基因表達(dá)載體構(gòu)建課件

二基因表達(dá)載體的構(gòu)建思考與討論：1基因載體必須具備的基本條件是什么？2基因工程可做載體的結(jié)構(gòu)有那些？最常使用的載體是什么？3請(qǐng)圖示大腸桿菌質(zhì)粒結(jié)構(gòu)。4從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞DNA分子中提取得到Bt毒蛋白基因能否直接進(jìn)入普通棉細(xì)胞中？如果把目的基因人工注射到普通棉細(xì)胞中，那么該基因在棉細(xì)胞中會(huì)穩(wěn)定存在，復(fù)制和表達(dá)嗎？5假如你是一個(gè)基因工程操作者，若使目的基因進(jìn)入棉細(xì)胞，并能在棉細(xì)胞中遺傳和表達(dá)，你應(yīng)當(dāng)采取什么辦法？你能說(shuō)出其中的理由嗎？（一）基因表達(dá)載體的構(gòu)建2請(qǐng)你定義：基因表達(dá)載體構(gòu)建之含義？1基因工程操作中，構(gòu)建基因表達(dá)載體之目的是什么？

將目的基因、啟動(dòng)子和終止子科學(xué)按裝在經(jīng)修飾和改造完備的載體之上。確保目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在、復(fù)制、遺傳和表達(dá)，使其發(fā)揮作用。請(qǐng)你以質(zhì)粒作載體構(gòu)建基因表達(dá)載體之模式圖基因表達(dá)載體基因表達(dá)載體啟動(dòng)子復(fù)制原點(diǎn)終止子插入目的基因遺傳標(biāo)記基因4建構(gòu)基因表達(dá)載體方法（2）用同種限制酶切割目標(biāo)DNA分子，截取目的基因，使其產(chǎn)生與質(zhì)粒相同的末端。（1）用某種限制酶如EcoRI限制酶，在基因插入位點(diǎn)切割質(zhì)粒，使質(zhì)粒出現(xiàn)一個(gè)切口，露出兩個(gè)黏性末端。（3）依據(jù)目的基因表達(dá)的特點(diǎn)和位置，用限制酶切割受體細(xì)胞相應(yīng)的控制元件——啟動(dòng)子和終止子。（4）用限制酶將啟動(dòng)子和終止子與目的基因連接起來(lái)，成為一個(gè)整體。（5）將目的基因插入質(zhì)粒切口處，用E?coliDNA連接酶把基因與質(zhì)?？p合起來(lái)，成功創(chuàng)建一個(gè)重組DNA分子。建議模擬完成建構(gòu)大腸桿菌基因表達(dá)載體，并寫出具體步驟。2目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞遵循的基本原理是什么？通常借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞和寄生之途徑。（一）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，在自然條件下易感染雙子葉植物和裸子植物，而對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染力。2感染原理：當(dāng)植物體受到損傷時(shí)，傷口處細(xì)胞分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，這時(shí)農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T—DNA分子可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色DNA分子之上。1農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法目標(biāo)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖農(nóng)桿菌目標(biāo)細(xì)胞Ti質(zhì)粒T—DNA核—DNAEcoRI酶DNA重組農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)基因植物侵染轉(zhuǎn)化（三）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞目的基因?qū)氪竽c桿菌最常用的轉(zhuǎn)化方法是：1用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于能夠吸收環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。2用大腸桿菌質(zhì)粒與目的基因進(jìn)行重組形成基因——質(zhì)粒重