抗原抗體反應(yīng)與其應(yīng)用

1一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理二、抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用內(nèi)容第一頁(yè)，共30頁(yè)。2一、抗原抗體反應(yīng)的基本原理第二頁(yè)，共30頁(yè)。3

抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱(chēng)為抗原抗體反應(yīng)。

抗原抗體反應(yīng)AgAb（）（）如同鑰匙和鎖的關(guān)系第三頁(yè)，共30頁(yè)。4這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。體內(nèi)體液免疫反應(yīng)1.中和作用:中和毒素等2.溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬3.免疫損傷:抗體與組織或細(xì)胞反應(yīng)沉淀（Precipitation）凝集（Agglutination）細(xì)胞溶解（celllysis）補(bǔ)體結(jié)合（Complementfixation）體外抗體存在于血清中,常用血清作試驗(yàn),因此又名血清學(xué)反應(yīng)第四頁(yè)，共30頁(yè)。555

抗原抗體反應(yīng)的原理1、抗原抗體結(jié)合力（4種）2、抗原抗體親和力和親合力3、親水膠體轉(zhuǎn)化疏水膠體抗原抗體反應(yīng)的原理

電荷引力（靜電引力）

范德華引力

氫鍵結(jié)合力疏水作用力第五頁(yè)，共30頁(yè)。61、抗原抗體結(jié)合力

--靜電引力（electrostaticforces）

靜電引力或庫(kù)侖引力（Cou-lombicforces）是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基（—NH3+）與羧基基團(tuán)（—COO-）間相互吸引的能力，之間的引力，距離越近引力越大。第六頁(yè)，共30頁(yè)。71、抗原抗體結(jié)合力

--范德華引力（VanderWaalsforces）分子間（或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構(gòu)型，如：凹槽與凸起互補(bǔ)，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。第七頁(yè)，共30頁(yè)。81、抗原抗體結(jié)合力

--氫鍵結(jié)合力（hydrogenbond

）

是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結(jié)合力較強(qiáng)于范德華引力，能量大于范德華引力。第八頁(yè)，共30頁(yè)。91、抗原抗體結(jié)合力

--疏水作用力（hydrophobicinteractions）

水溶液中兩個(gè)疏水基團(tuán)相互接觸，由于對(duì)水分子的排斥而趨向聚集的力。作用力最強(qiáng)，占總結(jié)合力的50％。第九頁(yè)，共30頁(yè)。10靜電引力：異性相吸（electrostaticforces），離子鍵（Ionicbond）范德華引力:作用最?。╲anderWaalsinteractions）氫鍵:最具特異性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）疏水作用力>氫鍵結(jié)合力>靜電引力>范德華引力1、抗原抗體結(jié)合力第十頁(yè)，共30頁(yè)。112、抗原抗體親和力和親合力

是指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力。親和力（affinity)第十一頁(yè)，共30頁(yè)。12親和力是指反應(yīng)系統(tǒng)中復(fù)雜抗原與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。與抗體結(jié)合價(jià)、抗體的親和性、抗原有效表位數(shù)目等相關(guān)。親合力(avidity)2、抗原抗體親和力和親合力第十二頁(yè)，共30頁(yè)。3、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體

抗體和大多數(shù)抗原同屬蛋白質(zhì)。在通常的血清學(xué)反應(yīng)條件下均帶有負(fù)電荷，使極化的水分子在其周?chē)纬伤瘜?，成為親水膠體，因此蛋白質(zhì)不會(huì)自行凝集出現(xiàn)沉淀。當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄;而且由于抗原抗體復(fù)合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。此時(shí)在電解質(zhì)(如NaCl，的作用下，使各疏水膠體之間進(jìn)一步靠攏、沉淀，形成可見(jiàn)的抗原抗體復(fù)合物。13

可見(jiàn)反應(yīng)

(沉淀)抗原抗體復(fù)合物

(疏水膠體)電解質(zhì)

抗原(親水膠體)

抗體(親水膠體)+第十三頁(yè)，共30頁(yè)。14二、抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型第十四頁(yè)，共30頁(yè)。15

抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型反應(yīng)類(lèi)型抗原抗體補(bǔ)體沉淀反應(yīng)可溶無(wú)標(biāo)記無(wú)凝集反應(yīng)顆粒無(wú)標(biāo)記無(wú)補(bǔ)體參與反應(yīng)細(xì)胞無(wú)標(biāo)記有中和反應(yīng)毒素等無(wú)標(biāo)記無(wú)免疫標(biāo)記標(biāo)記標(biāo)記無(wú)或第十五頁(yè)，共30頁(yè)。16反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷

沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀，檢測(cè)濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象抗球蛋白試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象

補(bǔ)體參與反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象

抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型第十六頁(yè)，共30頁(yè)。17反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)病毒感染性毒素中和試驗(yàn)檢測(cè)外毒素毒性免疫標(biāo)記熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測(cè)酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度金免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀

抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型第十七頁(yè)，共30頁(yè)。18三、免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用第十八頁(yè)，共30頁(yè)。19免疫標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)是用熒光素、放射性同位素、酶等標(biāo)記抗體或抗原等所進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。特點(diǎn)：敏感度高特異性強(qiáng)快速容易觀察能進(jìn)行定性、定量、定位檢測(cè)等第十九頁(yè)，共30頁(yè)。201、熒光免疫技術(shù)

將結(jié)合有熒光素的熒光抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的技術(shù)。常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（FITC)和羅丹明（RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴(lài)氨酸的氨基結(jié)合，在藍(lán)紫光激發(fā)下，可分別出現(xiàn)鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。固相吸附抗原或抗體Ab光或Ag光Ab－Ag光

或

Ag－Ab光光激發(fā)發(fā)光第二十頁(yè)，共30頁(yè)。21①自身抗體檢測(cè)抗核抗體(均質(zhì)型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點(diǎn)型)歐蒙熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用第二十一頁(yè)，共30頁(yè)。22熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用②病原體檢測(cè)呼吸道合胞病毒流感病毒A/B型副流感病毒③免疫病理檢測(cè)④細(xì)胞表面抗原和受體檢測(cè)⑤特殊應(yīng)用：流式細(xì)胞分析第二十二頁(yè)，共30頁(yè)。232、放射免疫技術(shù)及其應(yīng)用用放射性同位素標(biāo)記技術(shù)來(lái)檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)的高靈敏度方法。反應(yīng)特點(diǎn)：靈敏，精確；不穩(wěn)定；安全性差標(biāo)記Ag或Ab標(biāo)記物純化抗原抗體反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物沉淀測(cè)定其放射活性現(xiàn)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較少?gòu)V泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析等第二十三頁(yè)，共30頁(yè)。243、酶免疫技術(shù)

將待測(cè)抗原或抗體吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反應(yīng)板），與酶標(biāo)記的抗體或抗原反應(yīng)后，加入底物反應(yīng)（顯色或發(fā)光）的分析方法。酶標(biāo)板吸附抗原或抗體洗滌加入酶標(biāo)抗體或抗原Ag-Ab酶或Ab-Ag酶加入酶作用底物顯色反應(yīng)第二十四頁(yè)，共30頁(yè)。25方法（1）直接法（可檢測(cè)抗原或抗體）：酶標(biāo)板吸附抗原或抗體洗滌Ag－Ab酶或Ab－Ag酶顯色反應(yīng)Ab酶或Ag酶底物第二十五頁(yè)，共30頁(yè)。26（2）間接法（有兩種抗體參與，一抗做反應(yīng)橋梁）1Ab2Ab酶酶標(biāo)板吸附抗原Ag－1Ab洗滌Ag－1Ab－2Ab酶底物顯色反應(yīng)一抗二抗第二十六頁(yè)，共30頁(yè)。27酶標(biāo)板吸附抗體AgAb-Ag洗滌Ab酶Ab-Ag-Ab酶底物顯色反應(yīng)（3）夾心法（不同抗體將抗原夾在中間反應(yīng)）①直接夾心法②間接夾心法酶標(biāo)板吸附抗體AgAb－Ag1AbAb－Ag－1Ab洗滌2Ab酶Ab－Ag－1Ab－2Ab酶底物顯色反應(yīng)第二十七頁(yè)，共30頁(yè)。28酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)——夾心法第二十八頁(yè)，共30頁(yè)。29ELISA應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地?cái)U(kuò)大。臨床實(shí)驗(yàn)室主要應(yīng)用于：1、傳染病的診斷，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗