實(shí)驗(yàn)六血清ALT活性測定

實(shí)驗(yàn)六血清ALT活性測定第1頁/共18頁實(shí)驗(yàn)六血清ALT活性測定第2頁/共18頁一、何謂ALT？谷丙轉(zhuǎn)氨酶（glutamicpyruvictransaminase，GPT）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanineaminotransferase，ALT）

復(fù)習(xí)：第3頁/共18頁反應(yīng)式大多數(shù)氨基酸可參與轉(zhuǎn)氨基作用，但賴氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸除外。二、ALT催化的化學(xué)反應(yīng):丙氨酸

+α-酮戊二酸

丙酮酸

+谷氨酸ALT第4頁/共18頁三、ALT的分布:主要分布于肝、腎細(xì)胞、心肌細(xì)胞等，血清中的含量很低。病變時(shí)，細(xì)胞受損，血清ALT含量升高。

四、ALT測定的臨床意義：作為（肝臟）疾病診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。第5頁/共18頁五、測定血清ALT的方法：

King法（金氏法）

Reitman法（賴氏法）

Mohun法（穆氏法）

1981年全國生化檢驗(yàn)方法學(xué)討論會確定用賴氏法（改良）作為臨床首選，單位為：卡門氏單位

。第6頁/共18頁

實(shí)驗(yàn)六

血清ALT活性測定

---改良賴氏法

第7頁/共18頁一、實(shí)驗(yàn)性質(zhì)：分析性二、目的及要求

1、掌握ALT測定的原理及臨床意義

2、熟習(xí)測定的操作方法。第8頁/共18頁丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸

ALT（血清）基質(zhì)液

在一定反應(yīng)條件下

(

pH7.4，37℃

),作用30min：三、原理：第9頁/共18頁α-酮戊二酸丙酮酸

+2,4二硝基苯肼α-酮戊二酸-2,4二硝基苯腙丙酮酸-2,4二硝基苯腙兩者在堿性條件下

呈紅棕色

，等摩爾濃度條件下，丙酮酸OD值大a-酮戊二酸3倍。

四、試劑：省略第10頁/共18頁2、按下表操作：

加入物（ml）對照管(B)測定管(U)

血清0.10.1基質(zhì)緩沖液—0.5

混勻，37℃水浴30min（準(zhǔn)確記時(shí)）

2,4—二硝基苯肼溶液0.50.5

基質(zhì)緩沖液0.5—混勻，37℃水浴20min；各管加入0.4MNaOH5.0ml，室溫放置10min；在波長505

nm

處，以蒸餾水校正零點(diǎn)，讀取各管吸光度；根據(jù)(AU--AB)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到酶活性的卡門氏單位數(shù)。1、將基質(zhì)緩沖液和血清在37℃

水浴箱預(yù)溫5min。五、操作步驟：第11頁/共18頁3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：管號01234磷酸鹽緩沖液（ml）0.100.100.100.100.10丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（ml）—0.050.100.150.20基質(zhì)緩沖液（ml）0.500.450.400.350.30相當(dāng)于酶活性（卡門氏單位）—285797150各管加2,4-二硝基苯肼溶液0.5ml，混勻，37℃水浴20min；各管加0.4mol/LNaOH溶液5.0ml，混勻，室溫放置10min。第12頁/共18頁波長505nm處比色，以蒸餾水調(diào)零點(diǎn)，讀取各管吸光度；各管讀數(shù)均減去0號管吸光度，所得差值與對應(yīng)的卡門氏酶活性單位作圖即成標(biāo)準(zhǔn)曲線。第13頁/共18頁六、結(jié)果分析：正常參考值：5～25卡門氏單位七、注意事項(xiàng)：

1．一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少，血清對照管吸光度讀數(shù)接近試劑空白管

(以0.1ml蒸餾水或生理鹽水代替血清，其它和對照管同樣操作)，所以大批標(biāo)本測定時(shí)，一般不需要每一標(biāo)本都作血清對照管，以試劑空白管代替即可。但建議對超過正常的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查時(shí)每份標(biāo)本應(yīng)作對照管。

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2．嚴(yán)重脂血癥或黃疸、溶血的血清可能會引起測定管吸光度增加，因此檢測此類標(biāo)本時(shí)，應(yīng)作血清對照管。第15頁/共18頁

3．賴氏法原法標(biāo)準(zhǔn)曲線只到97卡門氏單位，直線關(guān)系很好。超過此活力的標(biāo)本應(yīng)稀釋后再測，臨床上應(yīng)用甚為不便，故衛(wèi)生部臨檢中心推薦法建議標(biāo)準(zhǔn)曲線延長到150卡門氏單位，實(shí)際已不完全成直線了，只能大致反應(yīng)酶活性的大小、當(dāng)血清標(biāo)本酶活性超過150卡門氏單位時(shí)，應(yīng)將血清用生理鹽水或緩沖液稀釋5倍后再進(jìn)行測定。第16頁/共18頁

4．加入2,4-二硝基苯肼溶液后需充分振蕩混勻，否則會影響重復(fù)性；加氫氧化鈉溶液方法要一致