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第三章園藝植物種子檢驗的原理與技術(shù)詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有36頁\編輯于星期五優(yōu)選第三章園藝植物種子檢驗的原理與技術(shù)現(xiàn)在是2頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(二)種子真實性和品種純度鑒定的原理檢驗品種的特異性(Distinctness)、一致性(Uniformity)、穩(wěn)定性(Stability),即DUS測試特異性:每個品種都具有明顯區(qū)別其他品種的特征,包括表型特征、解剖特征、代謝特征、分子特征等一致性:每個品種不同個體之間具有相同的特征穩(wěn)定性:采用合理的繁殖方式,品種的特征是可以穩(wěn)定遺傳的借助各種有效手段,找出不同品種在形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、解剖學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等方面的差異現(xiàn)在是3頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(三)種子真實性和品種純度的監(jiān)控途徑影響種子真實性和品種純度的因素有遺傳分離、自然變異、生物學(xué)混雜、機械混雜和其他不可預(yù)知的因素等。針對以上因素,監(jiān)控種子真實性和品種純度的主要途徑有:1、田間檢驗:在種子田植株生長期間監(jiān)控種子真實性和品種純度,不符合田間標(biāo)準(zhǔn)的種子田不準(zhǔn)收獲2、實驗室檢驗3、田間小區(qū)種植檢驗防止機械混雜現(xiàn)在是4頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗各種方法在準(zhǔn)確性、經(jīng)濟性、可操作性等方面均有不同程度差異,可根據(jù)實際檢驗?zāi)康暮鸵筮x擇合適的技術(shù)和方法??偟脑瓌t:簡單、易行、經(jīng)濟、準(zhǔn)確、快速。1、種子形態(tài)鑒定法根據(jù)不同品種在種子形態(tài)特征方面的差異進(jìn)行鑒定,如種子花紋、大小、形狀、光澤、蠟質(zhì)、種臍等鑒定時,需備好標(biāo)準(zhǔn)樣品的相關(guān)資料,必要時可借助放大鏡等工具逐粒檢驗現(xiàn)在是5頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗1、種子形態(tài)鑒定法優(yōu)點:簡單易行,不需要復(fù)雜設(shè)備缺點:可供鑒別的種子形態(tài)特征有限,有時不易區(qū)分環(huán)境因素對種子形態(tài)特征的影響,且受主觀因素影響較大鑒定方法:隨機從送驗樣品中數(shù)取4份種子,每份100粒種子,逐粒觀察,區(qū)分出本品種和異品種種子,計數(shù),并按下列公式計算品種純度百分率?,F(xiàn)在是6頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗2、幼苗形態(tài)鑒定法在合適的發(fā)育條件下,讓幼苗發(fā)育到一定階段,根據(jù)幼苗的形態(tài)特征區(qū)別不同品種,或在一定的逆境條件下,根據(jù)品種對逆境的反應(yīng)來鑒別不同品種。鑒定方法:隨機從送驗樣品中數(shù)取4份種子,每份100粒。在培養(yǎng)室或溫室中種植,當(dāng)幼苗長到適宜評價的階段時,根據(jù)不同品種之間幼苗形態(tài)上的差異,對幼苗進(jìn)行鑒定。如葉緣形狀、下胚軸顏色、子葉形狀等。現(xiàn)在是7頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗2、幼苗形態(tài)鑒定法甜菜不同品種的葉柄顏色現(xiàn)在是8頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗3、物理鑒定法應(yīng)用較多的是熒光分析法,其原理是不同類型和品種的種子,其種皮結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分不同,在紫外線照射下發(fā)出的熒光也不同。鑒定方法:取試樣4份,每份100粒,分別排列在黑紙上,放于波長365nm的紫外光下照射,數(shù)分鐘后即可觀察。菜用豌豆發(fā)淡藍(lán)色或粉紅色熒光,谷實豌豆發(fā)褐色熒光白菜綠色,白芥鮮紅色,黑芥深藍(lán)色,田芥鮮藍(lán)色現(xiàn)在是9頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗4、化學(xué)鑒定法根據(jù)不同品種皮殼成分和化學(xué)物質(zhì)對不同化學(xué)試劑反應(yīng)顯色的差異來鑒定品種。鑒定方法:取試樣2份,每份100粒,將每粒種子放入直徑為8mm的小試管中,每管加入3滴10%的NaOH,25-28℃下放置2h,取出種子鑒定浸出液顏色結(jié)球甘藍(lán)櫻桃色,花椰菜櫻桃色至玫瑰色,抱子甘藍(lán)和皺葉甘藍(lán)濃茶色,油菜、芥菜和蕓薹淺黃色,蕪菁白色小麥種子NaOH現(xiàn)在是10頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗5、田間小區(qū)種植鑒定法鑒定品種真實性和純度最常用、最可靠、最準(zhǔn)確的方法,適用于種子質(zhì)量糾紛的仲裁試驗,并作為賠償損失的依據(jù)。(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品的使用為了鑒定品種真實性,應(yīng)在鑒定的各個階段與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)代表品種原有的特征、特性,最好是育種家種子?,F(xiàn)在是11頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗5、田間小區(qū)種植鑒定法(2)田間小區(qū)的設(shè)置為使品種特征、特性充分表現(xiàn),試驗的設(shè)計和布局上要選擇氣候環(huán)境條件適宜、土壤均勻、肥力一致、前茬無同類作物和雜草的田塊,并有適宜的栽培管理措施。每個樣品最少有2個重復(fù),為了避免失敗,重復(fù)應(yīng)適當(dāng)布置在不同田塊上。小區(qū)的大小應(yīng)為準(zhǔn)確鑒定提供足夠的植株數(shù)。現(xiàn)在是12頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗5、田間小區(qū)種植鑒定法(3)種植密度的確定和種植株數(shù)的計算播種時應(yīng)有足夠的株距和行距,大株作物可適當(dāng)增加行株距,必要時可用點播和點栽。種植株數(shù)要根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求而定。一般用公式表示,b為標(biāo)準(zhǔn)品種純度。如標(biāo)準(zhǔn)純度為98%時,N為200株即可達(dá)到要求?,F(xiàn)在是13頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗5、田間小區(qū)種植鑒定法(4)鑒定時期許多種在幼苗期就有可能鑒別出品種真實性和純度,但成熟期,花期和食用器官成熟期是品種特征、特性表現(xiàn)最明顯的時期,必須進(jìn)行鑒定?,F(xiàn)在是14頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗6、生理生化鑒定法根據(jù)品種所特有的蛋白質(zhì)或同工酶(電泳法、免疫技術(shù))和代謝產(chǎn)物(色譜法)來進(jìn)行品種純度鑒定。比較簡單和常用的是電泳法,根據(jù)蛋白譜帶的組成及一致性,來區(qū)分本品種和異品種。現(xiàn)在是15頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗7、分子標(biāo)記鑒定法在DNA和RNA等分子水平上鑒別不同品種,最常用的是SSR、RAPD、AFLP、ISSR、SCAR、SRAP等。其中,SSR標(biāo)記應(yīng)用最多,為共顯性標(biāo)記,可區(qū)分雙親和F1。甘藍(lán)種子純度鑒定現(xiàn)在是16頁\一共有36頁\編輯于星期五現(xiàn)在是17頁\一共有36頁\編輯于星期五四、真實性和品種純度鑒定(四)實驗室檢驗8、檢驗結(jié)果報告現(xiàn)在是18頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(一)種子生活力測定的意義1、概念種子生活力指種子發(fā)芽的潛在能力或種胚所具有的生命力。2、意義(1)休眠種子必須通過測定生活力才能了解其真正品質(zhì)和潛在發(fā)芽能力。(2)種子貿(mào)易中可以快速預(yù)測種子發(fā)芽能力。現(xiàn)在是19頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法1、四唑(TTC)染色法(1)原理:有活力種子的胚在呼吸過程中會發(fā)生氧化還原反應(yīng),三苯基四氮唑(TTC)為無色指示劑,被種子活組織吸收后,會參與活細(xì)胞的還原反應(yīng),從脫氫酶接受H+,在活細(xì)胞中產(chǎn)生紅色、穩(wěn)定、不擴散、不溶于水的三苯基甲臜。而無活力組織無此反應(yīng)故不染色。判斷種子有無活力,主要取決于染色部位和染色面積,而不一定在于顏色的深淺?,F(xiàn)在是20頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法1、四唑(TTC)染色法(2)應(yīng)用范圍:測定休眠種子的發(fā)芽潛力測定收獲后馬上播種的種子發(fā)芽潛力測定發(fā)芽緩慢種子的發(fā)芽潛力測定發(fā)芽末期未發(fā)芽種子的發(fā)芽潛力測定因收獲或加工而受損種子的發(fā)芽潛力,并探明原因查明發(fā)芽試驗中不正常幼苗的原因查明種子貯藏期間劣變衰老程度為種子貿(mào)易快速測定種子活力現(xiàn)在是21頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測定方法①扦取試樣:從凈種子中隨機取樣4份,每份100粒。②預(yù)處理:使種子加快和充分吸濕,軟化種皮,方便樣品準(zhǔn)備和促進(jìn)活組織酶系統(tǒng)的活化。預(yù)措:除去種子外部的附屬物,包括剝?nèi)ス麣ず团品N皮,但不能損傷種子內(nèi)部胚的主要構(gòu)造。預(yù)濕:包括快速水浸預(yù)濕(活力強、不易破裂種子)、緩慢紙床預(yù)濕(活力弱、易破裂種子)、H2O2溶液浸種預(yù)濕等(加速酶系統(tǒng)活化)?,F(xiàn)在是22頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測定方法③樣品準(zhǔn)備:去掉種皮,沒種胚縱切成兩半,使種胚的主要構(gòu)造暴露在切面上,便于染色和鑒別。④TTC染色:將每份100-200個半粒種子,分別浸入TTC溶液,室溫下染色10-12h。為加快染色,可放入30-45℃的溫箱內(nèi)染色或采用抽真空技術(shù)。如在規(guī)定時間內(nèi)樣品的染色不夠充分,可適當(dāng)延長染色時間,以確定是TCC滲入速度問題,還是種子胚的缺陷現(xiàn)在是23頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測定方法⑤鑒定:取出染色的種子并用清水沖洗干凈,放在白色濾紙上逐粒觀察胚和胚乳的染色情況。有生活力種子:胚被染成有光澤的鮮紅色不正常種子:胚的主要構(gòu)造局部不染色或染色異常死種子:完全不染色或染成無光澤的淡紅色或灰白色現(xiàn)在是24頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測定方法⑥結(jié)果計算:統(tǒng)計有生活力種子的個數(shù),并計算種子生活力百分率,如果重復(fù)間差距超過最大容許差距(P116,表4-4),需重新進(jìn)行測定。⑦測定結(jié)果填報在檢驗結(jié)果報告單的規(guī)定空格中,精確度為1%。現(xiàn)在是25頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法現(xiàn)在是26頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法2、靛藍(lán)染色法和紅墨水染色法(1)測定原理衰老種子或死種子的原生質(zhì)膜失去選擇性透性,細(xì)胞外的染色劑容易進(jìn)入細(xì)胞,故細(xì)胞被染色,而活細(xì)胞不能被染色,所以根據(jù)胚組織的染色反應(yīng)可區(qū)分無活力種子和有活力種子。靛藍(lán)染色法:死胚染成藍(lán)色,活胚不染色紅墨水染色法:死胚染成紅色,活胚不染色應(yīng)用范圍:豆類、谷類和瓜類等大粒種子現(xiàn)在是27頁\一共有36頁\編輯于星期五六、種子生活力測定(二)種子生活力測定的方法2、靛藍(lán)染色法和紅墨水染色法(2)測定方法種子準(zhǔn)備與TTC法相同。將每份100-200個半粒種子放入培養(yǎng)皿中(剖面向下),立即注入靛藍(lán)溶液或紅墨水,淹沒種胚進(jìn)行染色。到規(guī)定時間將種子取出、洗凈,再進(jìn)行鑒定。種子活力鑒定方法與TTC法相同?,F(xiàn)在是28頁\一共有36頁\編輯于星期五第三節(jié)種子田間檢驗技術(shù)在植物生長期間,到種子生長田進(jìn)行檢驗,是保證種子質(zhì)量的重要措施,具有可操作性好且鑒定結(jié)果可靠等優(yōu)點。一、田間檢驗的內(nèi)容(1)檢查種子生產(chǎn)田是否符合要求(如隔離、前茬作物等)(2)檢查種子生產(chǎn)程序是否符合要求(3)檢查異作物情況(4)檢查雜草情況(5)檢查病蟲害情況(6)檢查植株生長狀況(7)計算判定是否符合種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),能否作為種用種子?,F(xiàn)在是29頁\一共有36頁\編輯于星期五二、對田間檢驗員的要求田間檢驗是通過田間檢驗員來完成的,必須滿足以下條件(1)必須經(jīng)過培訓(xùn),通過田間檢驗原理和程序知識的書面考核、田間檢驗技能的實踐考核(2)必須熟悉田間檢驗方法和田間標(biāo)準(zhǔn)、品種特征特性、種子生產(chǎn)的方法和程序等方面的知識(3)必須具備能依據(jù)品種特征特性證實品種真實性,能鑒別種子田混雜株并使之量化的能力(4)對被檢品種有豐富的知識,熟悉被檢種品種間差異的特征特性現(xiàn)在是30頁\一共有36頁\編輯于星期五二、對田間檢驗員的要求(5)有良好的健康,每年保持一定田間檢驗工作量,技能一直保持良好的狀態(tài)(6)應(yīng)獨立地根據(jù)檢驗結(jié)果報告田間狀況并作出評價,評價結(jié)果只對檢查機構(gòu)負(fù)責(zé)種子田間檢驗現(xiàn)在是31頁\一共有36頁\編輯于星期五三、田間檢驗的次數(shù)及時期田間檢驗可按苗期、開花期、成熟期等3個時期分多次進(jìn)行如果條件不允許,也可在品種性狀表現(xiàn)最充分時進(jìn)行1次檢查。如雜交制種田在開花期,蔬菜植物在產(chǎn)品器官成熟期現(xiàn)在是32頁\一共有36頁\編輯于星期五四、田間檢驗的一般程序(一)了解情況和檢查標(biāo)簽1、了解情況通過與生產(chǎn)者面談與檢查,全面了解:種子田編號、申請者姓名、作物、品種、類別(等級)、農(nóng)戶姓名和電話、種子田位置、田塊號碼、面積、前作詳情(檔案)、種子批號。2、檢查標(biāo)簽為了證實品種的真實性,有必要核查標(biāo)簽,了解種子來源詳情。為此,生產(chǎn)者至少應(yīng)保留種子批的兩個標(biāo)簽,一個樹立在田間,另一個留用備查。生產(chǎn)雜交種包括父、母本的種子標(biāo)簽和田間分布圖?,F(xiàn)在是33頁\一共有36頁\編輯于星期五四、田間檢驗的一般程序(二)檢查隔離情況和種子田總體狀況1、檢查隔離情況檢驗員根據(jù)生產(chǎn)者提供種子田和周邊田塊的地圖,繞種子田外圈行走,核查隔離情況。隔離距離應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的最低距離,其中包括收獲期間機械混雜隔離以及已受種傳病害感染的其他田塊的隔離。檢驗員也應(yīng)該觀察種子田和周圍田塊的自生苗、其他作物或雜草,這也可能是污染的花粉源
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