實(shí)驗(yàn)十七偶氮胂Ⅲ法測(cè)血鈣

實(shí)驗(yàn)十七偶氮胂Ⅲ法測(cè)血鈣第1頁(yè)/共16頁(yè)實(shí)驗(yàn)十七偶氮胂Ⅲ法測(cè)血鈣

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血漿中約含鈣2.1mmol/(8.4～10.2mg/dl)，以三種形式存在：①非擴(kuò)散鈣(non-difusionalcalcium)：是指與血漿蛋白相結(jié)合的鈣，占血漿總鈣的45%；②離子鈣(ioncalcium)：是具有生理活性的部分，約占血漿總鈣的50%；③絡(luò)合鈣(chelatingcalcium)：主要指與枸櫞酸結(jié)合的鈣，是體內(nèi)鈣的一種運(yùn)輸方式，約占血漿總鈣的5%左右。鈣離子和絡(luò)合鈣都能透過(guò)毛細(xì)血管壁，故統(tǒng)稱為擴(kuò)散鈣。血鈣的測(cè)定方法很多，一般可分為總鈣測(cè)定和離子鈣測(cè)定法。前者包括同位素稀釋質(zhì)譜法(isotopedilutingmassspectrometry)、原子吸收光譜法(atomicabsorptionspectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和絡(luò)合滴定法(chelatingtitration)等。AAS是最常用的準(zhǔn)確測(cè)定血漿總鈣含量的參考方法，但費(fèi)用昂貴，不適于常規(guī)工作；分光光度法中以甲基百里香酚藍(lán)比色法（methylthymolbluecolorimetry）和偶氮胂Ⅲ比色法（ArsenazoⅢcolorimetry）最常用。絡(luò)合滴定法簡(jiǎn)便易行，但判斷終點(diǎn)受主觀因素影響，有被淘汰趨勢(shì)，但不少基層實(shí)驗(yàn)室仍延用。離子選擇電極法測(cè)定離子鈣已在臨床廣泛應(yīng)用。分光光度法已被廣泛用自動(dòng)生化分析議分析。

第3頁(yè)/共16頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】

在堿性條件下，樣品中鈣與偶氮胂Ⅲ作用生成藍(lán)色復(fù)合物，其顏色深淺與鈣濃度成正比，通過(guò)在660nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度的變化值，與經(jīng)過(guò)同樣處理的鈣校準(zhǔn)液進(jìn)行比較，即可計(jì)算出樣品中鈣含量。

第4頁(yè)/共16頁(yè)【操作步驟】

測(cè)定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B）試劑（ml）2.02.02.037℃恒溫5分鐘蒸餾水（ml）----0.02標(biāo)準(zhǔn)液（ml）--0.02--血清0.02----混勻，37恒溫2分鐘，660nm波長(zhǎng)，以空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度。第5頁(yè)/共16頁(yè)【計(jì)算】樣品鈣含量（mmol/L）=×2.50【參考范圍】血清鈣：2.1～2.6mmol/L【臨床意義】

（1）低鈣血癥見(jiàn)于①攝入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹瀉、阻塞性黃疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期婦女；③吸收減少：佝僂病、甲狀旁腺功能減退癥；④腎臟疾?。杭?、慢性腎衰竭、腎病綜合征、腎小管性酸中毒；⑤壞死性胰腺炎。（2）高鈣血癥見(jiàn)于①攝入鈣過(guò)多：靜脈用鈣過(guò)量、大量飲用牛奶等；②原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥、腎癌等使血鈣升高；③服用維生素D過(guò)多，鈣吸收作用增強(qiáng)；④骨病：變形性骨炎、轉(zhuǎn)移性骨癌、多發(fā)性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有異位內(nèi)分泌作用的腫瘤；⑥長(zhǎng)期制動(dòng)引起骨骼脫鈣。第6頁(yè)/共16頁(yè)【評(píng)價(jià)】

1.線性范圍：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。

2.精密度：批內(nèi)、批間平均CV分別≤5.0%

3.準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度≤10%

4.試劑空白吸光度值≤0.35?！咀⒁馐马?xiàng)】1.樣品中鈣含量超過(guò)5.00mmol/L，則用生理鹽水稀釋后測(cè)定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。2.測(cè)試溫度無(wú)嚴(yán)格規(guī)定，但色素對(duì)溫度敏感，應(yīng)保持反應(yīng)體系恒溫。3.高脂樣本會(huì)引起測(cè)定結(jié)果假性升高，可用樣本空白管校正。4.反應(yīng)形成的色素可穩(wěn)定2小時(shí)。

5.所用試驗(yàn)器材必須清潔，沒(méi)有鈣污染。

6.試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。

7.試劑使用后立即關(guān)緊瓶蓋，避免污染。

8.使用肝素作為抗凝劑時(shí)濃度不能太高，每毫升血液中肝素濃度應(yīng)小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。第7頁(yè)/共16頁(yè)實(shí)驗(yàn)十七鈣鎂試劑比色法測(cè)血鎂【目的要求】1.掌握比色法測(cè)血鎂2.熟悉血鎂測(cè)定的其他方法【實(shí)驗(yàn)原理】

血清中的鎂在堿性條件下，與金屬色原染料鈣鎂試劑（calmagite)反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物。顏色深淺與美的濃度成正比，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)品比較，可以求得鎂的含量。第8頁(yè)/共16頁(yè)【操作步驟】

測(cè)定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B）試劑（ml）2.02.02.037℃恒溫5分鐘蒸餾水（ml）----0.02標(biāo)準(zhǔn)液（ml）--0.02--血清0.02----混勻，37恒溫2分鐘，540nm波長(zhǎng)，以空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度。第9頁(yè)/共16頁(yè)【計(jì)算】樣品鎂含量（mmol/L）=×1.0【參考范圍】血清鎂：0.67～1.04mmol/L【評(píng)價(jià)】

1.線性范圍：2.0mmol/L±10%。

2.精密度：批內(nèi)、批間平均CV分別≤5.0%

3.準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度≤10%

4.試劑空白吸光度值≤1.10。第10頁(yè)/共16頁(yè)

【注意事項(xiàng)】1.試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。2.測(cè)試溫度無(wú)嚴(yán)格規(guī)定，但色素對(duì)溫度敏感，應(yīng)保持反應(yīng)體系恒溫。3.高脂樣本會(huì)引起測(cè)定結(jié)果假性升高，可用樣本空白管校正。4.反應(yīng)形成的色素可穩(wěn)定1小時(shí)。

5.所用試驗(yàn)器材必須清潔，沒(méi)有鎂污染。

6.所用試劑具有毒性和腐蝕性，請(qǐng)勿用口吸吸管，如有污染，應(yīng)立刻用大量流水沖洗。第11頁(yè)/共16頁(yè)實(shí)驗(yàn)十八還原鉬藍(lán)法測(cè)血清磷

血液中的磷(phosphorus)主要有兩種形式：有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷。血清無(wú)機(jī)磷含量與血鈣有一定關(guān)系，兩者濃度的乘積為一常數(shù)（以mg/dl濃度計(jì)算，乘積等于40）。磷參與機(jī)體糖、脂類及氨基酸的代謝，是骨鹽的主要成分，也是轉(zhuǎn)運(yùn)能量的物質(zhì)，磷酸鹽是調(diào)節(jié)酸堿平衡的重要緩沖體系之一?！灸康囊蟆?.掌握此法測(cè)血磷的原理。2.熟悉血磷測(cè)定的其他方法第12頁(yè)/共16頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】

利用磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸復(fù)合物，用對(duì)甲氨基酚硫酸鹽還原生成鉬藍(lán)，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，可求得血磷的含量。試劑中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白質(zhì)干擾。第13頁(yè)/共16頁(yè)【操作步驟】

測(cè)定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B）去離子水（ml）----0.1磷標(biāo)準(zhǔn)液（ml）--0.1--血清0.1----顯色液（ml）4.04.04.0

混勻，37恒溫10分鐘，650nm波長(zhǎng)，以空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度。第14頁(yè)/共16頁(yè)【計(jì)算】樣品磷含量（mmol/L）=×1.29【參考值】成人0.97～1.62mmol/L；兒童1.45～2.10mmol/L【臨床意義】1.低磷血癥見(jiàn)于①攝入不足和吸收減少：饑餓或惡病質(zhì)、吸收不良綜合征、嘔吐、腹瀉、長(zhǎng)期