醫(yī)學(xué)微生物學(xué) 第25章 病毒感染的檢查方法與防治原則

第25章病毒感染的檢查方法與防治原則1

一、標(biāo)本的采取與送檢：

1.用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：采取急性期；防止病毒滅活；標(biāo)本處理：咽拭子、糞便需加雙抗、冷凍、快速，否則，放-70℃冰箱或液氮罐內(nèi)，或置50%甘油緩沖鹽水低溫冷凍保存。2.血清學(xué)診斷的標(biāo)本：雙份血清第一節(jié)病毒感染的檢查方法2（一）病毒的分離：三大培養(yǎng)方法二、病毒的分離與鑒定動(dòng)物接種：最早的病毒分離方法，目前用得不多雞胚培養(yǎng)：多用于流感病毒得分離細(xì)胞培養(yǎng)：最常用的病毒分離鑒定方法31.根據(jù)病毒的嗜性選擇敏感動(dòng)物與適宜的接種部位2.防止動(dòng)物體內(nèi)帶有的潛在病毒對(duì)分離病毒的干擾。動(dòng)物接種4絨毛尿囊膜接種—天花病毒、痘苗病毒；尿囊腔接種—流感病毒、腮腺炎病毒；羊膜腔接種—流感病毒卵白尿囊氣室羊膜腔卵黃囊

尿囊羊膜腔

卵白卵黃囊

氣室卵黃囊接種—嗜神經(jīng)病毒雞胚培養(yǎng)：用孵化9～14d的雞胚5病毒名稱接種部位雞胚胚齡（日齡）痘類病毒絨毛尿囊膜10～13流感、副流感、腮腺炎病毒尿囊9～11嗜神經(jīng)病毒卵黃囊5～8初次分離標(biāo)本羊膜腔10～1261.原代細(xì)胞：來源于動(dòng)物、雞胚或人胚組織細(xì)胞。2.二倍體細(xì)胞：在體外分裂50～100代后，仍保留2倍染色體數(shù)目的單層細(xì)胞如人胚肺WI－26、WI-38。3.傳代細(xì)胞：癌細(xì)胞如Hela細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來，能在體外持續(xù)傳代。細(xì)胞培養(yǎng)（組織培養(yǎng)）71.細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect，CPE）：培養(yǎng)的單層梭形細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落。正常細(xì)胞病變細(xì)胞病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)82.包涵體形成(inclusionbody)

病毒增殖后在宿主細(xì)胞內(nèi)留下的斑塊結(jié)構(gòu)。不同病毒包涵體在細(xì)胞內(nèi)的位置、大小形狀及染色性不同，如腺病毒包涵體在胞核內(nèi)嗜堿性；狂犬病毒包涵體（Negribody，內(nèi)基小體）在胞質(zhì)內(nèi)嗜酸性；麻疹病毒包涵體在胞質(zhì)和胞核內(nèi)嗜酸性?？捎糜诓《靖腥镜妮o助診斷。93.紅細(xì)胞吸附（heamabsorption）如流感病毒感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素（heamagglutinin，HA），具有吸附脊椎動(dòng)物（雞、猴等）紅細(xì)胞的能力。12435678M2M1NAHA10血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)：用于流感診斷。流感病毒培養(yǎng)液+CRBC

→紅細(xì)胞凝集→流感病毒（＋）流感病毒培養(yǎng)液+病人血清+CRBC→紅細(xì)胞不凝集，是為血凝抑制試驗(yàn)，測病人血清中抗體。114.干擾現(xiàn)象：某些病毒感染細(xì)胞后不出現(xiàn)CPE，但能干擾其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者特有的CPE。5.細(xì)胞代謝的改變：培養(yǎng)液pH值改變也是病毒的增殖指標(biāo)。12(二)病毒的數(shù)量與感染性測定

在單位體積測定感染性病毒的數(shù)量稱為滴定.常用的方法有蝕斑測定法和50%組織細(xì)胞感染量(ID50infectioudose).13(三)新分離病毒的鑒定1.病毒核酸類型的測定：用RNA酶、DNA酶2.理化性狀的檢測：大小及結(jié)構(gòu)、衣殼對(duì)稱類型、有無包膜等3.形態(tài)學(xué)觀察電子顯微鏡、免疫電子顯微鏡觀察4.血清學(xué)鑒定抗原抗體特異性反應(yīng)的原理5.基因測序最重要的方法14病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的初步鑒定肉眼可見指標(biāo)紅細(xì)胞吸附細(xì)胞代謝的改變病毒數(shù)量與感染性的測定

蝕斑測定ID50測定光鏡可見指標(biāo)免疫熒光與免疫酶法檢測

包涵體的檢查

細(xì)胞病變效應(yīng)cell15病毒感染的血清學(xué)診斷（雙份血清）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)免疫擴(kuò)散中和試驗(yàn)麻疹疫苗接種后效果觀察流感疫苗接種后效果觀察及流感流行病學(xué)調(diào)查HBV流行及感染狀況的調(diào)查測中和抗體16光鏡——包涵體電鏡——直接觀察病毒顆粒免疫熒光——查標(biāo)本中病毒抗原和抗體ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交SouthernblotPCRNorthernblot病毒感染的快速診斷檢測病毒核酸基因芯片技術(shù)（genechip）17PCR法18第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品1.滅活疫苗2.活疫苗3.重組載體疫苗4.亞單位疫苗二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品1.免疫球蛋白2.細(xì)胞免疫制劑19一、抗病毒化學(xué)制劑核苷類藥物:無環(huán)鳥苷為鳥嘌呤或脫氧鳥嘌呤核苷類似物，用于抗皰疹病毒；阿糖腺苷阻止DNA合成還可選擇抑制DNA聚合酶用于HSV、HBV等；疊氮胸苷為胸腺嘧啶類似藥，阻斷前病毒DNA的合成而抑制HIV的復(fù)制；

3‘-氮唑核苷（病毒唑）對(duì)RNA、DNA病毒的復(fù)制有抑制作用，用于流感病毒和呼吸道合胞病毒的感染；第三節(jié)病毒感染的治療20

（2）核苷類藥物的作用機(jī)制：抑制病毒基因復(fù)制模擬核苷成分摻人病毒基因組，合成異常的嘧啶分子摻人子代DNA中，使其結(jié)構(gòu)基因無法合成和表達(dá)從而抑制病毒復(fù)制；競爭病毒復(fù)制酶，從而抑制病毒復(fù)制；蛋白酶抑制劑：用于HIV的感染。阻止病毒脫殼復(fù)