第七章 黃酮類化合物

第七章黃酮類化合物(2)Flavonoids----黃酮類的提取和分離1當(dāng)前1頁，總共24頁。第七章黃酮類化合物概述1黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類2黃酮類化合物的理化性質(zhì)3黃酮類化合物的提取和分離4黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定52當(dāng)前2頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離原理：黃酮類化合物的溶解性和酸性

相似相溶與酸堿理論提?。很赵簶O性小的溶劑，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取苷及極性大的苷元：

用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加熱提取極性稍大的甙元一般指：羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查爾酮多糖苷類：一般用沸水提取

提取3當(dāng)前3頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離溶劑萃取法（系統(tǒng)分離法）堿提酸沉法炭粉吸附法

粗分4當(dāng)前4頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離藥材水或醇-水，加熱提取提取液濃縮，加3-4倍醇醇水液沉淀（水雜）濃縮，回收醇，加水水液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚層氯仿層乙酸乙酯層正丁醇層水層葉綠素等脂溶性成分黃酮苷元大極性苷元小極性的苷黃酮苷多糖蛋白質(zhì)原理：利用黃酮類與其它雜質(zhì)極性不同，選不同溶劑進(jìn)行萃取溶劑萃取法5當(dāng)前5頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出堿：常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水)優(yōu)點(diǎn)A：使含酚羥基化合物成鹽溶解B：使含羧基雜質(zhì)（果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等）形成沉淀注意a：提取時(shí)，堿液濃度不宜過高。b：加酸酸化時(shí)，酸性也不宜過強(qiáng)。應(yīng)用：蘆丁和槲皮素的提取、分離和鑒定堿提酸沉法6當(dāng)前6頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離原理：活性炭吸附黃酮苷類化合物用途：主要用于含量較高的黃酮苷類的精制操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，定性檢查上清液無黃酮反應(yīng)時(shí)為止。過濾，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇溶劑進(jìn)行梯度洗脫，對各部分洗脫液進(jìn)行定性檢查。大部分黃酮苷類可以用7%酚/水洗下。活性炭吸附法7當(dāng)前7頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離

極性氫鍵分子大?。浚┧嵝蕴厥饨Y(jié)構(gòu)硅膠聚酰胺凝膠梯度pH萃取法金屬鹽絡(luò)合法柱色譜法分離方法8當(dāng)前8頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離硅膠是一種高活性吸附材料，其化學(xué)分子式為mSiO2·nH2O

應(yīng)用范圍：主要分離小極性和中等極性的化合物，應(yīng)用最為廣泛。異黃酮、二氫黃酮（醇）、高度甲基化（乙?；┑狞S酮及黃酮醇多羥基黃酮、黃酮醇及其苷類：硅膠加水去活化吸附規(guī)律：

極性大吸附能力強(qiáng)eg：

A苷元B二糖苷C單糖苷

Rf：A>C>B硅膠柱色譜9當(dāng)前9頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離原理：氫鍵吸附（作用）洗脫規(guī)律：（先—后）母核上羥基增加，洗脫順序遞減羥基數(shù)目相同時(shí)，有締合羥基>無締合羥基苷元相同：三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元

不同類型黃酮類化合物的洗脫先后順序?yàn)椋?/p>

異黃酮＞二氫黃酮醇＞黃酮＞黃酮醇。分子中芳香程度高、共軛雙鍵多，則聚酰胺對其的吸附力強(qiáng)，故難于洗脫。應(yīng)用范圍：適合各種類型的黃酮類化合物，包括苷、苷元、查耳酮及二氫黃酮聚酰胺柱色譜10當(dāng)前10頁，總共24頁。聚酰胺“雙重色譜”原理

正相色譜反相色譜苷與苷元聚酰胺色譜聚酰胺：極性固定相（極性酰胺基團(tuán)）非極性固定相（非極性脂肪鏈）洗脫劑：有機(jī)溶劑（氯仿-甲醇，極性?。┖軇状?水，極性大）先洗脫：游離黃酮（苷元，極性?。┸眨O性大）（柱色譜分離）Rf值：苷元>苷苷元<苷（TLC色譜鑒別）11當(dāng)前11頁，總共24頁。正相與反相層析硅膠固定相（硅醇）極性>流動(dòng)相（醇）極性時(shí)為正相聚酰胺固定相（聚酰胺脂肪鏈）極性<流動(dòng)相（醇水）極性時(shí)為反相槲皮素對照品槲皮素蘆丁蘆丁對照品槲皮素對照品槲皮素蘆丁蘆丁對照品聚酰胺TLC硅膠TLC12當(dāng)前12頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離常用型號(hào)：Sephadex-G和Sephadex-LH20原理：吸附作用和分子篩對游離黃酮，主要是吸附作用,吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目，苷元的羥基數(shù)目越多，越難洗脫。對黃酮苷，主要是分子篩原理,洗脫時(shí)按分子量由大到小先后洗脫下來。常用洗脫劑：堿性水溶液（0.1mol/LNH4OH），鹽水溶液(0.05mol/LNaCl)醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。其它溶劑：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝膠會(huì)膨脹，體積變大)。葡聚糖凝膠柱色譜13當(dāng)前13頁，總共24頁。黃酮類化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo黃酮類化合物取代情況Ve/Vo芹菜素5,7,4’－三OH5.3木犀草素5,7,3’,4’－四OH6.3槲皮素3,5,7,3’,4’－五OH8.3楊梅素3,5,7,3’,4’,5’－六OH9.2山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠李糖苷三糖苷3.3槲皮素-3-蕓香糖苷雙糖苷4.0槲皮素-3-鼠李糖苷單糖苷4.914當(dāng)前14頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離規(guī)律：苷元的羥基數(shù)越多，Ve/Vo越大，越難以洗脫。

吸附作用苷的分子量越大,其上聯(lián)結(jié)糖的數(shù)目越多,Ve/Vo越小,容易洗脫。

分子篩原理苷比苷元先洗脫。葡聚糖凝膠柱色譜15當(dāng)前15頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離原理：黃酮類化合物具有酸性、且不同數(shù)目和不同位置的酚羥基的酸性強(qiáng)弱不同適用范圍：適用于分離酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元酸性：7,4′-OH＞7-或4′-OH＞一般酚OH＞5-OH溶于5%NaHCO3溶于5%NaCO3溶于不同濃度NaOH梯度pH萃取法16當(dāng)前16頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離乙醚液（脂雜）乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液堿液(3或5-OH黃酮)堿液(一般酚OH黃酮)堿液(7,4’-二OH黃酮)堿液(7或4’-OH黃酮)5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH梯度pH萃取法17當(dāng)前17頁，總共24頁。黃酮類化合物的提取和分離原理：利用分子中某些特定官能團(tuán)性質(zhì)進(jìn)行分離具有鄰二酚羥基的成分，用醋酸鉛沉淀不具有鄰二酚羥基的成分，用堿式醋酸鉛沉淀

具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物還可以與硼酸反應(yīng)形成溶于水的硼酸絡(luò)合物，可以與不具有鄰二酚羥基的其它黃酮類化合物分離金屬鹽絡(luò)合法18當(dāng)前18頁，總共24頁。從檸檬果皮中分離降血壓有效成分目的：使要得到的化合物溶解，而使蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)等大極性成分形成沉淀除去水提醇沉法提取分離實(shí)例119當(dāng)前19頁，總共24頁。從檸檬果皮中分離降血壓有效成分溶劑萃取法鉛鹽沉淀法凝膠色譜法硅膠色譜法目的：除去Pb，生成PbCO3

提取分離實(shí)例120