浙液相色譜講義八：檢測器-原理及操作

檢測器WatersLCSchool培訓(xùn)教材對檢測器的要求高靈敏度可重現(xiàn)的設(shè)置合適的帶寬快速或可變的時間常數(shù)寬的線性響應(yīng)容易使用及保養(yǎng)自我診斷功能檢測器的種類紫外-可見光檢測器基于樣品池(S)中的樣品對光產(chǎn)生吸收，有信號差如是可變波長檢測器，還有分光系統(tǒng)(光珊)Beer'sLaw-BEER定律光能量∶P0=透過溶劑的光能量P=透過樣品的光能量光通量(透過率%)∶T=P/P0吸光度∶A=-log(T)=log(P0/P)吸光度=單位吸光度×流動池長度×溶液濃度即∶A=abc同紫外檢測器靈敏度有關(guān)的因素信號強(qiáng)度(S)從BEER定律可看出樣品的種類樣品濃度及進(jìn)樣的體積檢測池的長度所使用的波長，檢測器的

時間常數(shù)噪音(N)流動相所使用的波長，燈的能量檢測器的時間常數(shù)非檢測器因素-電噪音，泵脈動等背景吸收的影響背景吸收減少線性范圍許多溶劑產(chǎn)生背景吸收示差折光效應(yīng)示差折光效應(yīng)的危害產(chǎn)生假的紫外吸收變化∶定量誤差，光譜圖不準(zhǔn)確梯度時嚴(yán)重的基線漂移梯形池設(shè)計（曾用于440/441，490及486檢測器）最初的專利設(shè)計Waters2487檢測器用于2487的消除示差折光效應(yīng)的設(shè)計專利的梯形狹縫設(shè)計，消除示差折光效應(yīng)同時；進(jìn)一步提高靈敏度及線性范圍Waters2487的其他特點(diǎn)：雙通道、高靈敏度儀器內(nèi)集成比色皿位置多種功能，勝任更復(fù)雜的工作MaxPlot，RatioPlot，燈優(yōu)化軟件等不同種類流動池的比較普通的圓柱形池梯形池梯形狹縫池

進(jìn)口出口進(jìn)口出口進(jìn)口出口486的面板及操作按此鍵后可調(diào)波長(190nm-600nm)波長數(shù)值顯示在面板下面一行按此鍵褉環(huán)改變面板上面一行顯示的內(nèi)容Absorbance:吸光度Reference:參比池的能量Sample:樣品池的能量調(diào)正滿刻度量程對積分輸出無作用調(diào)正濾波參數(shù)常設(shè)為∶1.0自動調(diào)零486的Diagnostics操作按此鍵后，進(jìn)入Diagnostics狀態(tài)面板下面一行顯示∶ddd，按相應(yīng)的數(shù)字可進(jìn)行不同的校正，常用的如下∶(詳細(xì)參見操作手冊)4，重新校正波長12，顯示檢測器(486)的版本號13，顯示及修改IEEE地址(2-29)，缺省值及非IEEE操作是015，正常參比及樣品池位置16，轉(zhuǎn)換參比及樣品池位置，常用于制備20，設(shè)置關(guān)燈時間21，設(shè)置積分輸出的偏置26，設(shè)置掃描參數(shù)∶起、止波長，步寬(nm)，停留時間27，和26號參數(shù)一起工作，完成掃描2487的顯示面板通道吸光度燈開/關(guān)波長靈敏度下一畫面運(yùn)行時間自控/遙控診斷開/關(guān)鍵盤鎖開/關(guān)單/雙波長Shift開/關(guān)光電二極管矩陣檢測器簡稱∶PDA(PhotodiodeArrayDetector)兼顧紫外檢測器及可見分光光度計的信息在收集色譜圖的同時，得到光譜圖色譜峰的純度鑒定，色譜峰的確認(rèn)任意波長的再處理對PDA的要求∶色譜的靈敏度光譜的靈敏度光譜的分辨率光電二極管矩陣檢測器示意圖996與傳統(tǒng)光學(xué)單元的比較示差折光效應(yīng)的影響從硬件上消除示差折光效應(yīng)帶來的好處不損失靈敏度及分辨率不會因錯選參比波長而損失色譜及光譜信息只需設(shè)定如下參數(shù)即可操作∶波長范圍分辨率每秒采集的光譜數(shù)操作極為簡便不需費(fèi)神選擇參比波長及其帶寬示差折光檢測器DifferentialRefractiveIndexDetectorWaters410及2410的日常操作調(diào)整檢測器內(nèi)、外(如有柱溫箱)溫度以5ml/min的流速“purge”參比池五分鐘不接色譜柱！視室溫變化大小，需較長時間的平衡參數(shù)設(shè)置按文獻(xiàn)值或?qū)嶒灈Q定通常410可以在白天結(jié)束工作

后不關(guān)機(jī)，節(jié)省第二天的平衡

時間，保持0.1到0.5ml/min的

流速示差檢測器的注意事項不能做梯度實驗最大的池耐壓是100psi流速范圍是0.3-10ml/min.熒光檢測器FluorescenceDetector濾光片分類∶近通Shortpass-低于特定點(diǎn)的所有波長可以通過遠(yuǎn)通Longpass-高于特定點(diǎn)的所有波長可以通過帶通Bandpass-在特定范圍內(nèi)的所有波長可以通過Waters474的特點(diǎn)可調(diào)波長熒光檢測器雙掃描∶發(fā)射波長及激發(fā)波長均可掃描在掃描模式下(Scan)高靈敏度∶水的RAMAN峰S/N大于200可編程∶時間-波長

時間-增益在編程模式下(Program)474的操作顯示∶在一般(Normal)操作模式下，474有如下顯示Mode 顯示474目前的操作模式，Normal、Program、ScanSignal 顯示當(dāng)前熒光發(fā)射信號的強(qiáng)度Response 響應(yīng)設(shè)置的大小，相當(dāng)于濾波(Filter)常數(shù)EXλ 激發(fā)波長(nm)EMλ 發(fā)射波長(nm)Gain 增益設(shè)置的大小，加在光電倍 增管上的電壓，大時靈敏度高Atten 衰減設(shè)置的大小，對10mV信號 的衰減，積分信號不起作用鍵盤∶很多鍵有多個功能，需用Shift鍵控制電化學(xué)檢測器ElectrochemicalDetector隨著化合物被氧化或還詟，產(chǎn)生正比于濃度的電流Waters464的面板464的面板有顯示屏、鍵盤及指示燈指示燈表示∶CellOn:464在工作狀態(tài)，電極上加了電壓Run:464在工作狀態(tài)，不斷測定池子的電流并輸出PotentialOverload:不能保持電極上的電壓，一般是池及其連接部分有問題CurrentOverload:電流超過滿量程CommunicationError:目前不用Shift:按下Shift鍵，這時可用第二功能

Waters464的操作開機(jī)后，可在SELECTMODE下用蕢鍵選五種模式之一DC直流模式，常用于高靈敏度檢測SCAN掃描模式，可得到樣品的電位-電流圖PULSE脈沖模式，可優(yōu)化某些樣品的相應(yīng)，如分析離子，該模式下穩(wěn)定性好而

靈敏度稍低SYSTEM模式，對儀器進(jìn)

行設(shè)置CALIBRATION模式，對

儀器自檢或校正電導(dǎo)檢測