優(yōu)選同步選修1專題5課題2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段(練)

選1專題5題2多酶式應(yīng)增DNA段練1．PCR擴(kuò)增前，需要將下列些物質(zhì)加入微量離心管中？（）①模板DNA②模板RNA③DNA解酶④耐高溫的DNA聚酶⑤引物⑥PCR緩液⑦脫氧核苷酸貯備⑧核苷酸貯備液A．④⑤⑥．①③④⑤⑥⑧C②③④⑤⑥⑦D①④⑥⑦⑧【答案】A【解析PCR擴(kuò)增要的條件是模板DNA、④耐高溫的聚合酶、⑤引物、PCR緩沖液、⑦脫氧核苷酸貯備液，A正。2.復(fù)溫度是影響PCR特異性的重要因素。變性后溫度快速冷卻至40~60℃可使引物和模板生結(jié)合。PCR的結(jié)果可不考慮原來(lái)解開的兩個(gè)模板鏈的重新結(jié)合，原因是（）A．物是人工合成的B．物為DNA聚酶提供了3’端C．入引物的量足夠多而模板數(shù)量少D．板鏈加熱解旋已經(jīng)變性不能再次結(jié)合【答案】C【解析PCR的果可不考慮原來(lái)解旋開的兩個(gè)DNA模板的重新結(jié)合原是引物為DNA聚酶提供了3’端.故C正確3.有PCR技術(shù)的說(shuō)法，不正確是（）A．是項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段核酸合成技術(shù)B．技的原理是DNA雙復(fù)制C．用PCR技術(shù)獲取目的基因前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D．?dāng)U中必須有解旋酶才能解開雙鏈DNA【答案】D【解析】A、PCR全稱聚合酶式反應(yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的片的核酸合成技術(shù)A正確；B、技以解開的雙鏈作為模版，利用的原理是DNA制B正；C、提是要有一段已知目的基的核苷酸序列以便合成引物C正；D鏈模版在熱作用下鍵斷裂成鏈DNA見該過(guò)程不需要解旋酶解開雙鏈DNA錯(cuò)誤．4.有PCR技術(shù)的說(shuō)法，不正確是（）

A．是項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段核酸合成技術(shù)B．技的原理是DNA雙復(fù)制C．用PCR技術(shù)獲取目的基因前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D．?dāng)U中必須有解旋酶才能解開雙鏈DNA【答案】D【解析】A、PCR全稱聚合酶式反應(yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的片的核酸合成技術(shù)A正確；B、技以解開的雙鏈作為模版，利用的原理是DNA制B正；C、提是要有一段已知目的基的核苷酸序列以便合成引物C正；D鏈模版在熱作用下鍵斷裂成鏈DNA見該過(guò)程不需要解旋酶解開雙鏈DNA錯(cuò)誤．5.引的作用是（）A.打D.NA.雙B.催化合成D.NA.子鏈C.提模板D.使D.NA.聚酶能夠從引物的3’端開始復(fù)制【答案】D【解析PCR技術(shù)的原理是D.NA.復(fù)，而D.NA.的制需要引物，其主要原因是D.NA.聚酶只能從3′端延伸D.NA.鏈因此，引物的作用是使D.NA.合酶能夠從引物的3’端開始復(fù)制。6.復(fù)溫度是影響PCR特異性的重要因素。變性后溫度冷卻至40℃～60℃可引物和模板發(fā)生結(jié)合。PCR的結(jié)果可不考慮原來(lái)解旋開的兩個(gè)模板鏈的重新結(jié),原因不包括（）A.由模板DNA比物復(fù)雜得多B.引和模板之間的碰撞結(jié)合機(jī)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于模板互補(bǔ)鏈之間的碰撞C.模鏈加熱解旋已經(jīng)變性不可再次結(jié)合D.加引物的量足夠多而模板鏈量少【答案】C【解析】復(fù)性的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)，解旋后DNA分變成單鏈，堿基序列未發(fā)生改變，冷卻后可以進(jìn)行復(fù)性，項(xiàng)誤。7.PCR過(guò)程細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)過(guò)程相比，主要有兩點(diǎn)不同，它們是（）①PCR過(guò)程需要的引物是人工合的單鏈或RNA②PCR過(guò)程不需要DNA聚酶③PCR過(guò)程中DNA的解旋不依靠旋酶，而是通過(guò)對(duì)反應(yīng)溫度的控制來(lái)實(shí)現(xiàn)的④PCR過(guò)程中不要解旋直接以雙鏈DNA模板進(jìn)行復(fù)制

A．④B．①②C．①③D②④【答案】C【解析】①PCR過(guò)程要的引物是人工合成的單鏈DNA①正確；②PCR過(guò)程需要耐高溫的DNA聚酶，②錯(cuò)誤；③PCR過(guò)中DNA的解旋不依靠旋酶而是通過(guò)對(duì)反應(yīng)溫度的控制來(lái)實(shí)現(xiàn)的③正確④PCR過(guò)中DNA不依靠解旋酶解旋，而是利用高溫解旋，然后以單鏈DNA為模板進(jìn)行復(fù)制，④錯(cuò)誤。故C正確。8.PCR技術(shù)下列說(shuō)法錯(cuò)誤的有幾項(xiàng)（）①?gòu)?fù)性的目的是使原來(lái)分開的DNA的條單鏈重新連接成雙鏈②PCR技術(shù)是擴(kuò)增完整的分③DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從5′端延伸DNA④DNA引物在細(xì)胞外可在聚酶的作用下合成A．一項(xiàng)B．有二項(xiàng)．有三項(xiàng)．有四項(xiàng)【答案】D【解析】全稱聚合酶鏈?zhǔn)綉?yīng)PCR技術(shù)一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的酸合成技術(shù)，原理是復(fù)，前提條件是要有一已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物，條件還包括模、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚酶Taq酶體過(guò)程有①高溫變性DNA解旋過(guò)程；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈擴(kuò)增中雙鏈解不需要解旋酶，溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。故D正確9.下關(guān)于PCR的述中，正確(①PCR是一種酶促反應(yīng)②引物決定了擴(kuò)增的特異性③擴(kuò)增DNA利用了熱變性的原理④擴(kuò)增的對(duì)象是氨基酸序列A．②④B．②③④．①③④D①②③【答案】D【解析技的概念是全為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)項(xiàng)生物體外復(fù)制特定DNA的核合技術(shù)，原理是復(fù)條是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對(duì)引物包括模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚酶Taq酶體程有①高溫變性DNA解過(guò)；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈擴(kuò)增中雙鏈DNA解不需要解旋，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開。

10.如表示細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)和胞外PCR增兩個(gè)過(guò)兩反應(yīng)過(guò)程的條件中相同的是（）A.模原C.酶D.量供應(yīng)【答案】B【解析】選項(xiàng)A模板同胞DNA復(fù)制以整個(gè)DNA分作為模板,PCR擴(kuò)卻以一段目的DNA作模板。選項(xiàng)B原料同均4種氧苷酸為原料。選項(xiàng)不相,胞DNA解旋需要解旋酶延伸需聚合酶等胞PCR擴(kuò)增通過(guò)高溫旋而不需要解旋延伸只需熱穩(wěn)定的Taq酶。選項(xiàng)能量應(yīng),胞內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程由ATP提能量,PCR擴(kuò)增主要由外界供能。11.重延伸PCR技是一種通過(guò)寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋模板多PCR增，從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長(zhǎng)片段的NA不同來(lái)源的DNA片拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。右圖是利用重疊延伸技術(shù)擴(kuò)增某目的基因的過(guò)程。其主要沒(méi)計(jì)思路是用具有互補(bǔ)配對(duì)片段的引物（圖中引物、引物別PCR獲得有重疊鏈的兩種DNA片，再在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸獲得目的基因。結(jié)合所學(xué)知識(shí)，分析下列問(wèn)題。（中的量影響著引與模板結(jié)合的穩(wěn)定性中G+C的量越高穩(wěn)性。（）在第一階段獲得兩種具有重疊片段DNA的過(guò)程中，必須將引物l、和引物3、4置不同反應(yīng)系統(tǒng)中，這是因________。（引l和物2組的應(yīng)系統(tǒng)和引物34組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均復(fù)制一次生________種雙鏈DNA分。（）引物1、引物2組的應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段形成圖示雙鏈DNA至要經(jīng)過(guò)________次復(fù)制。

（）若利用微生物擴(kuò)增該目的基因，其基本步驟包括：________、________、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取目的基因?！敬鸢福┰礁撸?）吸引物2和吸物3存互補(bǔ)配對(duì)片段，置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中它們會(huì)發(fā)生合而失去作用（）（）（）因表達(dá)載體的構(gòu)建

將目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞【解析）由于一個(gè)之有三個(gè)氫鍵，而一個(gè)A-T之間兩個(gè)氫鍵，所以引物中C+C含量高，引物與模板DNA的合就越穩(wěn)定（）從圖中可以看出，引物2和引物3應(yīng)的堿基之間可以進(jìn)行配對(duì)，所以如果將引物2和3放在一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中，則會(huì)引起引物2和的失效．（反系統(tǒng)中各自形成兩種分子于物1和物4形兩個(gè)與原DNA相的DNA分子，所以含有引物1和4的屬同一種DNA故總共形成三種分子．（）一次復(fù)制形成的兩個(gè)DNA分分別含有引物1引物2，圖中第一階段形成的DNA分同時(shí)具有引物1和引2，圖示雙鏈DNA子至少要經(jīng)過(guò)第二次復(fù)制才能形成．（）利用微生物擴(kuò)增該目的基因，需要將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，而導(dǎo)入受體細(xì)胞首先要將目基因與載體結(jié)合．12.近年來(lái)PCR技（聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里的一種常規(guī)手段原理是用DNA半保留復(fù)制試中進(jìn)行DNA人工復(fù)如圖短的時(shí)間內(nèi)DNA擴(kuò)增幾百萬(wàn)倍甚至幾億倍，使實(shí)驗(yàn)所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。(1)PCR技能把某一DNA片進(jìn)行擴(kuò)增，依據(jù)的原理是：。(2)加使DNA雙打開，這一是打開下使此鍵斷裂。

鍵，稱為，在細(xì)胞中是在

的作用(3)當(dāng)度降低時(shí)，引物與模板

端結(jié)合，在DNA聚酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成2個(gè)DNA分，此過(guò)程中加入四種脫氧核苷三磷酸的目的是，循的原則是。

(4)PCR技術(shù)必要條件，除了板、原料ATP、酶以外，至少還需要三個(gè)條.即：體環(huán)境適宜的

和。(5)PCR一要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可分為、、

三個(gè)步驟。【答案(1)DNA分具有雙螺旋構(gòu)和DNA子中堿基的互補(bǔ)配對(duì)(2)氫

解旋

解旋酶3)3’

既是原料，又能提供能量

堿基互補(bǔ)配對(duì)原(4)溫度

酸堿度變、退火和延伸【解析）PCR技又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA分子的核酸合成技PCR技術(shù)能把某一DNA片進(jìn)行擴(kuò)增，依據(jù)的原理是DNA分子具有雙螺旋結(jié)構(gòu)和DNA分子中堿基的互補(bǔ)配對(duì)。（）熱使