細(xì)胞治療-錢寶華

惡性腫瘤的細(xì)胞免疫療法細(xì)胞治療的概念廣義：指給機(jī)體輸入或去除細(xì)胞制劑，以增強(qiáng)/減弱機(jī)體的免疫應(yīng)答，恢復(fù)機(jī)體的正常功能與狀態(tài)。例如使用各種細(xì)胞性血液成分、細(xì)胞疫苗、干細(xì)胞移植、過繼免疫細(xì)胞治療等狹義：是取患者自身或無關(guān)供體的免疫細(xì)胞在體外經(jīng)特異性抗原和細(xì)胞因子刺激，活化、增殖后，再轉(zhuǎn)輸入患者體內(nèi)，使其在患者體內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤作用細(xì)胞治療種類細(xì)胞疫苗腫瘤細(xì)胞疫苗基因修飾瘤苗干細(xì)胞造血干細(xì)胞（骨髓、外周血、臍血）間充質(zhì)干細(xì)胞其他干細(xì)胞免疫性細(xì)胞

DC細(xì)胞特異性殺傷性T細(xì)胞

LAK細(xì)胞和CIK細(xì)胞過繼性細(xì)胞治療是繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種模式，是最有效的免疫治療手段之一美國食品和藥品管理局（FDA）于2005年批準(zhǔn)應(yīng)用干細(xì)胞治療心肌梗塞和創(chuàng)傷性腦損傷，使細(xì)胞治療從科研走向了臨床階段理想的過繼性細(xì)胞免疫治療的活性細(xì)胞的必備條件是：對腫瘤細(xì)胞有特異性的選擇性殺傷活性，對正常細(xì)胞無明顯作用，不產(chǎn)生GVHD，無排斥，宿主能耐受，細(xì)胞來源豐富，能在體內(nèi)增殖，無致熱原，無致病原DC治療性疫苗的近期臨床研究

抗原致敏DC的策略

表位肽、腫瘤抗原蛋白、編碼腫瘤抗原的DNA、mRNA、病毒載體、腫瘤細(xì)胞裂解物、凋亡小體樹突狀細(xì)胞＋細(xì)胞因子(IL-2,IFN-γ等)樹突狀細(xì)胞＋佐劑(CD40L,KLH,Flt-3等)樹突狀細(xì)胞＋淋巴細(xì)胞抗原致敏的DC治療的輸注途徑靜脈皮下皮內(nèi)腫瘤局部淋巴結(jié)內(nèi)淋巴內(nèi)

在III期臨床試驗的第一階段(D9901)，127例接受治療的前列腺癌患者中位生存時間及3年生存率分別為25.9個月和34%，高于安慰劑組的21.4和11%，而在III期臨床試驗的第二階段(D9902A)接受治療的98例患者中，中位生存時間及3年生存率分別為19個月和32%，亦高于安慰劑組的15.4個月和21%，全部III期臨床試驗中接受治療的患者中位生存時間及3年生存率分別為23.2個月和33%，顯著高于安慰劑組的18.9個月和15%。DC疫苗在惡性黑色素瘤治療中的應(yīng)用Michael對Ⅳ期惡性黑色素瘤患者進(jìn)行了Ⅰ/Ⅱ期的臨床試驗，采用經(jīng)照射的自身腫瘤細(xì)胞刺激的DC經(jīng)皮下輸注于患者的方法。17例有足夠的腫瘤組織刺激DC而接受治療的病例，在分別接受0.9×106或5×106DC治療后出現(xiàn)3例CR，平均維持時間為35個月，3例PR，維持時間分別為19.5、8、21個月，以及6例PD（其中一例在14個月后轉(zhuǎn)為CR），患者對不同劑量的DC均有良好的耐受，未見明顯的副作用。

2/27名患者出現(xiàn)CR，1名PR，7名SD，17名PD。11/11出現(xiàn)對KLH的強(qiáng)免疫反應(yīng)，5/6出現(xiàn)對瘤胎抗原(OFA/LRP未成熟的層粘蛋白受體)免疫反應(yīng)的增強(qiáng)，到結(jié)果公布，平均隨訪時間32月，且有8名病人存活。非成熟DC瘤內(nèi)注射在神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療中的應(yīng)用Yamanaka等進(jìn)行了自體腫瘤細(xì)胞裂解物致敏的DC治療復(fù)發(fā)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤的Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗，致敏的DC經(jīng)OK-432細(xì)胞刺激成熟或不經(jīng)其刺激的非成熟的DC，采用經(jīng)皮內(nèi)注射或瘤內(nèi)與皮內(nèi)相結(jié)合的方法輸入患者體內(nèi)。在24名接受治療的患者中，1/24PR，3/24MR，10/24SD，10/24PD，4期膠質(zhì)瘤患者的總體生存時間為480天，明顯高于對照組，采用兩種輸注方式結(jié)合的患者的有效率高于單一輸注方式的患者，接受治療的患者ELISPOT和DTH檢測均標(biāo)明體內(nèi)產(chǎn)生了免疫反應(yīng)。DLI發(fā)揮GVL的效應(yīng)細(xì)胞

細(xì)胞毒T細(xì)胞：免疫表型為CD3+CD8+CD16-可有CD4+)；其完全激活需特異性抗原，抗原遞呈細(xì)胞包括樹突狀細(xì)胞、協(xié)同刺激分子及輔助細(xì)胞等NK細(xì)胞：免疫表型為CD3-CD56+CD16+?？杀欢喾N細(xì)胞因子激活，尤其IL-2、IL-12NK樣細(xì)胞：免疫表型為CD3+CD56+，可產(chǎn)生粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，干擾素(IFN)及腫瘤壞死因子(TNF)，但不產(chǎn)生IL-4，體內(nèi)活化不需要外源性IL-21DLI治療BMT后白血病復(fù)發(fā)的特點

起效時間較慢：多出現(xiàn)于治療后3～7周，達(dá)到分子水平緩解所需時問更長，約半年以上

顯效者常伴有輕度至中度的急性和/或慢性GVHDalto-BMT后DLI的GVHD較alLo-BMT后并發(fā)的GVHD輕，較易處理，與輸人的異基因細(xì)胞數(shù)量不成比例DLI治療效果有明顯的疾病相關(guān)性，雖對各類白血病復(fù)發(fā)均能產(chǎn)生一定的逆轉(zhuǎn)作用，但對CM1的療效最佳IL-2等細(xì)胞因子可增強(qiáng)DLI的GVL效應(yīng)細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞（CIK細(xì)胞）CIK細(xì)胞是將人外周血單個核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子[如抗CD3單抗(CD3McAb)、白介素(IL)-2、干擾素(IFN)-γ及IL-1α等]共同培養(yǎng)一段時間后獲得的,具有非主要組織相容性抗原(MHC)限制性殺瘤活性的一群異質(zhì)細(xì)胞

CIK細(xì)胞主要用于自體骨髓移植物的凈化、微小殘留病灶的清除及晚期惡性腫瘤(包括急慢性血液系統(tǒng)惡性疾病和各種實體瘤)的免疫治療CIK細(xì)胞抗腫瘤的特點殺瘤譜廣，沒有T淋巴細(xì)胞殺傷時的MHC限制性，對于多腫瘤細(xì)胞系和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出較大的殺傷活性?？捎糜诎籽　⒘馨土?、胃癌、肺癌、大腸癌等多種腫瘤的治療對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感：研究發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞對化療敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas－FasL凋亡：研究表明過繼性免疫治療失敗的一個重要原因是效應(yīng)細(xì)胞被腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的某些蛋白誘導(dǎo)而凋亡，而CIK細(xì)胞雖然在Fas被占據(jù)后會引起少量細(xì)胞凋亡，但對其殺瘤細(xì)胞毒性沒有明顯影響，Verneris的研究表明CIK細(xì)胞具有合成FasL的能力CIK細(xì)胞與LAK細(xì)胞、TIL細(xì)胞的差別LAK細(xì)胞主要來源于CD3、CD56NK細(xì)胞，對靶細(xì)胞的殺傷性無MHC限制性，但由于LAK細(xì)胞體外擴(kuò)增能力較低和體內(nèi)殺瘤活性不高，故臨床應(yīng)用受到限制TIL細(xì)胞是從腫瘤組織中分離出來的具有殺傷腫瘤細(xì)胞特性的淋巴細(xì)胞，殺傷活性較LAK強(qiáng)，但是對腫瘤的殺傷作用有MHC限制性，其在分離過程中容易變異同時體外擴(kuò)增較為困難，因此難以廣泛應(yīng)用于臨床CIK細(xì)胞的殺傷活性明顯較LAK細(xì)胞為高，具有非MHC限制性，其不似TIL細(xì)胞樣需要與腫瘤細(xì)胞直接接觸才能增殖。由于CIK細(xì)胞具有高增殖能力和高細(xì)胞毒力且對正常骨髓細(xì)胞抑制輕微，其更適用于腫瘤生物治療童春容等對111例急性白血病患者行自體CIK或DC-CIK治療,96例達(dá)完全緩解(CR),7年無病生存率(DFS)為66%SchmidtWolf等利用人IL-2cDNA轉(zhuǎn)染的CIK細(xì)胞治療了10例轉(zhuǎn)移性實體瘤患者,1例CR,3例病情穩(wěn)定病種例數(shù)CRPRMRSDPDCR+PR%胃癌14543832185342（30.0）肝癌8822229211724（27.3）肺癌68131189932（47.0）胰腺癌501141571315（30.0）卵巢癌27112102213（60.0）總計378912811565103140（37.0）CIK細(xì)胞治療腫瘤臨床療效CIK細(xì)胞過繼免疫治療的副反應(yīng)CIK細(xì)胞輸注后4～6h內(nèi)9例患者(20.9)出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)，體溫37．5～38．5"C，發(fā)熱2h后自動退熱；1例患者出現(xiàn)惡心，胸悶癥狀，對癥處理后緩解觀察全身反應(yīng)中，回輸后引起了流感樣等副作用癥狀，其中寒戰(zhàn)13例，發(fā)熱9例，惡心嘔吐1例，全身不適3例體內(nèi)數(shù)量少，分離