器官移植和HLA配型

臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)院現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三

器官移植與HLA分型檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三majorhistocompatibilitycomplex,

MHC主要組織相容性復(fù)合體人類白細(xì)胞抗原h(huán)umanleukocyteantigen,HLA/HLA復(fù)合體/MHC分子/MHC抗原現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三HLA的結(jié)構(gòu)HLA-Ⅱ類分子HLA-Ⅰ類分子現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三公元4世紀(jì)羅馬教堂現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三自體移植同種同基因移植同種異基因移植異種移植移植物抗原刺激受者的免疫系統(tǒng)/受者組織抗原刺激移植物中的免疫細(xì)胞誘發(fā)的免疫應(yīng)答稱為移植排斥反應(yīng)同種異型移植排斥反應(yīng)現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三第1節(jié)MHC基因和遺傳特點(diǎn)（復(fù)習(xí)）MHC基因的構(gòu)成MHC基因的特性MHC基因的意義現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三一、MHC基因的構(gòu)成（一）定位

第6號(hào)染色體短臂（6p21.31）全長(zhǎng)3600kb，共有224個(gè)基因座位，128個(gè)表達(dá)產(chǎn)物。（二）基因區(qū)經(jīng)典Ⅰ類基因：B、C、A位點(diǎn)經(jīng)典Ⅱ類基因：DP、DQ、DR位點(diǎn)現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三Ⅰ類基因區(qū)HLA復(fù)合體3600kb長(zhǎng)度224基因座位Ⅱ類基因區(qū)ACBDRDQDP著絲點(diǎn)Pq人6號(hào)染色體MHC-Ⅱ類分子MHC-Ⅰ類分子現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三αβDPDQDRBCAαβαββααα現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三二、MHC基因遺傳特點(diǎn)（一）HLA為高度多態(tài)性基因

MHC基因復(fù)合體是由多個(gè)位置相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相似的MHC抗原?，F(xiàn)在是11頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三MHC為共顯性表達(dá)現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三Ⅱ類基因Ⅰ類基因αβDPDQDRBCAαβαβααα2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率：

1262381245593851276506≈11019

人群之中MHC抗原相同的幾率：

6924621028≈1109

現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（二）單體型和連鎖不平衡性意義：器官移植選擇供體順序自身﹥同卵雙生﹥兄弟姐妹﹥父母﹥親屬﹥無關(guān)人群父母與子女完全相同的幾率：父母與子女一半相同的幾率：子女間完全相同的幾率：子女間一半相同的幾率：子女間完全不同的幾率：0100%25%50%25%1.單體型遺傳現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三1.單體型遺傳（二）單體型和連鎖不平衡性2.連鎖不平衡性（一）HLA為高度多態(tài)性基因現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三第2節(jié)HLA與器官移植現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三

在三類HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原。次要組織相容性抗原ABO血型抗原系統(tǒng)其他組織特異性抗原主要組織相容性抗原

決定移植“成敗”的抗原現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三

一、器官移植的類型

（1）自體移植（autograft）皮膚，骨髓，軟骨和骨（2）同種同基因移植（syngraft）（3）同種異基因移植（allograft）

同種異型移植（4）異種移植（xenograft）現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三一、同種異型排斥反應(yīng)的識(shí)別機(jī)制受者對(duì)T細(xì)胞對(duì)供者的MHC分子的直接與間接識(shí)別。（一）直接識(shí)別機(jī)制：

現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三直接識(shí)別受者T細(xì)胞現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三受者T細(xì)胞直接識(shí)別的靶結(jié)構(gòu)

現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三同種異型抗原的直接識(shí)別及其效應(yīng)

現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（二）間接識(shí)別受者T細(xì)胞識(shí)別受者APC加工處理的供者的MHC分子在急性排斥反應(yīng)中、晚期以及慢性排斥反應(yīng)中起重要作用。現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三識(shí)別方式間接識(shí)別現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三

同種異型抗原的間接識(shí)別

現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三二、同種異型移植排斥反應(yīng)的類型及效應(yīng)機(jī)制（一）宿主抗移植物反應(yīng)（hostversusgraftreaction,HVGR）依據(jù)反應(yīng)發(fā)生的時(shí)間及病理強(qiáng)度分為：

1、超急性排斥反應(yīng)（術(shù)后開始至幾個(gè)小時(shí)）

2、急性排斥反應(yīng)（術(shù)后幾天至幾周）

3、慢性排斥反應(yīng)（術(shù)后數(shù)月至數(shù)年）現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三

超急性排斥反應(yīng)發(fā)生示意圖

現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（二）移植物抗宿主反應(yīng)

（graft

versushostreaction,GVHR

）更為嚴(yán)重的一種排斥反應(yīng)原因：（1）受者與供者HLA不相匹配；（2）移植物中成熟的T細(xì)胞多；（3）受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)常見于：骨髓移植（造血干細(xì)胞移植）、胸腺、脾移植及新生兒接受大量輸血?，F(xiàn)在是30頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三三、同種異體移植排斥反應(yīng)的防治（一）尋求與受者M(jìn)HC相配的供者組織或器官是目前最為有效多見的方法。

1、ABO血型抗原配型

2、HLA抗原配型①供者與受者HLA-A、B相配的位點(diǎn)越多存活率越高；②上述的基礎(chǔ)上，HLA-DR、DQ盡可能的匹配；③HLA-DR類型對(duì)存活率影響較大?，F(xiàn)在是31頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（二）使用免疫抑制藥物

1、多為抑制T細(xì)胞藥物環(huán)孢菌素A（CsA），

FK-506、Rapamycin2、去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷T細(xì)胞的生長(zhǎng)周期

3、激素

4、可溶性CK受體、抗CK抗體和抗粘附分子抗體現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三阻斷協(xié)同刺激信號(hào)誘導(dǎo)T細(xì)胞失能現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（三）誘導(dǎo)對(duì)移植抗原的特異性耐受免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和腫瘤）理想方法是誘導(dǎo)特異性耐受。新方案：①誘導(dǎo)凋亡；②誘導(dǎo)T細(xì)胞無應(yīng)答（anergy）包括輸入可溶性CTLA-4及CD40L-CD40、CD2-CD58等信息傳遞阻斷?，F(xiàn)在是34頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三第3節(jié)HLA分型檢測(cè)技術(shù)分子生物學(xué)分型血清學(xué)分型技術(shù)細(xì)胞分型技術(shù)20世紀(jì)60年代20世紀(jì)80年代20世紀(jì)70年代現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三一、血清學(xué)分型技術(shù)1.原理

應(yīng)用一系列已知HLA特異性的分型血清與待測(cè)的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，來檢測(cè)HLA抗原特異性。典型技術(shù)：定型板法（微量細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)）現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三反應(yīng)結(jié)果測(cè)定1.染料拒染法臺(tái)盼藍(lán)伊紅碘化丙啶7-AAD2.流式細(xì)胞術(shù)現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三死（著染）細(xì)胞（%）記分結(jié)果判斷0～101陰性11～202可疑陰性21～504弱陽(yáng)性51～806陽(yáng)性>808強(qiáng)陽(yáng)性0未試驗(yàn)或不能讀數(shù)染料拒染法的判定標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三2.血清學(xué)分型可檢測(cè)的抗原（SD抗原）HLA-Ⅱ類分子:HLA-Ⅰ類分子:B,C,ADR,DQ（B細(xì)胞為靶細(xì)胞）現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三3.方法學(xué)評(píng)價(jià)操作簡(jiǎn)便易行節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好無需特殊設(shè)備耗時(shí)長(zhǎng)不同批號(hào)抗血清結(jié)果常有不同優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)（LD抗原）1.原理混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞增殖（mixedlymphocyteculture,MLC）單向MLC雙向MLC現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三陰性分型法

陽(yáng)性分型法

1.單向MLC刺激細(xì)胞：已知HLA型別的分型細(xì)胞（預(yù)處理，使其失去增殖能力）反應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個(gè)核細(xì)胞（具有增殖能力）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化（形態(tài)學(xué)）3H-TdR摻入法MTT還原法現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（1）陰性分型法

刺激細(xì)胞

HLA-DP1受者T淋巴細(xì)胞

+增殖弱HLA-DP1非HLA-DP1

增殖強(qiáng)

純合子細(xì)胞只表達(dá)HLA-DP1

照射處理現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（2）陽(yáng)性分型法

預(yù)致T敏細(xì)胞

非HLA-DP1待測(cè)B淋巴細(xì)胞

+增殖弱非HLA-DP1HLA-DP1

增殖強(qiáng)

刺激細(xì)胞

HLA-DP1

除DP抗原外，其他HLA抗原相同照射處理現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三2.雙向MLC

遺傳型不同的兩個(gè)個(gè)體淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時(shí)，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對(duì)方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLC。方法學(xué)評(píng)價(jià)：不能分型，但可全面地反應(yīng)供-受雙方組織相容性?，F(xiàn)在是46頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三三、分子生物學(xué)分型技術(shù)(一）基本技術(shù)1.限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性分析（restrictionfragmentlengthpolymorphism,

RFLP）2.PCR/SSP3.PCR-SSCP分型法4.序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）5.基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT）現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三芯片技術(shù)原理：PCR-SSO反向斑點(diǎn)或印漬法的微型化。(二）集成技術(shù)現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三（三）PCR-SSCP分型法原理：對(duì)ssDNA進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測(cè)出DNA多態(tài)性或點(diǎn)突變。（單鏈非變性電泳遷移分析）現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。男，14歲。首診前3個(gè)月，感冒發(fā)燒病史。首次就診原因:頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實(shí)驗(yàn)室檢查：蛋白尿，尿紅細(xì)胞陽(yáng)性?？寡装Y治療1周，稍好，恢復(fù)上學(xué)，正常飲食。2月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，24小時(shí)尿量減少，蛋白管型。住院治療2個(gè)月，腎臟衰竭加重，每周透析3到4次。活檢見腎小球內(nèi)CIC沉淀，抗人IgA、IgG陽(yáng)性。建議：申請(qǐng)腎移植手術(shù)。親屬自愿做HLA配型，同時(shí)申請(qǐng)自無關(guān)人群尋找供體腎?，F(xiàn)在是50頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三半年后分配到合適供體腎（無關(guān)人群）；檢查身體，符合手術(shù)要求，進(jìn)行腎臟移植手術(shù)。術(shù)后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補(bǔ)充EPO。定期到醫(yī)院檢測(cè)血藥濃度，檢測(cè)免疫功能。（移植后8年后生存狀態(tài)良好，但長(zhǎng)期服用抗移植排斥藥物。病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植?，F(xiàn)在是51頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三腎臟移植前選擇供者的檢查項(xiàng)目：傳染性疾病病原學(xué)檢查

ABO血型配型

HLA配型符合要求供受雙方淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)陰性腎源選擇的原則：以ABO血型完全相同者為好，選擇最佳HLA配型的供者器官，供者無傳染性疾病。現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三移植后的臨床觀測(cè):1.T細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值、IL-2及其受體的檢測(cè)，判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評(píng)估免疫抑制劑治療效果；2.必要時(shí)做腎組織活檢；3.血藥濃度檢測(cè)，指導(dǎo)合理用藥，減肝、臟腎毒性和免疫抑制。現(xiàn)在是53頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三1.ABO血型抗原一致2.HLA配型主要做HLA-DR、A、B3.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：陰性4.受者血清細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：陰性

受者血清+供者細(xì)胞移植前免疫學(xué)檢測(cè)現(xiàn)在是54頁(yè)\一共有58頁(yè)\編輯于星期三HLA匹配與移植