微生物控制同濟班盧笑從

？省科技廳實施“將實驗動物管理依法納入科技計劃和成果管理”《湖北省實驗動物管理條例》第一頁，共174頁。明確規(guī)定實驗動物管理實行許可證制度，從事實驗動物工作的單位和個人必須按照國家規(guī)定領(lǐng)取實驗動物許可證，依法規(guī)范地生產(chǎn)和使用合格實驗動物?！逗笔嶒瀯游锕芾項l例》第二頁，共174頁。省科技廳決定從2008年開始，在科技計劃和成果管理活動中進一步加強對實驗動物工作的監(jiān)督和執(zhí)法力度。

湖北省科技廳將實驗動物管理依法納入科技計劃和成果管理并啟動實施的通知第三頁，共174頁。一、對涉及實驗動物的科技項目立項、項目驗收、成果鑒定、科技獎勵申報等科技活動依法進行審查。對于應(yīng)用不合格的實驗動物或者在不合格的實驗環(huán)境設(shè)施內(nèi)取得的動物實驗結(jié)果，一律視為無效，其科技項目不予項目驗收和成果鑒定，不予評獎。第四頁，共174頁。二、凡涉及實驗動物的科技項目立項、項目驗收、成果鑒定、科技獎勵申報等，應(yīng)按照下列要求提供材料。

1.科技項目驗收、成果鑒定、科技獎勵申請材料；2.動物實驗實施情況3.實驗動物來源單位開具的《實驗動物質(zhì)量合格證》；4.動物實驗設(shè)施單位開具的《實驗動物設(shè)施使用證明》；5.相關(guān)實驗人員的《實驗動物從業(yè)人員培訓(xùn)合格證書》；6.根據(jù)專家審核意見，提供有關(guān)動物實驗的原始記錄。第五頁，共174頁。三、科技項目驗收、成果鑒定、科技獎勵申報。

項目申報單位條件財務(wù)處有關(guān)處室獲得立項驗收成果鑒定報送與實驗動物有關(guān)的材料實驗動物的合法性合規(guī)性審查并提出審查意見公示第六頁，共174頁。我們拿什么樣的動物做實驗，才能立項、才能鑒定成果、才能獲獎？合格的實驗動物標準化的實驗動物第七頁，共174頁。第八頁，共174頁。

為什么要進行實驗動物的微生物學(xué)控制？第九頁，共174頁。人與動物人與動物試驗第十頁，共174頁。1、威脅人的健康和生命（人獸共患?。?）病毒：流行性出血熱、淋巴細胞脈絡(luò)叢腦炎、B病毒、狂犬病、禽流感。（2）細菌：沙門氏菌、結(jié)核分枝桿菌、布氏桿菌、志賀氏桿菌。（3）寄生蟲：卡氏肺孢子蟲、絲蟲病、弓形蟲、跳蚤。

第十一頁，共174頁。2、烈性傳染病對生產(chǎn)、實驗造成嚴重危害：（1）種子群死亡——不能生產(chǎn)；（2）正在進行的實驗死亡——實驗被迫中斷。例如：鼠痘、禽流感、兔流行性出血癥、犬瘟熱犬細小病毒性腸炎。第十二頁，共174頁。3、影響動物生產(chǎn)和生物學(xué)特性的改變，獲得免疫或隱性感染的動物，會給人假像。造成錯誤的結(jié)果——不真實可靠，沒有重復(fù)性。小鼠肝炎病毒，仙臺病毒、大鼠涎淚腺炎、條件致病菌、囊尾蚴、腸道寄生蟲等等。第十三頁，共174頁。

4、污染

某些病毒造成細胞培養(yǎng)物、腫瘤移植物或者以動物組織作為生產(chǎn)基質(zhì)的生物制品的污染，不僅干擾試驗，還將病毒擴散，以至于危害人類。第十四頁，共174頁。一、高質(zhì)量的實驗動物，結(jié)果可靠。二、高質(zhì)量的實驗動物，對實驗人員的安全有保障。第十五頁，共174頁。為什么要進行實驗動物的微生物學(xué)控制？威脅人的健康和生命對動物生產(chǎn)有影響使實驗被迫中斷實驗的準確性、重復(fù)性有質(zhì)疑

第十六頁，共174頁。為了提高實驗的質(zhì)量對于實驗動物1、必須進行標準化2、必須對實驗動物微生物和寄生蟲控制3、必須將實驗動物的微生物學(xué)等級劃分第十七頁，共174頁。

提醒：

對于有關(guān)實驗動物的病毒、細菌、寄生蟲感染的特殊性。實驗動物原則上是不能用疫苗接種和使用藥物等手段來預(yù)防和控制傳染病病原。第十八頁，共174頁?？赡芨蓴_實驗結(jié)果，使實驗無效或得出錯誤結(jié)論。

采用疫苗、藥物個體治療，成本高兔出血熱癥病毒對我們危害太大了，因此我們可以接種這種疫苗第十九頁，共174頁。但是大型實驗動物可選擇使用對實驗干擾不大的疫苗或藥物一定要給這些孫大圣們接種疫苗第二十頁，共174頁。第二十一頁，共174頁。第一節(jié)實驗動物分級第二節(jié)普通動物

第三節(jié)清潔級動物與無特定病原體動物第四節(jié)無菌動物

第五節(jié)悉生動物

第六節(jié)實驗動物的微生物和寄生蟲監(jiān)測

目錄第二十二頁，共174頁。第一節(jié)實驗動物分級依據(jù)標準等級第二十三頁，共174頁。我們國家醫(yī)院進行的分級依據(jù)人員管理硬件評估團醫(yī)院掛牌等級判斷標準第二十四頁，共174頁。依據(jù)標準等級第二十五頁，共174頁。一、分級的依據(jù)（一）實驗動物病毒感染的分類根據(jù)實驗動物病毒對其自然宿主、人和其他動物的致病性，干擾程度或?qū)ξ廴灸[瘤移植物和生物制劑的嚴重程度，可將其所致疾病分為以下幾種類型。第二十六頁，共174頁。1、對自然宿主、人和其他動物均有較強的致病性，屬于人獸共患病。如：流行性出血熱、狂犬病。2、對自然宿主致病性強，常引起爆發(fā)流行甚至毀滅整個動物群。如兔出血癥、禽流感。3、對自然宿主致病性弱，但可以傳染給人，引起人的致死性感染。如猴皰疹病毒（B病毒）。第二十七頁，共174頁。4、對自然宿主有一定的致病性，可引起疾病流行，影響動物的健康，并對研究工作產(chǎn)生嚴重的干擾，如小鼠肝炎病毒、仙臺病毒。5、對自然宿主、人、其他動物均無明顯致病性，但是污染生物制品、腫瘤移植物和細胞培養(yǎng)物等。如雞白血病病毒、猴病毒40.第二十八頁，共174頁。6、對自然宿主無致病性，但是可以引起其他動物致死性感染。松鼠猴皰疹病毒感染絨猴可致死性淋巴瘤。第二十九頁，共174頁。（二）造成微生物感染的基本因素感染源易感動物內(nèi)源性、外源性傳媒內(nèi)在因素、外在因素第三十頁，共174頁。實驗動物微生物分級的依據(jù)1動物本身的凈化程度2、動物生活環(huán)境的凈化程度第三十一頁，共174頁。二、國內(nèi)與國際實驗動物微生物分級標準1、國際：實驗動物分為三個等級2、國內(nèi)：實驗動物分為四個等級第三十二頁，共174頁。第三十三頁，共174頁。第三十四頁，共174頁。在我國將實驗動物微生物分為四級：普通級動物（CV）清潔級動物（CL）無特定病原體動物（SPF）無菌及悉生動物（GF、GA）第三十五頁，共174頁。第二節(jié)普通動物（CV）一、基本概念

二、普通動物的管理與用途

三、實驗動物常見人獸共患病*(篇幅較大）四、動物間烈性傳染病

第三十六頁，共174頁。一、基本概念不攜帶人獸共患病和動物烈性傳染病的病原。飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)中，動物體內(nèi)外所攜帶的微生物和寄生蟲很難控制。普通環(huán)境第三十七頁，共174頁。第三十八頁，共174頁。第三十九頁，共174頁。

低：微生物分級中級別最低低：生活的環(huán)境要求低低：微生物控制標準低低：質(zhì)量較低低：在實驗研究中敏感性低普通動物特點（5個低）第四十頁，共174頁。飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)：物品、空氣不要求滅菌。只是對溫度濕度、光照、氨濃度有要求第四十一頁，共174頁?？萍紡d組織專家驗收普通級動物實驗室第四十二頁，共174頁。大鼠、小鼠沒有普通級！第四十三頁，共174頁。目前還承認的普通級動物第四十四頁，共174頁。二、普通動物的管理與用途（一）管理陽光、通風、干燥清潔清潔飲用水、干凈飼料防蟲、鼠害、大動物接種必要的疫苗第四十五頁，共174頁。（二）用途1、教學(xué)示教之用；2、某些科學(xué)研究為探索方法而從事的預(yù)試驗之用；3、沒有培養(yǎng)出高級別的動物，不得以用之；第四十六頁，共174頁。三、實驗動物常見人獸共患病第四十七頁，共174頁。由狂犬病病毒（RV)感染犬引起的，以極度興奮、狂躁不安、流涎、攻擊人獸為特征的一種高度接觸性，人獸共患病。1、狂犬病

第四十八頁，共174頁。流行病學(xué)資料：（一）流行區(qū)域與發(fā)病率全球均有發(fā)生，以亞洲和非洲為主。我國是高發(fā)地區(qū)之一。人的發(fā)病率：2004年———2651例2005年———2571例2006年———3000例（大于）

資料來源：俞永新.中國預(yù)防控制狂犬病降低發(fā)病率的思考.中國計劃免疫2007.13（4）第四十九頁，共174頁。（二）易感動物所有的溫血動物都對RV易感。最易感的實驗動物：暫時沒有。次易感的實驗動物：倉鼠、豚鼠、兔、嚙齒類中度易感的實驗動物：牛、羊、馬、狗、靈長類第五十頁，共174頁。主要通過動物咬傷或帶病毒的唾液濺入眼結(jié)膜后致病。人感染狂犬病病毒，且患狂犬病后的死亡率為100%

人被動物咬傷后，傷口應(yīng)立即徹底清洗，不包扎，并立即（24小時內(nèi)）到防疫部門進行預(yù)防注射。

主要存在于中樞神經(jīng)組織、唾液腺和唾液內(nèi)動物試驗工作者應(yīng)該重點記住

做犬類實驗前，應(yīng)給所有犬注射狂犬疫苗；在購入犬做實驗時，注意從標準化犬場購入健康實驗犬做實驗；

第五十一頁，共174頁。是由漢坦病毒引起的主要發(fā)生在大鼠的烈性傳染病，也是很危險的人獸共患病。

有近30種血清型/基因型，在我國流行的主要是野鼠型和家鼠型。2、流行性出血熱(EHFV)

第五十二頁，共174頁。

是一種自然疫源性疾病。主要在野鼠中流行，隱性感染為主。大、小鼠、豚鼠、家兔均可感染。黑線姬鼠、長爪沙鼠對本病特別敏感。

第五十三頁，共174頁。間接接觸生物性媒介傳播多數(shù)成年嚙齒類動物感染后無癥狀。病毒污染血、尿————破損皮膚革螨等昆蟲叮咬————完整皮膚第五十四頁，共174頁。

實驗動物型主要的感染方式是：污染塵埃飛揚形成氣溶膠吸入感染。

人感染后，潛伏期14天，主要表現(xiàn)發(fā)熱、皮膚有出血點、腎功能衰竭和循環(huán)衰竭等癥狀，嚴重時可導(dǎo)致死亡。死亡率較高。第五十五頁，共174頁。實驗人員感染的示意途徑

防止感染流行性出血熱的主要措施是滅野鼠、防止野鼠進入實驗室。第五十六頁，共174頁。

我們國家也發(fā)生多起報道，也造成實驗研究人員死亡。

在日本、韓國、比利時、英國均發(fā)現(xiàn)實驗大鼠引起研究人員感染。第五十七頁，共174頁。

是由LCMV引起的人和多種動物的病毒性疾病，主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是脈絡(luò)叢和腦膜，是一種重要的人獸共患病。3、淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎（lymphocyticchoriomeningitisLCM）第五十八頁，共174頁。

1933年Armstrong和Lille首次分離到LCMV,1935年Ricers和Scott從腦炎病人的腦脊髓液中分類到此病毒。同年Traub發(fā)現(xiàn)小鼠也可以感染LCMV,首次認識到鼠是感染本病的主要傳播者。第五十九頁，共174頁。

野鼠是LCM病毒的天然宿主。所有的嚙齒類動物以及犬、猴、馬、兔、人均易感。動物多呈隱性感染，少數(shù)發(fā)病，出現(xiàn)急性癥狀，死亡率甚低。

第六十頁，共174頁。持續(xù)感染的小家鼠和急性感染的金黃地鼠可長期攜帶病毒，在帶毒小鼠的所以器官中，終生含有高滴度的病毒?？山?jīng)唾液、鼻分泌物、和尿液向外排毒。第六十一頁，共174頁。經(jīng)皮(破損皮膚、完整皮膚）結(jié)膜吸入經(jīng)口患LCM動物的腫瘤可帶病毒并可傳染給研究人員流感樣癥狀

腦膜炎

V第六十二頁，共174頁。

不顯著感染；無腦膜炎癥狀的流感樣疾??；無菌性腦膜炎；

腦膜腦脊髓炎；

人感染后大多呈預(yù)后良好，僅有極少數(shù)病例死亡。人感染LCMV有四種類型：戴口罩、手套第六十三頁，共174頁。4、猴皰疹病毒（Simianherpesvirus）又稱B病毒?。˙virusdisease），是由與人的單純性皰疹病毒相近的B病毒引起的猴良性皰疹性口炎，可自愈。但人感染B病毒后則產(chǎn)生致死性腦炎或腦脊髓炎。第六十四頁，共174頁。直接接觸污染物和空氣傳播我口腔有些皰疹，但是無明顯全身不適的感覺老弟，哥哥我也一樣第六十五頁，共174頁。

與猴接觸的有關(guān)人員應(yīng)注意防止被猴咬傷。當人被猴咬傷后應(yīng)立即用肥皂水清洗傷口，用碘酊消毒。第六十六頁，共174頁。沙門氏菌在自然界分布廣泛，是較常見的人畜共患傳染病，主要引起消化系統(tǒng)的疾病。主要是由鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌引起能感染多種實驗動物，尤以小鼠和豚鼠易感性最高。5、沙門氏菌（salmonella）第六十七頁，共174頁。消化系統(tǒng)吃飯喝水喝奶胎盤屏障保持清潔衛(wèi)生第六十八頁，共174頁。急性發(fā)病以急性敗血癥死亡而不表現(xiàn)臨床癥狀亞急性感染隨糞便排出病菌，感染同類和人，使其在運輸、寒冷和實驗處置時發(fā)病。引起腹瀉、結(jié)膜炎隱性感染動物的臨床表現(xiàn)第六十九頁，共174頁。對干燥、腐敗、日光等因素具有一定抵抗力本菌對化學(xué)消毒劑的抵抗力不強外界條件下可以生存數(shù)周或數(shù)月一般常用消毒劑消毒方法可達到消毒目的第七十頁，共174頁。在靈長類動物中帶菌率較高，引起細菌性痢疾

急性、慢性和帶菌三種表現(xiàn)形式急性表現(xiàn)為高熱、嘔吐、排膿血便，劇烈腹痛，出現(xiàn)脫水和循環(huán)衰竭，如治療不及時極易造成動物死亡。6、志賀氏菌（Shigella）第七十一頁，共174頁。7、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium)人和多種動物易感實驗動物中獼猴最為敏感在購入猴做實驗時，注意在隔離、檢疫后再進行實驗。第七十二頁，共174頁。

為人獸共患體內(nèi)寄生蟲,由襲地弓形蟲引起。終末宿主是貓，中間宿主為貓、大、小鼠、豚鼠、家兔、犬、猴、人等動物。8、弓形蟲（Toxoplasmagondii）病第七十三頁，共174頁。

誤食含弓漿蟲成熟卵囊的食物，或含弓漿蟲包囊的肉類和乳類,就可以得病。是的，而且弓形體病多發(fā)于幼犬第七十四頁，共174頁。

犬被檢測出體外寄生蟲的單位有1北京萬思犬業(yè)繁育中心2北京科宇動物養(yǎng)殖中心3北京金云實驗狗場4北京協(xié)爾鑫生物資源研究所。豚鼠被檢測出體外寄生蟲的單位有：1北京科宇動物養(yǎng)殖中心2海淀區(qū)興隆實驗動物養(yǎng)殖場3海淀興旺動物養(yǎng)殖場

兔被檢測出體外寄生蟲的單位有：1北京科宇動物養(yǎng)殖中心第七十五頁，共174頁。第七十六頁，共174頁。1、鼠痘（mousepox）

又稱脫腳病(ectromelia)，是由鼠痘病毒感染引起的小鼠急性烈性傳染病。

慢性發(fā)病的小鼠表現(xiàn)為：腳、尾和鼻部出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴重者可見腳、尾壞死脫落。三、動物間烈性傳染病第七十七頁，共174頁。隱性感染的實驗小鼠無臨床癥狀，但在許多因素作用時，如運輸、X射線照射、人工感染結(jié)核菌、組織移植等，都可激活鼠痘病毒而使鼠痘流行。實驗處理第七十八頁，共174頁。中科院武漢病毒研究所的安學(xué)芳等報道2003年從患病的實驗小鼠體內(nèi)分離鑒定到一株鼠痘病毒，證明該野毒株對小鼠具有高致病性，人工感染致死率可高達100％

我們這個品系的小鼠對鼠痘病毒抵抗力較強，做實驗的時候，要注意喲！第七十九頁，共174頁。2、兔出血癥（rabbitepidermichemorrhagicfever）是家兔的一種急性烈性傳染病。具有傳播快、病程短，發(fā)病率和死亡率高的特點。分為急性和慢性，但多呈急性發(fā)病。

主要感染青壯年兔，且病情嚴重，多呈急性經(jīng)過。第八十頁，共174頁。

在兔場，防止該病的方法是接種疫苗。接種疫苗后，3-4天后即可產(chǎn)生較強的免疫力，免疫效果可持續(xù)6個月以上第八十一頁，共174頁。

普通級動物：不攜帶人獸共患病和動物烈性傳染病的病原。

我們國家大小鼠沒有普通級。

用途：教學(xué)示教之用；某些科學(xué)研究為探索方法而從事的預(yù)試驗之用；沒有培養(yǎng)出高級別的動物，不得以用之；第八十二頁，共174頁。

狂犬病鼠流行性出血熱病毒LCM病毒猴皰疹病毒沙門氏菌志賀菌結(jié)核分枝桿菌弓形蟲體外寄生蟲病毒細菌寄生蟲人獸共患病病原第八十三頁，共174頁。志賀菌B病毒結(jié)核分枝桿菌兔流行性出血癥狂犬病接種疫苗第八十四頁，共174頁。為了保持普通級動物的健康必須

1、到具有動物生產(chǎn)許可證的單位去購買動物2、在具有動物使用許可證的環(huán)境下實驗3、犬、猴、兔可以接種一些指定的疫苗。

第八十五頁，共174頁。第三節(jié)清潔級動物與無特定病原體動物—、基本概念二、潛在感染的病毒三、條件致病菌四、對實驗干擾大的寄生蟲五、應(yīng)用與飼養(yǎng)管理第八十六頁，共174頁。第八十七頁，共174頁。第八十八頁，共174頁。—、兩個級別動物的基本概念（一）、兩個級別動物概念（二）、兩個級別動物相同點（三）、兩個級別動物不同點第八十九頁，共174頁。（一）、概念1、清潔級動物(Cleananimals,CL)

不帶有人獸共患病、動物烈性傳染病和對科學(xué)研究干擾大的病原。沒有攜帶普通級動物所排除的病原，和科學(xué)研究干擾大的病原第九十頁，共174頁。（1）是根據(jù)我國國情而設(shè)立的等級動物。（2）除普通動物應(yīng)該排除的病原外還不攜帶對科學(xué)研究干擾大的病原（3）來源于SPF動物或剖腹產(chǎn)動物。（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。（5）目前我們國家使用廣泛的實驗動物。第九十一頁，共174頁。特點：3個不應(yīng)有1、血清病毒抗體檢查時可檢出一定滴度的抗體，不應(yīng)有明顯的疾病癥狀。2、不應(yīng)有異常的死亡。3、尸體解剖時，主要臟器、組織無論是眼觀還是病理切片均不應(yīng)有無病變。第九十二頁，共174頁。2、無特定病原體動物（Specificpathogenfreeanimals,SPF)是指動物體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在，但帶有非特定的微生物和寄生蟲的動物。目前國際上公認SPF動物適用于所有科研實驗，是國際標準級別的實驗動物。

除清潔級動物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對研究實驗干擾大的寄生蟲及病原體第九十三頁，共174頁。（1）國際通用（2）除清潔級動物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對研究實驗干擾大的寄生蟲及病原體（3）SPF動物來源于無菌動物（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中（5）目前我們國家使用廣泛的實驗動物第九十四頁，共174頁。清潔級動物（1）是根據(jù)我國國情而設(shè)立的等級動物。（2）除普通級動物應(yīng)該排除的病原外，還不攜帶對科學(xué)研究干擾大的病原。（3）來源于SPF動物或剖腹產(chǎn)動物。（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。（5）目前我們國家使用廣泛的實驗動物。SPF級動物（1）國際通用（2）除清潔級動物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對研究實驗干擾大的寄生蟲及病原體（3）SPF動物來源于無菌動物（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中（5）目前我們國家使用廣泛的實驗動物第九十五頁，共174頁。屏障系統(tǒng)第九十六頁，共174頁。（二）清潔級動物和SPF動物的共同特點：在屏障系統(tǒng)里生活內(nèi)環(huán)境中沒有致病微生物生產(chǎn)、實驗的效果比普通動物好一旦遭到污染后，病原體的傳播強烈第九十七頁，共174頁。（三）不同點第九十八頁，共174頁。二、潛在感染的病毒（動物無癥狀）1．鼠肝炎病毒2．仙臺病毒3．呼腸病毒III型4．嚙齒類動物細小病毒6．乳酸脫氫酶病毒不講是因為時間關(guān)系。請大家要看！第九十九頁，共174頁。

美國國立癌研究所1972年報道，該所保存的細胞系中有白血病病毒、乳酸脫氫酶病毒、小鼠微小病毒、多瘤病毒、LCM病毒、呼腸孤-3病毒污染?？偟奈廴韭收妓４婵倲?shù)的69%。第一百頁，共174頁。1．鼠肝炎病毒（mousehepatitisvirusMHV）

△正常情況下為非致病性，呈隱性感染?！鞑∈蠛蜔o癥狀帶毒鼠是本病的傳染源△消化道、呼吸道、垂直傳播

△只感染小鼠，人不感染第一百零一頁，共174頁?！骺梢鹦∈笾滤佬愿窝住⒛X炎和腸炎△改變肝酶的活性△改變小鼠機體的各種免疫應(yīng)答參數(shù)△感染的裸小鼠常呈暴發(fā)性發(fā)病，嚴重影響腫瘤免疫學(xué)的研究。影響實驗結(jié)果第一百零二頁，共174頁。條件致病、潛在感染感染大小鼠引起呼吸道疾病空氣傳播不易控制

2．仙臺病毒(SendaiVirus)第一百零三頁，共174頁。仙臺病毒

對免疫系統(tǒng)的干擾：可嚴重影響動物體液和細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答對致瘤作用研究的干擾：誤診和不能復(fù)制白血病對小鼠生殖系統(tǒng)的影響：影響胎兒的發(fā)育，乳鼠死亡率增高；中科院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所清潔級KM小鼠和Wistar大鼠仙臺病毒陽性率分別5/20和4/5，處理意見是更換種群。（實驗動物信息8（89）2008，5第一百零四頁，共174頁。三、條件致病菌1.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica）2.巴氏桿菌(Pasteurella)3.綠膿桿菌(P.aeruginosa)4.鼠棒狀桿菌(C.kutscheri)5.泰澤氏菌(Tyzzer’sorganism)6.支原體（Mycoplasma）7.鏈球菌(Streptococcus)

不講，不等于不考。一定要把名字記住第一百零五頁，共174頁。1.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica）○家兔和豚鼠尤為敏感，侵害部位是呼吸器官（鼻腔炎、支氣管肺炎）?！鸨揪鷮Νh(huán)境抵抗力較強，可在異種動物間互相傳染，傳播性強。

○隱性感染，在不良情況下可使動物發(fā)病。第一百零六頁，共174頁。2.巴氏桿菌(Pasteurella)

△多殺巴斯德菌(P．multocida)對兔和小鼠有較強的致病作用，主要侵襲部位呼吸系統(tǒng)。

△嗜肺巴斯德菌(P．pneumotropica)在動物的呼吸道、生殖道帶菌率較高，但致病性不強。（清潔級大鼠）第一百零七頁，共174頁。

診斷和鑒別家兔感染的支氣管敗血性波氏桿菌和多殺巴斯德菌：

能運動

革蘭氏陰性不能運動，兩極染色第一百零八頁，共174頁。3、綠膿桿菌(P.aeruginosa)本菌在自然界廣泛存在，并可正常寄居在動物皮膚、口腔、鼻腔及胃腸道。

易感動物：小鼠、大鼠、豚、兔感染方式：隱形感染。第一百零九頁，共174頁。

實驗刺激：如放射性照射、實驗燒傷、外科處理、使用免疫抑制劑或抗生素時，可誘發(fā)動物致命的綠膿桿菌菌血癥，引起內(nèi)臟器官廣泛的灶性壞死。北京天壇生物制品股份有限公司的NIH小鼠綠膿桿菌陽性率10/10，處理意見是降級或凈化使用。（實驗動物信息8（89）2008，4第一百一十頁，共174頁。四、對實驗干擾大的寄生蟲1、艾美爾球蟲動物的腸道或肝臟內(nèi)。第一百一十一頁，共174頁。2、短膜殼絳蟲（Hvmenolepisnana）

常寄生于大、小鼠、倉鼠和猴的小腸內(nèi)。

感染人，且致病性較強。

短膜殼絳蟲不需要中間宿主。

中科院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所清潔級KM小鼠和Wistar大鼠蠕蟲陽性率分別3/20和1/5，處理意見是更換種群。（實驗動物信息8（89）2008，5第一百一十二頁，共174頁。三、應(yīng)用與飼養(yǎng)管理1．應(yīng)用（1）清潔級動物：是根據(jù)我國國情而設(shè)立的等級動物。適用于所有科研實驗。（2）SPF動物：是國際標準級別的實驗動物，適用于所有科研實驗。第一百一十三頁，共174頁。2．飼養(yǎng)管理

SPF動物和清潔級動物，飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中，飲水、飼料、墊料、空氣都要除菌后才可以使用。第一百一十四頁，共174頁。工作人員要嚴格按照規(guī)范操作定期對動物和環(huán)境檢測第一百一十五頁，共174頁。（一）清潔級動物與SPF動物的概念（二）清潔級動物與SPF動物的特點（三）清潔級動物與SPF動物的異同點

第一百一十六頁，共174頁。

第一百一十七頁，共174頁。

第一百一十八頁，共174頁。住腦原蟲球蟲短膜殼絳蟲

對實驗干擾大的寄生蟲

第一百一十九頁，共174頁。

SPF動物和清潔級動物飼養(yǎng)特點飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中，飲水、飼料、墊料、空氣都要除菌后才可以使用；工作人員要嚴格按照規(guī)范操作；定期對動物和環(huán)境檢測；

第一百二十頁，共174頁。一、概念用現(xiàn)有的檢驗技術(shù)在動物體內(nèi)外的任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲的動物。

第四節(jié)無菌動物（germfreeanimals，GF）

無菌動物的“菌”？？第一百二十一頁，共174頁。

而所謂“無”卻不是絕對的，不過是根據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)知識和檢查方法在一定時期內(nèi)不能檢出已知的微生物和寄生蟲而已。第一百二十二頁，共174頁。

從微生物學(xué)的觀點看，通常實驗動物的體內(nèi)和體外帶有寄生蟲，體內(nèi)還常帶有細菌和病毒，而且還都難于排除某些潛在的傳染病。此外，普通實驗動物的血清中含有抗體。實驗結(jié)果往往不確切。使用無菌動物作實驗就可以克服普通實驗所存在缺點，使實驗結(jié)果正確可靠。第一百二十三頁，共174頁。

用大量抗生素也可以使普通動物暫時無菌，但是這種動物不是無菌動物。第一百二十四頁，共174頁。

因為這種無菌狀態(tài)往往是一過性的，某些殘存的細菌在適當?shù)臈l件下又會在體內(nèi)增殖；即使能把體內(nèi)細菌全部殺死，它們給動物造成的影響卻是無法消除的，例如：特異性抗體的存在、某些組織或器官的病理變化等。無菌動物必須是生來就無菌的動物。第一百二十五頁，共174頁。

無菌動物在自然界并不存在，必須人為的建成。無菌動物的理論基礎(chǔ)和實踐依據(jù)在于胎盤屏障和屏障觀念。第一百二十六頁，共174頁。

1895年有了這個設(shè)想開始，到1969年，已經(jīng)育成了小鼠、家兔、豚鼠、雞、貓、羊、狗、貓、猴、豬等無菌動物。第一百二十七頁，共174頁。二、特征外觀和普通動物相同，但是其機能、形態(tài)結(jié)構(gòu)與普通動物有很大不同。無菌動物除查不到微生物以外，還有許多特征區(qū)別于其它動物。

第一百二十八頁，共174頁。

血液循環(huán)系統(tǒng)：心臟相對縮小，白細胞數(shù)少且值恒定。免疫系統(tǒng)：不發(fā)達。胸腺、淋巴結(jié)、脾臟小。產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱，血中無抗體，對微生物感染異常敏感。第一百二十九頁，共174頁。

消化系統(tǒng)：腸道肌層薄。盲腸肥大。肝臟重量相對下降。營養(yǎng)：無菌動物體內(nèi)不能合成維生素B和K。

代謝：代謝周期長，無菌動物血液中含氮量少，腸管對水的吸收率低。

第一百三十頁，共174頁?？馆椛淠芰Γ簭姟勖洪L。

生殖：無菌條件對動物生殖影響不大

，但是兔與豚鼠因為腸道大，影響產(chǎn)仔。第一百三十一頁，共174頁。三、無菌動物的培育

來源于剖腹產(chǎn)或無菌卵的孵化.第一百三十二頁，共174頁。培育原理：主要是利用胎盤的屏障作用，一般不會將母體的細菌、病毒等致病微生物傳給胎兒，故采用剖腹取胎法獲得幼子，使其生來無菌。飼養(yǎng)在無菌隔離器中。多采用人工喂乳或奶媽代養(yǎng)。第一百三十三頁，共174頁。四、無菌動物的飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)無菌飼養(yǎng)技術(shù)定期檢測補充維生素第一百三十四頁，共174頁。老年學(xué)微生物學(xué)腫瘤學(xué)免疫學(xué)藥理學(xué)生化學(xué)生理學(xué)營養(yǎng)生理學(xué)遺傳學(xué)病理學(xué)器官移植實驗外科學(xué)

無菌動物第一百三十五頁，共174頁。少之又少！第一百三十六頁，共174頁。無菌動物在因為有以下特征，所以對微生物感染敏感：免疫器官相對小血液中無抗體白細胞數(shù)目相對少，且恒定產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱第一百三十七頁，共174頁。無菌動物在消化與代謝方面中有以下特征：

腸道肌層薄，盲腸肥大體內(nèi)不能合成維生素B和K代謝周期長第一百三十八頁，共174頁。

對無菌動物的培育的正確描述是：

無菌動物在自然界并不存在，必須用人為的方法培育而成。生活在隔離系統(tǒng)中；所用一切經(jīng)過消毒滅菌處理；要定期對環(huán)境和動物進行檢測。

第一百三十九頁，共174頁。

第五節(jié)悉生動物

—、概念悉生動物（Gnotobioticanimals,GN）也稱已知菌動物或已知菌叢動物（Animalwithknownbacterialuflora）。

我是無菌動物，你們給我放什么菌進去，我就是什么菌動物。第一百四十頁，共174頁。SPF動物和悉生動物的區(qū)別？

一個是明確知道不攜帶的特定病原的動物；一個是明確知道所固定攜帶的（非病原）微生物。第一百四十一頁，共174頁。人工感染用的腸道細菌各國使用的不盡一致，它也受營養(yǎng)條件的制約。如日本：大腸埃希氏桿菌、表皮葡萄球菌、糞鏈球菌、脆弱似桿菌、乳桿菌.5種。第一百四十二頁，共174頁。二、特性和應(yīng)用悉生動物來自無菌動物，它彌補了無菌動物的某些缺點。悉生動物體內(nèi)帶有某種細菌后，其抵抗力明顯增強，且較無菌動物生命力旺盛，并可代替無菌動物使用。第一百四十三頁，共174頁。老年學(xué)微生物學(xué)腫瘤學(xué)免疫學(xué)藥理學(xué)生化學(xué)生理學(xué)營養(yǎng)生理學(xué)遺傳學(xué)病理學(xué)器官移植實驗外科學(xué)

悉生動物第一百四十四頁，共174頁。（1）微生物的研究無菌動物可用于建立具有人正常菌叢或致病菌叢的動物模型，變成悉生動物，用來研究某些疾病的病原、微生物之間的拮抗、病毒、真菌。第一百四十五頁，共174頁。說明大腸桿菌對痢疾桿菌有拮抗作用。

第一百四十六頁，共174頁。（2）、衰老機理研究無菌動物的壽命比同種普通動物的壽命長，對2—3年齡無菌大鼠的研究證明，其心、腎、肺、腦等部位沒有檢出與年齡相關(guān)的病變，而作為對照組的普通大鼠則有這種變化。

提示微生物的存在與機體衰老有關(guān)。而過去都認為與內(nèi)因和飲食有關(guān)。無菌動物可能在衰老機理的研究中發(fā)揮重要作用。第一百四十七頁，共174頁。（3）、免疫學(xué)研究無菌動物血液中無特異性抗體，很適合做各種免疫現(xiàn)象的研究。研究免疫系統(tǒng)功能和機體受感染后感受性改變的關(guān)系。

第一百四十八頁，共174頁。

丙種球蛋白和特異性抗體的研究：球蛋白來自與消化道菌的刺激。給無菌動物喂無抗原的飼料時，動物（小鼠、豬）血清完全沒有丙種球蛋白和特異性抗體存在。第一百四十九頁，共174頁。如果將單一的菌植入到無菌動物體內(nèi)就可以制備抗該菌的較純的、效價高的、且不被其他微生物污染的抗體。第一百五十頁，共174頁。

無菌動物缺乏抗原刺激，免疫系統(tǒng)處于“休眠”狀態(tài)，對于外來的抗原刺激，有迅速、單一和持久作出反應(yīng)的特性第一百五十一頁，共174頁。

應(yīng)用無菌動物和悉生動物，可研究正常菌群在維持機體適當特異性免疫性和非特異性免疫反應(yīng)所具有的刺激作用，以探討自然抵抗力的機制以及有關(guān)抗原作用后免疫力產(chǎn)生和發(fā)展的過程。無菌動物和悉生動物的誕生大大加速了免疫學(xué)的進程。第一百五十二頁，共174頁。（4）、臨床上的研究

人們很早就認為，齲齒的形成與乳酸桿菌有關(guān)。但是沒有實驗證實。

無菌動物的出現(xiàn)才使人類研究齲齒變成了可能。無菌動物不發(fā)生齲齒。結(jié)果是：沒有細菌的參與齲齒不可能形成，細菌是此病的元兇。但是，引起齲齒的細菌——鏈球菌。第一百五十三頁，共174頁。（5）、在腫瘤研究中的應(yīng)用