巴比妥與苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)靜藥物分析

廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室Contents基本結構與主要性質1鑒別試驗2特殊雜質檢查3含量測定4第一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質環(huán)狀丙二酰脲類化合物(一)基本結構第二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質典型藥物(Phenylbarbital)(barbital)第三頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質(Secobarbital)戊巴比妥(Pentobarbital)第四頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質第五頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質(一)基本結構酰胺鍵的水解酸性，與醛加成反應側鏈反應：雙鍵，苯環(huán)絡合反應與金屬離子反應紫外吸收第六頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質(二)主要性質性狀——白色結晶或結晶性粉末溶解度——微溶或極微溶于水，易溶于乙醇等有機溶劑鈉鹽易溶于水，難溶于有機溶劑1.弱酸性(pKa:7.3～8.4)＋第七頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質一級電離二級電離烯醇互變第八頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質2.水解反應第九頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質巴比妥鈉注射液不能預先配制進行加熱滅菌，須制成粉針劑，臨用時溶解。第十頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質3.與金屬離子反應a.與銀鹽的反應5,5－取代的巴比妥類藥物＋AgNO3Na2CO3可溶性的一銀鹽AgNO3二銀鹽白色沉淀巴比妥類藥物分子結構中含有酰亞胺基團,在碳酸鈉溶液中生成鈉鹽而溶解,因而可與硝酸銀反應第十一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室白色難溶性二銀鹽AgNO3Na2CO3滴加AgNO3Ag與銀鹽的反應用這種形式表示也是一樣的第十二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質3.與金屬離子反應b.與銅鹽的反應巴比妥類藥物在吡啶溶液中生成烯醇式異構體,可與吡啶試劑反應形成穩(wěn)定的配位化合物,產(chǎn)生類似雙縮脲的呈色反應第十三頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質3.與金屬離子反應b.與銅鹽的反應巴比妥類＋銅吡啶顯色巴比妥類——紫色或紫色沉淀硫巴比妥類——綠色第十四頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室水吡啶部分離子化＋有色配位化合物與銅鹽的反應用這種形式表示也是一樣的第十五頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質c.與鈷鹽的反應Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2異丙胺無水甲醇或乙醇第十六頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室d.與汞鹽的反應一、基本結構與主要性質巴比妥類藥物+汞鹽→白色↓（可溶于氨試液）第十七頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質4.香草醛反應(Vanillin)戊巴比妥鑒別：

取戊巴比妥10mg，加香草醛約10mg和硫酸2ml，混合后在水浴上加熱2min，顯棕紅色。放冷，小心加入乙醇5ml，即顯紫色并變成藍色。第十八頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質5.紫外吸收光譜特征λ(nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥類藥物的紫外吸收光譜ABC240nm255nmA.H2SO4液(0.05mol/L,未電離)緩沖液(一級電離)C.pH13NaOH液(1mol/L,二級電離)1,5,5-三取代巴比妥類藥物不存在二級電離，最大吸收波長不變。第十九頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室一、基本結構與主要性質3202802402000.80.50.2λ(nm)A238287304硫代巴比妥的紫外吸收光譜

A.HCl液(0.1mol/L)

B.NaOH液(0.1mol/L)6.薄層色譜行為特征第二十頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室7.顯微結晶一、基本結構與主要性質

藥物本身晶形反應產(chǎn)物晶形第二十一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室二、鑒別試驗(一)丙二酰脲類的鑒別試驗取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。取供試品約50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加銅吡啶試液1ml，即顯紫色或生成紫色沉淀。銀鹽反應銅鹽反應第二十二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室(二)測定熔點二、鑒別試驗

巴比妥類的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類藥物↓→過濾→洗滌→干燥→測熔點

(三)利用特殊取代基或元素的鑒別試驗

利用不飽和取代基的鑒別試驗(司可巴比妥鈉)

利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(苯巴比妥鈉)

硫色素反應(硫代巴比妥類)第二十三頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室二、鑒別試驗1.司可巴比妥鈉的鑒別I2褪色Br2KMnO4第二十四頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室二、鑒別試驗2.苯巴比妥的鑒別a.硝化反應

b.硫酸-亞硝酸鈉反應

苯巴比妥與NaNO2-H2SO4反應生成橙黃色→橙紅色c.甲醛-硫酸反應

苯巴比妥與甲醛-H2SO4反應生成玫瑰紅色環(huán)

區(qū)分苯巴比妥與不含芳環(huán)取代的巴比妥類藥物。第二十五頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室二、鑒別試驗3.硫代巴比妥類的鑒別——硫色素反應硫代巴比妥類與巴比妥類的區(qū)別以前第二十六頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室三、特殊雜質試驗(一)苯巴比妥ⅠⅡⅢ第二十七頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室三、特殊雜質試驗第二十八頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室三、特殊雜質試驗1.酸度中間體Ⅱ乙?；煌耆珪r，Ⅱ與尿素縮合產(chǎn)生的雜質Ⅱ苯基丙二酰脲酸性較強檢查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸攪拌1min，放冷，濾過后，取濾液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得顯紅色第二十九頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室2.乙醇溶液澄清度三、特殊雜質試驗檢查中間體Ⅱ、Ⅲ等乙醇中不溶物。

取本品1.0g，加乙醇5ml，加熱回流3min，溶液應澄清

3.中性或堿性物質(提取重量法,溶解度差異)

副產(chǎn)物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解產(chǎn)物不溶于NaOHT.S.而溶于醚分液漏斗NaOHT.S.乙醚H2O過濾干燥濾紙蒸發(fā)皿105℃1hr<3mg取本品1.0g乙醚，H2O洗3次濾液蒸干殘渣第三十頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室123含量測定銀量法Argentometry酸堿滴定法

Acid-basetitrationmethod紫外分光光度法uv第三十一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室(一)銀量法(Argentometry)巴比妥類藥物在適當?shù)膲A性溶液中,易與重金屬離子反應,并可定量地形成鹽,因而可用銀量法進行滴定.在滴定過程中,可以通過生成沉淀進產(chǎn)生的混濁指示滴定終點.但容易出現(xiàn)誤差.改用甲醇及3%的無水碳酸鈉溶劑系統(tǒng),采用Ag-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點,方法改善,為chp2010所用.四、含量測定第三十二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定(一)銀量法

(Argentometry)0.2g甲醇

40ml異戊巴比妥測定3%無水碳酸鈉電位滴定法(AgNO3)指示電極(Ag)參比電極(玻璃/甘汞)第三十三頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定(二)溴量法:溴過量,再用KI反應,再用硫代硫酸鈉滴定.

司可巴比妥鈉測定取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.05mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。第三十四頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定(三)酸堿滴定法(Acid-basetitrationmethod)

水-乙醇混合溶劑中滴定膠束水溶液中滴定非水滴定法第三十五頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定異戊巴比妥水—醇溶解麝香草酚酞NaOH淡藍色1.水-乙醇混合溶液第三十六頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室2.膠束水溶液四、含量測定正膠束反膠束H2O溴化十六烷基三甲基芐銨Cetyltrimethylbenzylammoniumbromide，CTMA氯化四癸基二甲基芐銨Tetradecyldimethylbenzylammoniumchloride，TDBA巴比妥類表面活性劑溶解麝香草酚酞指示劑NaOH滴定第三十七頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定3.非水滴定法

溶劑：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷、無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯、乙醇-三氯甲烷滴定劑：甲醇鈉（鉀）、氫氧化四丁基胺指示劑：麝香草酚藍,也可以用電位法指示終點第三十八頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定(四)紫外分光光度法

直接測定的UV法提取分離后的UV法第三十九頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定注射用硫噴妥鈉含量測定取裝量差異項下的內容物，混合均勻，精密稱取適量(約相當于硫噴妥鈉0.25g)，置500ml量瓶中，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5μg的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5μg的溶液。用1cm吸收池，于304nm波長處分別測定吸收度，以0.4%NaOH溶液作空白。根據(jù)每支的平均裝量計算。每1mg的硫噴妥鈉相當于1.091mg的C11H19N2NaO2S第四十頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室四、含量測定USP24法測定苯巴比妥含量巴比妥類藥物適量，加水使其溶解后，加酸酸化，用三氯甲烷提取巴比妥類藥物，三氯甲烷提取液加入pH7.2～7.5的緩沖液，振搖，分離棄去水相緩沖液層，再用氫氧化鈉自三氯甲烷中提取巴比妥類藥物，調節(jié)堿提取液的pH值，然后選用相應的吸收波長進行測定。提取后的UV分光光度法,消除干擾第四十一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室(五)HPLC法五、體內藥物分析第四十二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物的分析NNClH3CO1234567892’地西泮

(diazepam)

七元亞胺內酰胺環(huán)奧普唑侖奧沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OClH第四十三頁，共67頁。2.官能團與分析方法二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上氮原子具有堿性，苯基的取代使堿性降低，可與生物堿試劑反應，可進行非水滴定法測定；本品多為游離堿，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。定量UV吸收，用于含量測定環(huán)比較穩(wěn)定，在強酸性下水解，形成相應的二苯甲酮衍生物，可用于鑒別和比色測定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；鑒別芳伯胺基反應：氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反應

鑒別茚三酮反應：地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反應）鑒別硫酸熒光反應：本類藥物→加硫酸，在紫外燈下，呈熒光

鑒別含有氯元素：氧瓶燃燒第四十四頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室理化性質通常為白色或微黃色結晶或結晶性粉末；具有一定的熔點。一般不溶或極微溶于水，溶于丙酮或三氯甲烷等有機溶劑。具有弱堿性；水解性；UV吸收特性。第四十五頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、鑒別試驗

(一)化學鑒別試驗

1.沉淀反應

氯氮卓橙紅色沉淀

阿普唑侖

＋KBiI4

鹽酸氟西泮也生成橙紅色沉淀

氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，因此可以相互區(qū)別。阿普唑侖+遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。第四十六頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物2.水解后呈芳伯胺反應

氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。第四十七頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室地西泮

ChP（2005）[鑒別]（2）取本品20mg，用氧瓶燃燒法（附錄ⅦC）進行有機破壞，以5%氫氧化鈉溶液5ml為吸收液，燃燒完全后，用稀硝酸酸化，并緩緩煮沸2分鐘，溶液顯氯化物的鑒別反應（附錄Ⅲ）。3.分解產(chǎn)物的反應

本類藥物多為有機氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。第四十八頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第四十九頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物4.硫酸－熒光反應：苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。藥物硫酸稀硫酸地西泮黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖亮綠色天藍色硝西泮淡藍色藍綠色第五十頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室5.UV第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物藥物溶劑C(μg/ml)λmax(nm)A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282約0.23366－氯氮卓鹽酸(9→1000)7245、3080.65阿普唑侖鹽酸(9→1000)12264－鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2、284±2比值1.95~2.50362±2－氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2，307±2－奧沙西泮乙醇10229，315±2(較弱)第五十一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室

取本品，加硫酸甲醇溶液(1→36)制成每1ml中約含10ug的溶液，照紫外-可見分光光度法，在239nm、284nm與360nm的波長處有最大吸收，在239nm與284nm處的吸光度比值為1.95～2.50。UV法—鹽酸氟西泮(BP2005)IR法氯硝西泮——BP2005作為該品種唯一的鑒別方法IR法一般是USP首要的鑒別手段第五十二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別第五十三頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類藥物(四)TLC與HPLC硅膠G薄層板，苯－丙酮(3:2)為展開劑，稀硫酸噴霧，105℃干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點藥物Rf值斑點顏色*單一點樣混合點樣自然光254nm365nm地西泮0.800.78無色黃色(m)黃色(m)氯氮卓0.340.34無色藍紫色(s)藍紫色(w)艾司唑侖0.220.20無色灰紫色(m)藍紫色(m)硝西泮0.720.72黃色紫色(w)紫色(w)奧沙西泮0.490.52黃色亮灰藍色(s)亮灰藍色(s)*s,m,w分別表示熒光的強、中、弱第五十四頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室

有關物質檢查其檢查方法除了采用GC法（三唑侖）TLC法HPLC特殊雜質檢查第五十五頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室

1.地西泮中有關物質的檢查

地西泮在合成過程中因其副反應，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學結構不清的有關物質，可采用TLC法中的高低濃度對比法進行檢查。

2.氯氮卓中有關物質的檢查

USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關物質，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。TLC法第五十六頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室3.氯氮卓中有關物質的反相高效液相色譜法

色譜條件：色譜柱為250mm×2.6mm（i.d.）C18柱；n=3000；流動相為甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氫氧化鈉溶液調pH為6.0；流速為1ml/min;紫外檢測器波長為254nm。

檢測結果：氨基物（Ⅱ）的tR為12.0min、氧化物（Ⅲ）的tR為4.3min，痕量雜質（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）的tR為13.8、3.6、4.7min。第五十七頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室HPLC第五十八頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室Test鹽酸氟西泮中氟化物的檢查對照品溶液：精密稱取NaF221mg，置100ml量瓶中，加水20ml使溶解，加NaOH溶液(1→2500)1ml,

加水稀釋到刻度，搖勻，貯于密封的塑料容器內備用(每1ml相當于1mg的F-)。供試品溶液：取本品1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.25)溶解并稀釋到刻度，搖勻。電位法——氟離子選擇電極第五十九頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室測定法：取對照品溶液適量，加枸櫞酸鈉緩沖液

(pH5.25)分別制成每1ml中含1ug、3ug、5ug和

10ug的溶液；另取供試品溶液，置150ml塑料

瓶中，在攪拌下，用裝有氟離子選擇電極和

SCE系統(tǒng)的電位計，測定上述各溶液的電位,

根據(jù)不同的氟離子濃度(ug/ml)和相應電位值

(mv)，用半對數(shù)坐標紙繪制標準曲線，根據(jù)測得的供試品溶液電位，在標準曲線上求得氟離子含量，含量不得過0.05%。.為何要加枸櫞酸鹽緩沖液？第六十頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第六節(jié)含量測定

非水溶液滴定法

非水酸量法非水堿量法

紫外分光光度法對照品法吸收系數(shù)法高效液相色譜法第六十一頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析教研室第六節(jié)含量測定一、非水溶液滴定法當HA酸性較強時，反應不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸第六十二頁，共67頁。廣西醫(yī)科大學藥物分析