中山大學(xué)人類染色質(zhì)標(biāo)本的制備與觀察報告

O二一年七月二十九日O二一年七月二十九日X時間：二時間：二O二一年七月二十九日張皓予15335203一、試驗?zāi)康陌盐杖梭w口腔黏膜上皮細(xì)胞制備的方法。正確識別巴氏小體的特征及其所在位置。說明人體細(xì)胞中核內(nèi)X染色體的數(shù)目和性染色體數(shù)目之間存在的關(guān)系。二、試驗原理X染色質(zhì)呈現(xiàn)于女性體細(xì)胞間期細(xì)胞核內(nèi)。在口腔黏膜細(xì)胞、羊水脫落細(xì)胞、皮膚結(jié)締組織等細(xì)胞中均可檢出。用苯酚品紅改進(jìn)染液染色后，即可觀看到染色較濃，多位于核膜內(nèi)側(cè)緣，1μm40%~60%。Barr和Bertram〔1949〕在雌性貓的神經(jīng)細(xì)胞核中覺察，在多數(shù)核中部有一個小的深染的小體，而在雄性貓的同樣細(xì)胞中只能偶而觀看到這種小體，此后很多人的爭論指出這種與性別有關(guān)的兩型現(xiàn)象在有袋類、偶蹄類、食肉類和靈長類等動物的多數(shù)組織細(xì)胞中存在，而在噬齒類中只在少數(shù)組織中可以觀看到。這種染色質(zhì)小表達(dá)在稱為“性染色質(zhì)”(sexchromatin)，或稱為“巴氏小體”(Barrbody)。這種小體常位于核膜的內(nèi)概況，呈Feulgen陽性反響，標(biāo)明是DNA質(zhì)的存在是由于在雌性哺乳動物核中存在兩個X個XX則上男性不該有性染色質(zhì)。但假設(shè)一個男人有XXY會有一共性染色質(zhì)，雖然表示為男性。同樣，XXX個巴氏小體。因此，性染色質(zhì)實質(zhì)上是一個失活的X什么失活的X染色體會以巴氏小體的形式顯示出來?目前，已有很多證據(jù)證明，在雌性個體中那根失活的X染色體已經(jīng)異染質(zhì)化，成為功能性異染質(zhì)。使用放射自顯影的方法已經(jīng)證明，失活的X染色體的固縮周期與其它染色體是分歧步的，它在S的。此外，人們也已覺察，晚復(fù)制的這根X沿，這個位置也正好是巴氏小體消滅的位置。三、試驗儀器與試劑顯微鏡，水浴鍋，牙簽，載玻片，蓋玻片，鑷子，吸水紙。95%乙醇，1mol/L四、試驗資料男性和女性人體口腔黏膜細(xì)胞。五、試驗步調(diào)受檢者用水漱口，用牙簽刮取受檢者口腔頰部黏膜，把第一次刮取物棄去，然后再次用牙簽刮取黏膜，將其次次刮取物均勻涂布到干凈的載玻片上，晾干。9520min，取出晾干。1MHCl3720min，取出后自來水緩緩沖洗。8min，不枯燥，輕輕蓋上蓋玻片，用吸水紙蓋住輕輕壓片。鏡檢，從低倍鏡到高倍鏡依次觀看。六、試驗結(jié)果1、2、3女性口腔上皮細(xì)胞被染色的細(xì)胞核與巴氏小體〔箭頭〕41、23角的有一不明顯的深色斑塊，可能是巴氏小體。4氏小體。50個女性細(xì)胞有21個有42%；500七、爭論1、鏡檢時覺察女性上皮細(xì)胞標(biāo)本中的細(xì)胞數(shù)較少，密度低較分散〔圖3比照圖4〕?？赡苁怯捎谕科瑫r不敷均勻，大局部涂在玻片邊沿導(dǎo)致在后續(xù)固定、沖洗、染色、壓片等步調(diào)時有細(xì)胞流失。也有可能是染色時間不敷或者刮取細(xì)胞時刮得太少所致。2、觀看覺察女性上皮細(xì)胞當(dāng)中的巴氏小體形態(tài)多有些模糊，且染色較淺，可能是由于染色時間較短導(dǎo)致。本試驗染色時間為8min，后續(xù)試驗可以適當(dāng)延長染色時間〔>10min〕以使試驗效果更加明顯。八、思考題1、男性沒有巴氏小體的理論根底為維持雌雄兩性生物基因表達(dá)全都，細(xì)胞中存在一種劑量抵償效應(yīng)，使細(xì)胞中只含有一份有活性的X染色體，而多余的染色體失活形成巴氏小體，雌性的兩個X染色體所攜帶的兩份基因的遺傳效應(yīng)即可與雄性一個X染色體所具有的一份基因的遺傳效應(yīng)基內(nèi)幕當(dāng)。而由于男性自己就只有一條X染色體，所以不需要使多出的X2、男變女的變性手術(shù)后，該女性有無巴氏小體？沒有，由于變性手術(shù)只是轉(zhuǎn)變了個體的外在表型如個別器官的外形和功能等，不克不及轉(zhuǎn)變其細(xì)胞內(nèi)染色體的構(gòu)成，故該個體仍只有一條X3、鑒定巴氏小體有什么臨床意義？巴氏小體的臨床意義在于能夠用來鑒別性別。例如可以通過對胎兒羊水中取得的脫落的細(xì)胞的檢查推斷性別，如有巴氏小體，胎兒為女性，假設(shè)細(xì)胞中無巴氏小體，胎兒為男性。原男性變性運(yùn)發(fā)動介入女子工程，可通過檢查其白細(xì)胞中有無巴氏小體而確定其性別。通過巴氏小體檢查可確定胎兒性別和查出性染色體特別的患時間：二O二一年七月二十九日者，如克氏〔Klinefelter′s〕綜合征患者外貌為男性，但有一個巴氏小體，可判定患者的核型是