動物實驗基本操作技術3

動物實驗基本操作技術演示文稿2023/3/271當前1頁，總共85頁。2023/3/272動物實驗基本操作技術當前2頁，總共85頁。實驗動物的抓取與固定性別鑒定年齡的大致判斷妊娠檢查分組與編號本章主要內(nèi)容常規(guī)采血方法給藥途徑與方法麻醉方法處死方法當前3頁，總共85頁。一、大、小鼠的抓取固定第一節(jié)實驗動物的抓取與固定當前4頁，總共85頁。小鼠固定盒固定當前5頁，總共85頁。大鼠固定盒固定當前6頁，總共85頁。二、豚鼠的抓取固定法當前7頁，總共85頁。三、家兔的抓取固定法當前8頁，總共85頁。當前9頁，總共85頁。一、大、小鼠的性別鑒定第二節(jié)

性別鑒定當前10頁，總共85頁。Female

Male

二、兔的性別鑒定當前11頁，總共85頁。一、大、小鼠

1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第三節(jié)年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行當前12頁，總共85頁。日齡/d外觀形態(tài)特征10能聽到聲音9～11全身被白毛，門齒長出13～15眼皮張開，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨立生活當前13頁，總共85頁。當前14頁，總共85頁。當前15頁，總共85頁。當前16頁，總共85頁。當前17頁，總共85頁。當前18頁，總共85頁。當前19頁，總共85頁。2.根據(jù)體重鑒定日齡⑴小鼠日齡與體重的對應日齡/d初生51015202530體重/g1.84.06.011.015.021.021.0當前20頁，總共85頁。⑵大鼠日齡與體重的對應日齡/d初生10203040體重/g6～717～2535～5055～90100～150日齡/d50607080體重/g150～210170～240210～270240～320當前21頁，總共85頁。

二、豚鼠一般老年豚鼠牙齒和趾爪長，被毛稀疏無光澤，眼神呆滯，行動遲緩。而年輕豚鼠牙齒短白，爪短軟，眼睛圓亮，行動敏捷，被毛有光澤，且緊貼身體。同樣，也可根據(jù)體重來推斷大致年齡。同日齡豚鼠，雌性體重略高于雄性。與大鼠一樣，其體重受多種因素的制約。實驗對年齡要求比較嚴格時，必須由卡片記錄提供準確年齡。日齡/d

初生7203060體重/g60～80100～120150～200170～220240～300日齡/d90120180體重/g330～400400～470520～600當前22頁，總共85頁。

三、家兔家兔的門齒和爪隨年齡增長而增長，是年齡鑒別的重要標志。青年兔門齒潔白，短小，排列整齊；老年兔門齒暗黃，厚而長，排列不整齊，有時破損。白色家兔趾小基本呈紅色，尖端呈白色。1歲家兔紅色與白色長度相等；1歲以下，紅多于白；1歲以上，白多于紅。還可根據(jù)趾爪的長度與彎曲度來區(qū)別。青年兔趾爪較短，直平，隱在腳毛中，隨年齡的增長，趾爪露出于腳毛之外，而且爪尖鉤曲。另外，家兔皮薄而緊，眼神明亮，行動活潑的為青年兔；皮厚而松，眼神頹廢，行動遲緩的為老年兔。當前23頁，總共85頁。

五、犬 犬的年齡主要以牙齒的生長情況、磨損程度、外形顏色等情況綜合判定。仔犬在出生后十幾天即開始生出乳齒，2個月以后開始由門齒→犬齒→臼齒順序逐漸更換為恒齒，8～l0個月齒換齊。但犬齒需要1歲半以后才能長堅實。飼養(yǎng)場飼養(yǎng)的品種犬，可以根據(jù)記錄，明確了解年齡，而收購的雜種犬就無法知道確切年齡。實際中，可根據(jù)犬齒更換和磨損情況，估計犬的年齡。當前24頁，總共85頁。年齡

犬齒更換和磨損情況2個月以下僅有乳齒(白、細、尖)2～4個月更換門齒4～6個月更換犬齒(白，牙尖圓鈍)6～10個月更換臼齒1歲牙長齊，潔白光亮。門齒有尖突2歲下門齒尖突部分磨乎3歲上、下門齒尖突大部分磨平4～5歲上、下門齒開始磨損呈微斜面，并發(fā)黃6～8歲門齒磨成齒根，犬齒發(fā)黃、磨損9～10歲唇部、胡須發(fā)白10歲以上門齒磨損，犬齒不齊全，牙根黃，唇邊胡須全白當前25頁，總共85頁。第四節(jié)

妊娠檢查

雌性動物妊娠后會發(fā)生一系列的復雜變化。為了在配種以后能及時掌握雌性動物是否妊娠、妊娠的時間及胎兒和生殖器官的異常情況，采用臨床和實驗室的方法進行檢查，稱為妊娠檢查，又稱妊娠診斷(pregnancydiagnosis)。通過妊娠檢查，可以及時地對雌性動物加強護理或再次配種，以保護母體和胎兒的正常發(fā)育，避免胎兒早期死亡和流產(chǎn)及減少繁育時間的損失。妊娠檢查不但要求準確，且及早確診更為重要。當前26頁，總共85頁。外部檢查法摸胎法陰道檢查法直腸檢查法超聲波檢查法孕酮含量測定法青蛙試驗妊娠檢查方法有當前27頁，總共85頁。第五節(jié)

分組與編號

動物實驗之前，必須對實驗動物進行隨機分組和編號標記，這是做好實驗和實驗記錄的前提。一、隨機分組（一）當分為二組時例：設有雄性Wistar大鼠12只，按體重大小依次編為1，2，3，…，12號，試用完全隨機的方法，分為甲、乙兩組。分組方法：假設所產(chǎn)生的點是隨機數(shù)字表上第21行第31列的78，則從78開始，由上向下抄12個隨機數(shù)字，如下：當前28頁，總共85頁。

動物編號：123456789101112

隨機數(shù)字：78386957910374566826541

組別：乙乙甲甲甲乙甲甲乙乙甲甲現(xiàn)在以隨機數(shù)字的奇數(shù)代表甲組，偶數(shù)代表乙組，則編號為3、4、5、7、8、11、12號分入甲組，而1、2、6、9、10號分人乙組。因兩組數(shù)字不等，繼續(xù)用隨機方法將甲組多余的一只調(diào)整給乙組，從上面最后一隨機數(shù)字41，接下去抄一個數(shù)為62，以7除之(因甲組原分配7只)得6，即把原分配在甲組的第6個甲(即11號大鼠)調(diào)入乙組。當前29頁，總共85頁。

如果甲組多兩個，則接下去抄兩個數(shù)。分別以8，7除之，余數(shù)即指要調(diào)入乙組的第幾個甲，余此類推。最后各組的鼠數(shù)就相等了。調(diào)整后各組鼠的編號為：組別鼠的編號甲組3457812

乙組12691011當前30頁，總共85頁。(二)當分為三組時例：設有雄性的SD大鼠12只，按體重大小依次編為1，2，3，…，12號，試用完全隨機的方法，分為A、B、C三組。分組方法：假設所定的點是隨機數(shù)字表第40行17列的08，則從08開始，自左到右抄12個隨機數(shù)字：動物編號：123456789101112

隨機數(shù)字：082701501529393943796910

除3余數(shù)：201202001101

組別：BCABCBCCAACA

調(diào)整組別：B當前31頁，總共85頁。

以3除各隨機數(shù)字，若余數(shù)為l，即該鼠歸A組；余數(shù)為2，歸人B組；余數(shù)為3，歸入C組。結(jié)果A組為4只，B組為3只，C組為5只。C組多一只應調(diào)入B組。方法同上。仍采用隨機方法；從10后面接著抄，為61。除以5，余數(shù)為1，則將第一個C，即第2號鼠調(diào)入B組。調(diào)整后各組鼠的編號如下：組別鼠的編號

A組391012B組l246C組57811

對于將動物隨機分為四組或更多組原理基本一致當前32頁，總共85頁。

（三）當每個動物一組時：例：設有A，B，C，D，E，F(xiàn)代表的6只家兔，試用完全隨機法將其每只分為一組。分組方法：從隨機數(shù)字表上用鉛筆任指一點，若為第21行第17列的33，則從33向左抄用6個數(shù)字，然后分別以6，5，4，3，2，l除之。凡除不盡的，即將余數(shù)寫下。除盡的，寫余數(shù)時即將其除數(shù)寫下。如下：當前33頁，總共85頁。

隨機數(shù)字3346952687

除數(shù)654321

余數(shù)311121

隨機排列CABDFE

上列第一個隨機數(shù)字余數(shù)為3，意即將6個字母中列在第三位的字母C寫在該數(shù)下，第二個數(shù)宇的余數(shù)為1，即在剩下的5個字母列在第一位的A寫在該數(shù)字下面，余此類推。當前34頁，總共85頁。

二、編號標記方法實驗動物分組后，為了區(qū)分、觀察并記錄每個個體的反應情況，必須給每只動物進行編號標記。

1．體表顏料著色法一般對短期試驗的白色動物可用顏料涂搽被毛的方法標記。常用的涂染化學藥品有：紅色：0.5％中性紅或品紅溶液；黃色：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸酒精飽和液；咖啡色：2％硝酸銀溶液；黑色：煤焦油酒精溶液。當前35頁，總共85頁。

左前腿上部為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，

右側(cè)從前至后依次為7、8、9。用黃色表示個位數(shù)，紅色表示十位數(shù)。當前36頁，總共85頁。2．個體耳號標記法

3.個體斷趾標記法

4.耳號鉗標記法

5.掛牌法當前37頁，總共85頁。第六節(jié)

常規(guī)采血方法

一、大、小鼠的采血方法

1．頸靜脈或頸動脈采血

2．股靜脈或股動脈采血

3．心臟采血

4．尾部采血

5．眼眶采血

6．斷頭取血當前38頁，總共85頁。頸靜脈或頸動脈采血尾部采血當前39頁，總共85頁。心臟采血當前40頁，總共85頁。二、豚鼠的采血方法

1．耳緣剪口采血

2．心臟采血方法同大、小鼠。

3．股動脈采血方法同大、小鼠。

4．后肢背中足靜脈采血當前41頁，總共85頁。三、家兔的采血方法

1．心臟采血

2．耳中央動脈采血

3．耳靜脈采血當前42頁，總共85頁。

四、狗、貓的采血方法

1．后肢外側(cè)跗外靜脈、內(nèi)側(cè)隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血

2．股動脈采血

3.心臟采血同大、小鼠心臟采血

4．耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血當前43頁，總共85頁。

采血方法的選擇，決定于實驗目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細血管的血。當需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復多次，應自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。而研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動脈血液。當前44頁，總共85頁。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；采血用具有采用部位一般需要進行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預先加入抗凝劑。采血時要注意當前45頁，總共85頁。

部位

動物種類ａ．尾靜脈大鼠、小鼠ｂ．耳靜脈兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊ｃ．眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠d．舌下靜脈兔e．腹壁靜脈青蛙、蟾蜍f．冠、腳蹼皮下靜脈雞、鴨、鵝１．取少量血當前46頁，總共85頁。

部位

動物種類ａ．后肢外側(cè)皮下小隱靜脈狗、猴、貓ｂ．前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈狗、猴、貓ｃ．耳中央動脈兔ｄ．頸靜脈狗、貓、兔ｅ．心臟豚鼠、大鼠、小鼠ｆ．斷頭大鼠、小鼠ｇ．翼下靜脈雞、鴨、鴿、鵝ｈ．頸動脈雞、鴨、鴿、鵝２．取中量血當前47頁，總共85頁。

部位

動物種類ａ．股動脈、頸動脈狗、猴、貓、兔ｂ．心臟狗、猴、貓、兔ｃ．頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊ｄ．摘眼球大鼠、小鼠３．取大量血當前48頁，總共85頁。動物種類最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴15604.最大安全采血量與最小致死采血量當前49頁，總共85頁。第七節(jié)

給藥途徑與方法

在動物實驗過程中，應根據(jù)不同的實驗目的、動物種類、藥物類型來決定動物的給藥途徑與方法。動物的給藥方法主要分為注射法和投入法兩種，不同方法按給藥途徑又分為很多具體類型。注射法分為：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、靜脈注射、關節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。投入法可分為：鼻腔內(nèi)投入、胃腔內(nèi)投入、腸管內(nèi)投入、氣管內(nèi)投入和經(jīng)口腔投入。以下將各種動物的主要給藥途徑和方法做一介紹。當前50頁，總共85頁。

（一）皮下注射注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。（二）皮內(nèi)注射皮內(nèi)注射時需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。當前51頁，總共85頁。

（四）腹腔注射用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推

0.5～1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。當前52頁，總共85頁。

（五）靜脈注射

1．兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠端刺入，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。當前53頁，總共85頁。2．小白鼠和大白鼠一般采用尾靜脈注射，操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細針頭，使針頭與靜脈平行（小于30℃），從尾下四分之一處（約距尾尖2～3厘米）處進針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復注射，應盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。當前54頁，總共85頁。3．狗狗靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。注射前由助手將動物側(cè)臥，剪去注射部位的被毛，用膠皮帶扎緊（或用手抓緊）靜脈近端，使血管充盈，從靜脈的遠端將注射針頭平行刺入血管，待有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。當前55頁，總共85頁。注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）當前56頁，總共85頁。

（六）經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準確，適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動物。

1．小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃時將灌胃針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。動物應固定成垂直體位，針插入時應無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應立即停止進針或?qū)⑨槹纬?，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當灌胃針插入小鼠3～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2～

1ml，大鼠1～4ml，豚鼠為1～5ml。當前57頁，總共85頁。2．狗、兔、貓、猴

灌胃時，先將動物固定，再將特制的擴口器放入動物口中，擴口器之寬度可視動物口腔大小而定，如狗的擴口器可用木料制成長方形，長約10～

15cm，粗細應適合狗嘴，約2～3cm，中間粘一小孔，孔的直途為5～10cm。灌胃時將擴口器放于上述動物上下門牙之后，并用繩將它固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導管（如導尿管），經(jīng)擴口器上的小圓孔插入，沿咽后壁而進入食道，此時應檢查導管是否正確插入食道，可將導管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認為此導管是在食道中，未誤入氣管，即可將藥液灌入。當前58頁，總共85頁。

給狗、兔灌胃時，可不用擴口器：狗灌胃時，用12號灌胃管，左手抓住狗嘴，右手中指由右嘴角插入，摸到最后一對臼齒后的天然空隙，胃管由此空隙順食管方向不斷插入約20cm，可達胃內(nèi)，將胃管另一端插入水中，如不出氣泡，表示確已進入胃，而沒誤入氣管內(nèi)，即可灌入。兔灌胃時，將兔固定在木制固定盒內(nèi)左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14號細導管，由右側(cè)唇裂避開門齒，將導管慢慢插入，如插管順利，動物不掙扎，插入約15cm時，即表示插入胃內(nèi)，將藥液注入。各種動物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.5～1.0ml，大鼠4～7ml，豚鼠為4～7ml，家兔為80～150ml，狗為200～500ml。當前59頁，總共85頁。

（七）其它途徑給藥

1．呼吸道給藥呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等癥狀存在藥物或毒氣，均需要通過動物呼吸道給藥。如一般實驗時給動物乙醚作吸入麻醉，給動物吸一定量的氨氣、二氧化碳等觀察呼吸、循環(huán)等變化；給動物定期吸入一定量的SO2。鋸末煙霧等可造成慢性氣管炎動物模型等；特別在毒物學實驗中應用更為廣泛。

2．皮膚給藥為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定藥液涂在皮膚上，藥液經(jīng)皮膚吸收。當前60頁，總共85頁。3．脊髓腔內(nèi)給藥此法主要用于椎管麻醉或抽取腦脊液。家兔椎管內(nèi)注射方法：將家兔作自然俯臥式，盡量使其尾向腹側(cè)屈曲，用粗剪將第七腰椎周圍背毛剪去，用3%碘酊消毒，干后再用79%酒精將碘酒擦去。在兔背部髕骨脊連線之中點稍下方摸動第七腰椎間隙（第七腰椎與第一骶骨椎之間），插入腰椎穿刺針頭。當針到達椎管內(nèi)時（珠網(wǎng)膜下腔），可見到兔的后肢跳動，即證明穿刺針頭已進入椎管。這時不要再向下刺，以兔損傷脊髓。固定好針頭，即可將藥物注入。當前61頁，總共85頁。4．小腦延髓池給藥此種給藥都是在動物麻醉情況下進行的。而且常采用大動物如狗等，小動物很少采用。將狗麻醉后，使狗頭盡量向胸部屈曲，用左手摸到其第一頸椎上方的凹陷（枕骨大孔），固定位置，右手取7號鈍針頭（將針頭尖端麻鈍），由此凹陷的正中線上，順平行狗的方向，小心地刺入小腦延髓池。當針頭正確刺入小腦延髓池時，注射者會感到針頭再向前穿時無阻力，同時可以聽到很輕的“咔嚓”一聲，即表示針頭已穿過硬腦膜進入小腦延髓池，而且可抽出清亮的腦脊液，注射藥物前，先抽出一些腦脊液，抽取量根據(jù)實驗需要注入多少藥液決定，即注入多少抽取多少，以保持原來腦脊髓腔里的壓力。當前62頁，總共85頁。5．腦內(nèi)給藥此法常用于微生物學動物實驗，將病原體等接種于被檢動物腦內(nèi)，然后觀察接種后的各種變化。小鼠腦內(nèi)給藥時，選套有塑料管、針尖露出2mm深的5(1/2)針頭，由鼠正中額部刺入腦內(nèi)，注入藥物或接種物。給豚鼠、兔、狗等進行腦內(nèi)注射時，須先用穿顱鋼針穿透顱骨，再用注射器針頭刺入腦部，再徐徐注入被檢物。注射速度一定要慢，避免引起顱內(nèi)壓急驟升高。

當前63頁，總共85頁。6．直腸內(nèi)給藥此種給藥方法常用于動物麻醉。家兔直腸內(nèi)給藥時，取灌腸用的膠皮管或用14號導尿管代替。在膠皮管或?qū)蚬茴^上涂上凡士林，由助手使兔蹲臥于桌上，以左臂及左腋輕輕按住兔頭及前肢，以左手拉住兔尾，露出肛門，并用右手輕握后肢，實驗者將橡皮管插入家兔肛門內(nèi)，濃度約7～9cm，如為雌性動物，注意勿誤插入陰道（肛門緊接尾根）。橡皮管插好后，將注射器與橡皮管套緊，即可灌注藥液。當前64頁，總共85頁。7．關節(jié)腔內(nèi)給藥此種方法常用于關節(jié)炎的動物模型復制。兔給藥時，將兔仰臥固定于兔固定臺上，剪去關節(jié)部被毛，用碘酒或酒精消毒，然后用手從下方和兩旁將關節(jié)固定，把皮膚稍移向一側(cè)，在臏韌帶附著點處上方約0.5厘米處進針。針頭從上前方向下后方傾斜刺進，直至針頭遇阻力變小，然后針頭稍后退，以垂直方向推到關節(jié)腔中。針頭進入關節(jié)腔時，通?？捎泻孟蟠唐票∧さ母杏X，表示針頭已進入膝關節(jié)腔內(nèi)，即可注入藥液。當前65頁，總共85頁。第八節(jié)麻醉方法

麻醉(anesthesia)的基本任務是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。一、常用的麻醉劑動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。

當前66頁，總共85頁。1．揮發(fā)性麻醉劑包括乙醚、氯仿等，乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)以上情況。

當前67頁，總共85頁。2．非揮發(fā)性麻醉劑這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。

3．中藥麻醉劑動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。當前68頁，總共85頁。

二、動物的麻醉方法

1．全身麻醉（1）吸入法用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚作麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醚倒入其中，迅速轉(zhuǎn)入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔4～6分鐘即可麻醉，麻醉后應立即取出，并準備一個蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動物麻醚變淺時給套在鼻上使其補吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實驗的麻醉，也可用于較大的動物。由于乙醚燃點很低，遇火極易燃燒，所以在使用時，一定要遠離火源。當前69頁，總共85頁。

（2）腹腔和靜脈給藥麻醉法非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。由于各麻醉劑的作用長短以及毒性的差別。所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定要控制藥物的濃度和注射量。當前70頁，總共85頁。2．局部麻醉⑴貓的局部麻醉一般應用0.5～1.0%鹽酸普魯卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%鹽酸可卡因。

⑵兔在眼球手術時，可于結(jié)膜囊滴入0.02%鹽酸可卡因溶液，數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。⑶狗的局部麻醉用0.5～1%鹽酸普魯卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%鹽酸可卡因。當前71頁，總共85頁。3.麻醉效果的觀察動物的麻醉效果直接影響實驗的進行和實驗結(jié)果。如果麻醉過淺，動物會因疼痛而掙扎，甚至出現(xiàn)興奮狀態(tài)，呼吸心跳不規(guī)則，影響觀察。麻醉過深，可使機體的反應性降低，甚至消失，更為嚴重的是抑制延髓的心血管活動中樞和呼吸中樞，使呼吸、心跳停止，導致動物死亡。因此，在麻醉過程中必須善于判斷麻醉程度，觀察麻醉效果。判斷麻醉程度的指標有：當前72頁，總共85頁。

呼吸：加快或不規(guī)則，則麻醉過淺，可再追加麻醉，若呼吸由不規(guī)則轉(zhuǎn)變?yōu)橐?guī)則且平穩(wěn)，說明已達到麻醉深度。若動物呼吸變慢，且以腹式呼吸為主，說明麻醉過深，動物有生命危險。反射活動：角膜反射靈敏，則麻醉過淺；反射遲鈍，麻醉程度適宜；反射消失，伴瞳孔散大，則麻醉過深。肌張力：亢進，麻醉過淺；全身肌肉松弛，麻醉合適。皮膚夾捏反應：麻醉過程中可隨時用止血鉗或有齒鑷夾捏動物皮膚，若反應靈敏，則麻醉過淺；若反應消失，則麻醉程度合適。當前73頁，總共85頁。4．麻醉注意事項⑴靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應，當這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。配制的藥液濃度要適中，不可過高，以兔麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。

當前74頁，總共85頁。⑵麻醉時需注意保溫。麻醉期間，動物的體溫調(diào)節(jié)機能往往受到抑制，出現(xiàn)體溫下降，可影響實驗的準確性。此時常需采取保溫措施。保溫的方法有，實驗桌內(nèi)裝燈，電褥，臺燈照射等。無論用哪種方法加溫都應根據(jù)動物的肛門體溫而定。常用實驗動物正常體溫：貓為38.6℃±1.0℃，兔為38.4℃±1.0℃，大鼠為39.3℃±0.5℃。⑶作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應加熱至動物體溫水平。當前75頁，總共85頁。第九節(jié)處死方法

當實驗中途停止或結(jié)束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。當前76頁，總共85頁。

一、蛙類常用金屬探針插入枕骨大孔，破壞腦脊髓的方法處死。將蛙用濕布包住，露出頭部，左手執(zhí)蛙，并用食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯；右手持探針由凹陷處垂直刺入，刺破皮膚即入枕骨大孔。這時將探針尖端轉(zhuǎn)向頭方，向前深入顱腔，然后向各方攪動，以搗毀腦組織。再把探針由枕骨大孔刺入并轉(zhuǎn)向尾方，刺入椎管，以破壞脊髓。腦和脊髓是否完全破壞，可檢查動物四肢肌肉的緊張性是否完全消失。拔出探針后，用一小干棉球?qū)⑨樋锥伦。苑乐钩鲅?。操作過程中要防止毒腺分泌物射入實驗者眼內(nèi)。如被射入時，則需立即用生理鹽水沖洗眼睛。當前77頁，總共85頁。

二、大鼠和小鼠

1.頸椎脫臼法：右手抓住鼠尾用力向后拉，同時左手拇指與食指用力向下按住鼠頭。將脊髓與腦髓拉斷，鼠便立即死亡。

2.斷頭法：用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉，鼠立即死亡。

3.擊打法：右手抓住鼠尾提起，用力摔擊其頭部，鼠痙攣后立即死去。或用木錘用力擊打鼠頭部也可致死。

4.急性大出血法：可采用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血方法使鼠立即死亡。

5.藥物致死法：吸入一定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使動物致死。當前78頁，總共85頁。

三、狗、兔、豚鼠

1.空氣栓