醫(yī)科總醫(yī)院麻醉科9-文章全

脊髓背角p38MAPK活化在瑞芬誘發(fā)術后痛覺過敏中的作用1侯蕾娜鄧立琴辛婧媛宋鳳香 】目的探討脊髓背角磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)瑞芬誘發(fā)術后痛覺過敏中的作用。方法取鞘內置管成功的雄性SD大鼠40只，體重230-270g，采用數(shù)字表法將其隨機分為5組：對照組(C組)、術后切口痛組(I組)、瑞芬組（R組、p38MAPK特異性抑制劑SB203580組（S組）和SB203580的溶媒二甲基亞砜DMSO組（D組。C組、I組、R組大鼠鞘內分別給予NS10μL，S組和D組大鼠鞘內分別給予0.1%SB20358010μL和2%DMSO10μL；I組大鼠在1.5%異氟烷吸入麻醉下行右側跖底切口手術，C組大鼠不行右側跖底手術，其余三組均在瑞芬持續(xù)泵注下行右側跖底切開手術。采用熱輻射刺激儀和vonFrey纖維絲分別測定雙側后爪熱刺激縮爪潛伏期(PWL)及機械（PWT 與I組比較，R組、D組在術后4h、1d、2d、3d雙側跖底PWL、PWT值均降低，雙側脊髓背角p-p38MAPK表達增多；與R組比較，S組雙側跖底的PWT值、手術側跖底PWL值增高，雙側脊髓背角p-p38MAPK表達減少。結論脊髓背角p38MAPK活化可能參與了瑞芬誘發(fā)的術后痛覺過敏?！尽縫38絲裂原活化蛋白激酶；痛覺過敏；瑞芬；脊髓背角的患者術后劇痛難以控制導致術后并發(fā)癥和率的增加部分患者將發(fā)展為術后慢理性痛從而嚴重影響患者日后的生活質量1eye和Hod等23]了瑞芬敏化在瑞芬誘發(fā)痛覺過敏中起關鍵作用4各種性刺激通過信號傳導通路匯聚于絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-tivtdproteinkinae，)，使之成為中樞敏化的關鍵5，p38絲裂原活化蛋白激酶(p38K)是MAPK中重要可能具有重要作用67但在大鼠切口痛模型中瑞芬引起的術后痛覺過敏與脊髓p38MAPK是否相關，目前仍未闡明。本研究擬在大鼠切口痛模型基礎上通過疼痛行為學觀察并結合免疫組織化學方法來探討脊髓p38MAPK0001鼠40采用隨機數(shù)字法，將其分為5（n=8）:對照組(C組)、術后切口痛組(I組)、瑞芬組（R組、p38MAPK特異性抑制劑SB203580組（S組）和SB203580的溶媒二甲基亞砜（DMSO）組（D組。I組鞘內給予NS10μL，30min切口手術，R組、S組、D組分別鞘內注射NS10μL、0.1%SB203580（LCLaboratories公術司，）10μL、2%DMSO(試劑三廠)10μL，30分鐘后尾靜脈持續(xù)泵注瑞芬（批號：，宜昌人福藥業(yè)公司）10μg?kg-1?min-1，10分鐘后行右側跖底切開手術，持續(xù)泵注1小時。C組鞘內和鞘內置管及術后疼痛模型的參照文獻[8]介紹的方法，于L3，4椎間隙進 ，西安風華藥業(yè)）15μL，30秒右后爪進行準備后，從跖底近端0.5cm處向趾部作一長約1cm的切口，用口痛模型成功。疼痛行為學觀察測量每只大鼠的基礎值、造模后1h、4h、1d、2d、3d雙側參照Hargreaves等[10]的方法，采用PL-200全自動熱刺痛儀（泰盟科技有限公司），照射參數(shù)為50w/8v，關照強度為50%，為20S，以防組織損傷。參照文獻[11]介紹的方法用vonFrey（Stoelting公司，）垂直刺激跖底，刺激的力度為0.4、0.6、1.0、2.04.0、6.0、8.0和15.0g，采用序慣法測定,計算50%，脊髓pp38APKmg/kg）深麻醉下，4%多聚升主動脈灌注，取出大鼠的脊40μm檬酸修復劑修復使其抗原依次加入3%H22以消除內源性過氧化物酶活性羊液封閉后滴加抗兔一（1100SntaCruziothnology公司4oIgG（京中杉試劑公司各孵育15min然后DAB染色中間用0.1%PBS液3min*3PBS代替一抗，未見p-p38K5p-p38K的陽性細胞數(shù)。，統(tǒng)計學處理采用SPSS16.0析，P<0.051（P>0.05；與基礎值相比較，除C1h、4h、1d、2dPWL、PWT值均降低（P<0.05C，IPWL、PWT降低（P<0.05PWL、PWT（P>0.05（P<0.05，S（P<0.05（P>0.05（P<0.05，S（P<0.05，PWL（P<0.05（P<0.05（P<0.05；R與DPWL、PWT（P>0.051。2、各組大鼠脊髓背角p-p38MAPK表達的比較與C，IRSDp-p38MAPK陽性表（P<0.05，R（P<0.05（P>0.05；與R組和DS組雙側脊髓背角的p-p38MAPK陽性表達數(shù)明顯減少（P<0.05本研究通過疼痛行為學的觀察表明，瑞芬持續(xù)靜脈泵入不僅加重術側機尼誘發(fā)的痛覺過敏中起重要作用；鞘內給予p38MAPK特異性抑制劑可以減輕瑞芬誘發(fā)的雙側大鼠機械性和熱刺激痛覺過敏本研究進一步分析脊髓背角p-p38MAPK的表達，發(fā)現(xiàn)瑞芬可以引起脊髓背角p-p38MAPK表達增加，在此基礎上給予p38MAPK特異性抑制劑后，脊髓背角p-p38MAPK表達明顯減Cabanero等[12]研究表明，瑞芬引起的痛覺過敏呈劑量依賴性，本課題組前期研究表明，在炎性疼痛模型中，靜脈泵注瑞芬10μg?kg-1?min-1后，雙側后爪機械性痛閾降低表明此劑量的瑞芬均可誘發(fā)脊髓或脊上中樞敏化過尼鎮(zhèn)痛效果完善，呼吸抑制較輕，因此本實驗繼續(xù)選用此劑量的瑞芬。本研究結果表明，與IRD4h、1d、2d、3d的PWL、PWT值均降低，提示瑞芬誘發(fā)中樞敏化引起了術后機械性及熱刺激痛覺過敏，這也證實了本課題組的前期結果[4]。本研究I醉下行右側跖底切開手術，只出現(xiàn)了手術側的痛敏現(xiàn)象，說明手術引起局部組織損傷導致局部痛覺過敏R組和D組是在持續(xù)泵注瑞芬下行切口痛手術，不僅在手術側出現(xiàn)了比I明瑞芬誘發(fā)中樞敏化引起了術后機械性及熱刺激痛覺過敏，這與AngstMS、CampilloA、VirkMS等[13-15]的研究結果一致。D2%DMSO，它是p38MAPKR組和D組的疼痛行為學本研究結果表明鞘內給予p38MAPK特異性抑制劑可以減輕瑞芬誘發(fā)的術后痛覺過敏。性刺激可激活脊髓背角p38MAPK磷酸化，磷酸化的p38MAPK將活化磷酯酶A2( 2)從而導致了疼痛[16]。Yeong-RayWen等[17]研究表明，在切口痛模型基礎上給予p38MAPK抑制劑FR167653，其通過抑制白介素1、腫瘤壞死因子等可以減輕痛敏。龔琴等[18]研究證實，在大鼠切口痛模型基礎上單次鞘內給予SB20358010μL后，發(fā)現(xiàn)脊髓背角p-p38MAPK的表達明顯減少，原因可能是SB203580通過驗S組鞘內給予p38MAPK特異性抑制劑，大鼠雙側的PWT值、手術側PWL值較R組增高，說明p38MAPK抑制劑可以減輕瑞芬誘發(fā)的術后痛覺過敏。其可芬在此基礎上進一步激活p-p8MAPK，加重術后痛覺過敏。另一方面，持續(xù)泵注瑞芬可以激活N-甲基D-天冬氨酸（NMDA）受體，同時與中樞敏化有關的物質如谷氨酸P物質膽囊收縮素等隨之增加也可以激活NMDA受體，然而活化的NMDA受體可以觸發(fā)p38MAPK級聯(lián)反應[19]，誘發(fā)術后痛覺過敏。本研究免疫組化結果提示p-p38MAPK在瑞芬誘發(fā)的術后痛覺過敏中起著重要作用。Ip-p38MAPKC組增多，說明手術引起p-p38MAPK表達增加。但與C組相比，R組和D組雙側脊髓背角p-p38MAPK表達明顯增多，說明瑞芬誘發(fā)p-p38MAPK表達增加，而R組和D組雙側脊髓背角p-p38MAPKD組鞘內給予DMSO沒有對瑞芬誘發(fā)的痛覺過敏起到調節(jié)作用。與R組相比，S組雙側脊髓背角p-p38MAPK表達減少，說明p38MAPK特異性抑制劑可以減輕瑞芬p-p38MAPK表達減少，這與p-p38MAPK陽性細制藥給予后，p-p38MAPK表達的動態(tài)性，尚需進一步的研究。綜上所述，脊髓背角p38MAPK活化可能參與了瑞芬誘發(fā)的術后痛覺過參考文MacraeWA.Chronicpainaftersurgery.BrJAnaesth,2001,87(1):88-EvelyneC,JuanRG,RafaelM,etal.Opioid-inducedhyperalgesiainamurinemodelofpostoperativepain.Anesthesiology,2006,104(3):546-555.HoodDD,CurryR,EisenachJC.Intravenousremifentanilproduceswithdrawalhyperalgesiainvolunteerswithcapsaicin-inducedhyperalgesia.Anesth 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