(xiàn)，f5代c57-tgn（hbvadr2.0）smmu小鼠具有基因組中穩(wěn)定整合病毒dna，血清和肝組織中有病毒蛋白表達(dá)和病毒復(fù)制的特征，并具有一定的組織學(xué)變化。第17頁/共27頁4.4dna疫苗免疫h(yuǎn)bv轉(zhuǎn)基因小鼠模型

oka等［13］用單劑量質(zhì)粒ps及ps2-s

免疫30例hbv轉(zhuǎn)基因小鼠，導(dǎo)致了其中28例hbsag的清除；而hbsag蛋白疫苗在注射7個(gè)月之后，僅導(dǎo)致29例hbv轉(zhuǎn)基因小鼠中10例hbsag的清除，提示dna疫苗免疫效果較好（？）。schirmbeck等［14］用hbv-dna疫苗及hbsag重組蛋白疫苗免疫h(yuǎn)-2b小鼠及其同源hbv轉(zhuǎn)基因小鼠，未誘導(dǎo)出免疫反應(yīng)；但將免疫小鼠脾細(xì)胞轉(zhuǎn)輸入hbv轉(zhuǎn)基因小鼠，則可導(dǎo)致血清hbsag滴度下降，抗hbsag抗體產(chǎn)生，并誘導(dǎo)出ctl反應(yīng)，但未使肝臟hbsag轉(zhuǎn)基因表達(dá)得到控制。第18頁/共27頁4.5hbv免疫缺陷小鼠模型

brown等［15］將非腫瘤源性永生性人肝細(xì)胞株ihbv6.7移植到重組激活基因-2（rag-2）剔除鼠體內(nèi)，建立了長期hbv病毒血癥模型。ilan等［16］給正常小鼠高劑量射線全身照射以消除小鼠的免疫活性，再將嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷鼠的骨髓細(xì)胞移植給該鼠，最后將已感染hbv的人肝組織移植到該鼠肝臟，成功建立了與人自然感染hbv過程相似的hbv三聚體小鼠模型。第19頁/共27頁4.6大鼠hbv感染模型譚龍益等［21］將經(jīng)磷酸鈣沉淀的含3.2kb全序列hbv-dna的hbv-pcncx質(zhì)粒直接導(dǎo)入大鼠肝臟，成功建立了hbv感染模型，在該鼠血清中檢測(cè)到hbsag和hbeag，肝細(xì)胞中hbv-mrna及hbsag得到表達(dá)。wu等［22］將人肝細(xì)胞移植到有免疫活性的sd大鼠體內(nèi)，再接種hbv，成功建立了hbv感染模型，3w后即可在血清中檢測(cè)到hbsag含量穩(wěn)定上升，hbv-dna可至少持續(xù)60d；同時(shí)肝中出現(xiàn)hbv-rna，免疫熒光示成串的肝細(xì)胞含染色陽性的hbcag。蔣黎等［23］用與wu類似的方法成功建立了wistar大鼠乙型肝炎模型，人肝細(xì)胞型細(xì)胞角蛋白和hbsag在該模型肝組織中得到了表達(dá)。第20頁/共27頁4.7樹鼩感染hhbv的模型蘇建家等［24］給樹鼩接種hhbv的新鮮血清建立了樹鼩感染hhbv的模型，在樹鼩血清中可觀察到hbsag及dane顆粒。yan等［25］用樹鼩模型，進(jìn)行了黃曲霉毒素b1（afb1）攝入和hbv感染誘發(fā)樹鼩肝癌及其機(jī)制的系列研究，首次在樹鼩體內(nèi)證實(shí)了hbv與afb1有協(xié)同致肝癌作用。glebe等［26~27］用純化的hbv感染原代樹鼩肝細(xì)胞，可檢測(cè)出hbvcccDNA、hbvmRNA、hbcag、hbeag。第21頁/共27頁4.8其他模型hbv同屬于嗜肝病毒科的還有地松鼠肝炎病毒（gshv）、北極地松鼠肝炎病毒（agshv）、樹松鼠肝炎病毒（tshv）、雪鵝肝炎病毒（sghbv）、蒼鷺肝炎病毒（hhbv）、白鸛肝炎病毒（sthbv）等，其中研究地松鼠感染gshv的模型較多見［33］。第22頁/共27頁5、其他從肝細(xì)胞分泌完整的病毒顆粒到具有感染能力的HBV病毒顆粒感染肝細(xì)胞的全過程第23頁/共27頁1、直接或間接與肝細(xì)胞的特異性受體結(jié)合NTCP2、以胞吞的方式進(jìn)入肝細(xì)胞3、脫去包膜蛋白形成含有RCDNA的核心顆粒4、RCDNA脫蛋白化5、在此之前或同時(shí)核衣殼蛋白部分降解暴露核定位6、脫蛋白的RCDNA通過核孔復(fù)合體進(jìn)入核內(nèi)7、完全脫衣殼形成DP-DNA8、DP-DNA借助肝細(xì)胞的DNA聚合酶修復(fù)不完整的正鏈形成完整的雙鏈DNA9、雙鏈構(gòu)象改變成ccc10、初始cccDNA在拓?fù)洚悩?gòu)酶作用下解螺旋11、解旋后在解鏈酶作用下解雙鏈（？）第24頁/共27頁12、以負(fù)鏈為模板在肝細(xì)胞的RNA聚合酶作用下合成病毒的各種mRNA13、各種mRNA通過核孔復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中14、pgRNA的5‘的莖環(huán)結(jié)構(gòu)與HBV的DNA聚合酶結(jié)合15、包裹入核心顆粒蛋白16、在HBV的DNA聚合酶介導(dǎo)下復(fù)制負(fù)鏈，期間經(jīng)過5’到3‘的轉(zhuǎn)位合成17、P蛋白的RNA酶Ｈ降解pgRNA18、以負(fù)鏈為模板殘余的pgRNA的5’的核酸寡聚體與DNA負(fù)鏈內(nèi)部的接