演示文稿分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

演示文稿分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)現(xiàn)在是1頁\一共有27頁\編輯于星期六（優(yōu)選）分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)現(xiàn)在是2頁\一共有27頁\編輯于星期六一、課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)脲酶+CO22NH32+H2O現(xiàn)在是3頁\一共有27頁\編輯于星期六【教學(xué)目標(biāo)】

1．知識與技能（1）理解培養(yǎng)基對微生物的選擇原理。（2）了解對微生物數(shù)量測定的方法和原理。（3）設(shè)置對照。2．過程與方法（1）通過實(shí)驗(yàn)，初步學(xué)會土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制，掌握細(xì)菌的計(jì)數(shù)方法（2）運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計(jì)數(shù)問題。3．情感、態(tài)度與價(jià)值觀了解微生物分離培養(yǎng)技術(shù)在生活實(shí)際中的應(yīng)用，體會科學(xué)、技術(shù)、社會的相互關(guān)系現(xiàn)在是4頁\一共有27頁\編輯于星期六問題反饋1.為什么培養(yǎng)基中尿素還要加葡萄糖為碳源？2.如何設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)？3.選擇培養(yǎng)基的功能如何實(shí)現(xiàn)？現(xiàn)在是5頁\一共有27頁\編輯于星期六1、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌一.研究思路㈠.篩選菌株㈡.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目㈢.設(shè)置對照現(xiàn)在是6頁\一共有27頁\編輯于星期六實(shí)例：啟示：尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。（p21第二段）原因：因?yàn)闊崛獪囟?0～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶?，F(xiàn)在是7頁\一共有27頁\編輯于星期六2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：（p21第三段）人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長?，F(xiàn)在是8頁\一共有27頁\編輯于星期六2、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？（反饋一）碳源：葡萄糖氮源：尿素③什么樣的微生物可以在這個(gè)培養(yǎng)基上生長現(xiàn)在是9頁\一共有27頁\編輯于星期六選擇培養(yǎng)基①概念（p22）㈡.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：①測定微生物數(shù)量的常用方法？②統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)的常用方法？③稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的原理？反饋一：選擇培養(yǎng)基的功能如何實(shí)現(xiàn)？現(xiàn)在是10頁\一共有27頁\編輯于星期六1、顯微鏡直接計(jì)數(shù)：可以利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。不能區(qū)分死菌與活菌；缺點(diǎn)2.間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）（1）常用方法：稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只有一個(gè)菌落因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。現(xiàn)在是11頁\一共有27頁\編輯于星期六注意事項(xiàng)①計(jì)數(shù)用的起始菌液量必須是定量的（公式）②為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。③為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。④統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低（原因）現(xiàn)在是12頁\一共有27頁\編輯于星期六例：兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1、甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230。

2、乙同學(xué)在該濃度下涂布了A、B、C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

你認(rèn)為這兩位同學(xué)的做法正確嗎？如果有問題，錯(cuò)在哪？甲：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板）乙：A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值注：誤差太大，須重做或再多設(shè)幾組?現(xiàn)在是13頁\一共有27頁\編輯于星期六設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。㈢.設(shè)置對照：實(shí)例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對應(yīng)的106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))現(xiàn)在是14頁\一共有27頁\編輯于星期六小結(jié)：通過這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。討論：如何設(shè)置對照證明選擇培養(yǎng)基有選擇作用？現(xiàn)在是15頁\一共有27頁\編輯于星期六【教學(xué)目標(biāo)】

1．知識與技能（1）分解尿素菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟（2）能分解尿素菌的鑒定2．過程與方法（1）通過實(shí)驗(yàn)，初步學(xué)會土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制，掌握細(xì)菌的記數(shù)方法（2）運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計(jì)數(shù)問題。3．情感、態(tài)度與價(jià)值觀了解微生物分離培養(yǎng)技術(shù)在生活實(shí)際中的應(yīng)用，體會科學(xué)、技術(shù)、社會的相互關(guān)系現(xiàn)在是16頁\一共有27頁\編輯于星期六問題反饋1.為什么不同的微生物用不同的稀釋度？2.如何計(jì)算菌落的數(shù)目？3.在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物一定是目的菌株嗎？現(xiàn)在是17頁\一共有27頁\編輯于星期六二.實(shí)驗(yàn)的具體操作

（一）土壤取樣（二）制備培養(yǎng)基：（三）樣品的稀釋(四）取樣涂布（五）微生物的培養(yǎng)與觀察（六）細(xì)菌的計(jì)算（七）菌種的鑒定現(xiàn)在是18頁\一共有27頁\編輯于星期六二.實(shí)驗(yàn)的具體操作

㈠.土壤取樣

1.從肥沃、濕潤的土壤先鏟去表層土3cm左右再取樣2.小鐵鏟和信封要滅菌3.稱取土壤應(yīng)在火焰旁現(xiàn)在是19頁\一共有27頁\編輯于星期六制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的作用？作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇的作用。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，若在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。

㈡.制備培養(yǎng)基：以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基現(xiàn)在是20頁\一共有27頁\編輯于星期六1.應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。2.在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行[三]樣品的稀釋現(xiàn)在是21頁\一共有27頁\編輯于星期六（四）.取樣涂布平板1.涂布3個(gè)選擇培養(yǎng)基，1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，并按照由106～稀104釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布操作。

現(xiàn)在是22頁\一共有27頁\編輯于星期六（1）測細(xì)菌數(shù)：（2）測放線菌：（3）測真菌數(shù)：3.分離不同的微生物采用不同的稀釋度：一般用104、105、106稀釋液一般用103、104、105稀釋液一般用102、103、104稀釋液◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板2.實(shí)驗(yàn)時(shí)要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。現(xiàn)在是23頁\一共有27頁\編輯于星期六㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。1.培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的培養(yǎng)3～4d?，F(xiàn)在是24頁\一共有27頁\編輯于星期六微生物的培養(yǎng)與觀察現(xiàn)在是25頁\一共有27頁\編輯于星期六(六).計(jì)算1.公式：每克樣品中