醫(yī)藥健康原癌基因Pim在胰腺癌發(fā)生中的作用機制以及分子靶向治

醫(yī)藥健康原癌基因Pim在胰腺癌發(fā)生中的作用機制以及分子靶向治第1頁/共32頁Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機制以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物的開發(fā)報告內(nèi)容第2頁/共32頁Pim-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機制第3頁/共32頁p34p34p34p37p40KinaseDomainPim-1Pim-2Pim-3DeneenB.etal.MolCellBiol2003;23:3897MikkersH.etal.MolCellBiol2004;24:6104Pim-3

與惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)Pim基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代Pim-3是原癌基因。研究背景第4頁/共32頁Pim-3isaproto-oncogenewithserine/threoninekinaseactivity.FujiiCetal.IntJCancer.2005Mar20;114(2):209-18.Pim-3激酶是否與肝臟以外的其它臟器腫瘤發(fā)生有關(guān)？

我們聚焦在同是內(nèi)胚層來源的器官，胰腺。第5頁/共32頁NormalTissueCancerTissuesPim-3蛋白在人胰腺癌組織和胰腺癌細胞株中高表達PCI55PCI35α-Pim-3第6頁/共32頁Actin3643kDaWCL

Pim-3shRNA

NonScramblePim-3PCI55Pim-3siRNA干擾Pim-3蛋白表達，導(dǎo)致人胰腺癌細胞株細胞凋亡，從而降低細胞活力ScrambleshRNAPim-3shRNADNAContentNoshRNASubG1AnnexinVPim-3shRNAScrambleshRNAPim-3shRNAScrambleshRNANo-shRNAScrambleshRNAPim3shRNA

012345

876543210CellviabilityratioTimeafterpassage(days)****第7頁/共32頁Pim-1,Pim-2Pim-3?BadSer136＋SurvivalFactorPI3KAKTBad14-3-3SurvivalSer112Pim-1andPim-2CanInactiavtePro-apoptoticMolecule,Bad,byPhosphorylatingItsSerineResiduesApoptosisBadBcl-XL+Bcl-XL第8頁/共32頁Pim-3BadPim-3/BadPCI5520mmPim-3和

Bad

的相互作用a-Pim3HeLaa-Bada-IgGIP:

PCI35PCI55PCI552526kDaBadIgGBlot:anti-Pim3Blot:anti-Bad5036Pim-3IgGImmunoprecipitationwithanti-Pim-3Westernblottingwithanti-BadWashingwithStrippingbufferWesternblottingwithanti-Pim-3第9頁/共32頁Pim-3pBad112Pim-3/pBad112PCI35PCI5520mmPim-3和磷酸化Bad在細胞質(zhì)內(nèi)共定位第10頁/共32頁ActinBadpBad112pBad136pBad155

Pim-32626262643KDa36shRNA

NonScramblePim-3PCI55降低Pim-3蛋白表達可以減少Bad112磷酸化第11頁/共32頁小結(jié)（1）Pim-3對于難治性胰腺癌來說是一個很好的靶向治療分子第12頁/共32頁以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物開發(fā)第13頁/共32頁胰腺癌是我國十大惡性腫瘤之一

〉早期診斷困難

〉晚期患者手術(shù)治療5年生存率低于5%，發(fā)病率等于死亡率傳統(tǒng)的化學(xué)治療存在抗腫瘤能力低，殺傷指數(shù)過小，副作用大等缺點分子靶向治療具有特異性強，效果顯著，正常組織損傷小等優(yōu)點現(xiàn)有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性，而且容易產(chǎn)生耐藥性研究背景Pim-3作為藥物靶點，特異性更強。

第14頁/共32頁Pim-3與Pim-1具有高度的同源性（70%）和類似的生物功能推測Pim-3的立體空間結(jié)構(gòu)低分子化合物-Pim-3激酶復(fù)合物立體空間結(jié)構(gòu)從DrugBank和PubChem數(shù)據(jù)庫中篩選了23種類似低分子化合物低分子化合物的篩選選擇并合成了對Pim-3有高親和性的小分子化合物-蔓生百部堿（stemonamide）合成中間體蔓生百部堿是百部屬生物堿中的一種，其在中國和日本民間醫(yī)學(xué)中作為鎮(zhèn)咳藥。第15頁/共32頁合成順序：T-10>T-6,T-10>T-4>T-5,T-10>T-2>T-3蔓生百部堿合成中間體結(jié)構(gòu)第16頁/共32頁Pim-3Pim-1Pim-2T2,T5體外抑制Pim激酶活性第17頁/共32頁IC50(mmol/L)Pim-3Pim-1Pim-2

AKT-1AKT-2

T2T5T10AKT1/27892>2000nd9056>2000nd3350>2000nd1934>2000

>2000>200031.5872.47345462T-2和T-5抑制Pim激酶活性，卻不抑制AKT/PKB的活性第18頁/共32頁Timesaftertreatmentwithinhibitor(days)CellproliferationratioT-2T-5L3.6plT-10Miapaca-2T-2，T-5體外抑制人胰腺癌細胞株的細胞增殖第19頁/共32頁Celllinename T-2 T-5L3.6pl 6.6 26.1MiaPaca-2

5.9 22.9IC50(mmol/L)第20頁/共32頁過表達Pim-3可以部分逆轉(zhuǎn)由T-2引起的細胞活力下降RelativeOD450MiaPaca-2第21頁/共32頁T-2引起人胰腺癌細胞產(chǎn)生細胞凋亡第22頁/共32頁T-2抑制Pim-3激酶活性，阻止pBad112,減少Bcl-XL的表達，依賴細胞色素C和Caspase-3途徑導(dǎo)致細胞凋亡。-DMSOT-2+12h+48h+24hpBad112BadBcl-XLCytochromeCCleaved-caspase-3L3.6plActinpBad136Caspase-3Cdc25APIM-3pBad155第23頁/共32頁5X105L3.6plSubcutaneousinjection3615daysSacrify↓:Intraperitonealinjection151617181929303132332223242526(days)T-2(20mg/kg)T-2抑制裸鼠皮下胰腺腫瘤的生長第24頁/共32頁T-2引起裸鼠皮下胰腺腫瘤細胞凋亡和抑制細胞增殖第25頁/共32頁T-2抑制腫瘤新生血管形成**第26頁/共32頁

T-2對裸鼠血清中的一些生化指標(biāo)沒有影響DMSO(N=5)T2(N=5)20DMSOT2051015ALT(U/l)NSNa(mEq/l)144148152DMSOT2156160NS02468DMSOT2K(mEq/l)10NSDMSOT2Cl(mEq/l)0108112116120NS第27頁/共32頁

DMSO

T2

(n=5)

(n=6)Hematologicalparameters9.3±0.07

8.08±0.3349.88±3.06

46.72±1.9030.04±3.84

9.9±1.70＊84.2±1.90

81.17±1.100±0

0.17±0.070±0

0±013.40±1.83

16.67±1.002.40±0.46

2.00±0.15RBCPlateletsWBCNeutrophilEosinophilsBasophilLymphocytesMonocytes〔×106/ml〕〔×104/ml〕〔×103/ml〕〔%〕〔%〕〔%〕〔%〕〔%〕BALB/C裸鼠全血中白細胞正常值3.84±1.64〔×103/ml〕T-2抑制荷瘤小鼠全血中白細胞的數(shù)量增多，使其恢復(fù)到正常第28頁/共32頁蔓生百部堿可以作為設(shè)計Pim-3激酶抑制劑的先導(dǎo)化合物開發(fā)新藥，應(yīng)用臨床，為難治性胰腺癌提供新的治療方法小結(jié)（2）線粒體第29頁/共32頁謝謝！第30頁/共32頁）“和而不同”，多元發(fā)展。近年來，中醫(yī)藥在防治非典、禽流感和艾滋病方面發(fā)揮的獨特作用也證實了二者的有機結(jié)合，具有肯定的臨床療效。編輯本段東西方醫(yī)學(xué)交融（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）不管是中醫(yī)學(xué)還是西醫(yī)學(xué)，從二者現(xiàn)有的思維方式的發(fā)展趨勢來看，均是走向現(xiàn)代系統(tǒng)論思維，中醫(yī)藥學(xué)理論與現(xiàn)代科學(xué)體系（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）之間具有系統(tǒng)同型性，屬于本質(zhì)相同而描述表達方式不同的兩種科學(xué)形式?？赏诂F(xiàn)代系統(tǒng)論思維上實現(xiàn)交融或統(tǒng)一，成為中西醫(yī)在新的發(fā)展水平上實現(xiàn)交融慢性胃炎分類慢性胃炎的命名很不統(tǒng)一。依據(jù)不同的診斷方法而有慢性淺表性胃炎、慢性糜爛性胃炎、慢性萎縮性胃炎、慢性膽汁返流性胃炎、慢性疣性胃炎、藥物性胃炎、乙醇性胃炎等等。．慢性胃炎大體可分為三種類型：慢性肥厚性胃炎、慢性淺表性胃炎以及慢性萎縮性胃炎。慢性肥厚性胃炎在臨床上較為少見，一般也不會發(fā)生癌變。慢性淺表性胃炎主要是指胃粘膜的淺表性炎癥，這類炎癥主要表現(xiàn)為胃粘膜的固有膜寬度增大并伴有水腫，被炎癥細胞浸潤，但胃腺體多屬正常．這類胃炎在臨床上較多見，一般也不會發(fā)生癌變。只要經(jīng)過恰當(dāng)治療之后，炎癥可消退，但如治療不當(dāng)，往往可發(fā)展成萎縮性慢性胃炎．慢性萎縮性胃炎是指胃粘膜除有淺表性胃炎病變外，胃腺體明顯減少，脈管間隙擴大，胃粘膜層有全層性細胞浸潤，常伴有腸上皮化生，即胃型上皮變?yōu)槟c型上皮．這種性質(zhì)的慢性胃炎與胃癌的關(guān)系密切，特別是有腸上皮化生者更是如此．或統(tǒng)一的支撐點，希冀籍此能給（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）中醫(yī)學(xué)以至生命科學(xué)帶來良好的發(fā)展機遇，進而對醫(yī)學(xué)理論帶來新的革命。在胃鏡問世以前，胃炎的主要診斷依據(jù)是依靠臨床癥狀和上消化道鋇餐檢查。隨著纖維胃鏡的臨床應(yīng)用，特別是經(jīng)胃鏡對胃粘膜的活組織檢查，對越來越多的胃炎有了較明確的認識。1982年，國內(nèi)胃炎會議上根據(jù)國內(nèi)外經(jīng)驗，將慢性胃炎分為淺表性和萎縮性兩大類。而在淺表性胃炎的命名上，又常常使用病理、部位、形態(tài)等含義的詞，如“慢性疣狀胃炎”、“慢性出血性胃炎”、“慢性糜爛性胃炎”、“慢性膽汁反流性胃炎”等等。1990年8月，在澳大利亞悉尼召開的第九屆世界胃腸病學(xué)大會上，又提出了新的胃炎分類法，它由組織學(xué)和內(nèi)鏡兩部分組成，組織學(xué)以病變部位為核心，確定3種基本診斷