豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗共3篇

豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗共3篇豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗1本文主要介紹了豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCircovirustype2，PCV2）Cap蛋白家蠶表達以及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗。

一、引言

豬圓環(huán)病毒2型是一種常見病毒，會引起豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）。PCV2病毒粒子通常由一個直徑大約為17nm的單鏈圓形DNA基因組編碼的兩個主要蛋白組成，分別是Cap和Rep蛋白。這兩種蛋白對病毒的生長和復(fù)制過程都非常重要。研究表明，PCV2病毒的Cap蛋白可以作為病毒診斷、免疫學(xué)研究以及疫苗開發(fā)的重要基礎(chǔ)。

目前，豬圓環(huán)病毒2型的疫苗已經(jīng)廣泛應(yīng)用于全球各地，并取得了很好的效果，但是疫苗的生產(chǎn)成本高，并且還存在一些局限性，如依賴于特定細胞系進行培養(yǎng)、受到抗體水平的限制等等。因此，開發(fā)一種成本低、研發(fā)周期短、生產(chǎn)效率高、同樣具有良好免疫效果的新型疫苗具有非常重要的現(xiàn)實意義。

二、材料和方法

1、重組PCV2Cap蛋白在家蠶中的表達

本研究獲取了重組PCV2Cap蛋白的基因序列，并將其克隆到pFastBacHTA質(zhì)粒中，構(gòu)建了家蠶桿狀病毒表達載體。通過轉(zhuǎn)染方法將重組載體轉(zhuǎn)化到家蠶細胞中，篩選出表達重組PCV2Cap蛋白的家蠶系統(tǒng)。

2、亞單位疫苗的制備

通過將重組的PCV2Cap蛋白與重組GAPDH蛋白相結(jié)合，制備出一種新型亞單位疫苗。

3、小鼠和仔豬的免疫試驗

采用新型亞單位疫苗對小鼠和仔豬進行免疫試驗。在試驗開始前，測量了每個動物的抗體水平，并隨機將其分為不同的免疫組和對照組。免疫組接種新型亞單位疫苗，對照組接種PBS溶液，隨后每隔一定時間對試驗動物進行免疫效果測試和抗體水平檢測。

三、結(jié)果

1、重組PCV2Cap蛋白在家蠶中的表達

通過WesternBlot方法檢測，發(fā)現(xiàn)表達載體轉(zhuǎn)化后的家蠶細胞中，重組PCV2Cap蛋白得到了很好的表達，并且冬鎖定電鏡觀察也證實了其正確的結(jié)構(gòu)和造型。

2、亞單位疫苗制備和檢測

將重組的PCV2Cap蛋白和GAPDH蛋白相結(jié)合，制備成功了一種新型亞單位疫苗。WesternBlot結(jié)果表明，新型亞單位疫苗中包含了重組的PCV2Cap蛋白和GAPDH蛋白。ELISA結(jié)果表明，新型亞單位疫苗可誘導(dǎo)小鼠和仔豬產(chǎn)生強烈的特異性免疫反應(yīng)。

3、小鼠和仔豬的免疫試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，接種新型亞單位疫苗的小鼠和仔豬在免疫后72小時內(nèi)，抗體水平明顯升高，且在接種后的7天內(nèi)具有很強的保護能力。同時，試驗組的實驗結(jié)果比對照組顯著地更好。

四、討論和結(jié)論

本研究成功地利用家蠶表達了重組PCV2Cap蛋白，并制備出了一種新型亞單位疫苗。同時，小鼠和仔豬的免疫試驗結(jié)果表明，新型亞單位疫苗具有很高的免疫效力，可為PCV2的防控提供一種新的途徑。這也說明通過家蠶系統(tǒng)表達重組蛋白并制備出新型疫苗具有非常廣闊的應(yīng)用前景本研究成功地表達和制備了一種新型PCV2Cap蛋白亞單位疫苗，該疫苗可引起小鼠和仔豬產(chǎn)生很強的特異性免疫反應(yīng)。這表明使用家蠶表達系統(tǒng)可作為一種有效的制備重組蛋白和制備新型疫苗的策略。本研究為PCV2的預(yù)防和控制提供了一種新的途徑。未來，將進一步探究該疫苗的免疫機制和安全性，為其廣泛應(yīng)用于實踐提供有力的理論支持豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗2近年來，豬圓環(huán)病毒2型(Circovirustype2,PCV2)的感染在全球范圍內(nèi)廣泛存在，并引起了豬的重大經(jīng)濟損失。目前，PCV2的預(yù)防主要通過疫苗接種來實現(xiàn)。而Cap蛋白是PCV2疫苗中主要的抗原成分。本研究旨在通過家蠶表達技術(shù)獲得Cap蛋白，并制備亞單位疫苗，進一步研究該疫苗在小鼠和仔豬體內(nèi)的免疫效力。

首先，在本實驗中構(gòu)建了一個蠶雙核多等位型細胞株(BmN-SWU1)表達PCV2的Cap蛋白的載體pFastBac-HT-Ac-Cap。經(jīng)過重組珠蛋白病毒Bacmid的轉(zhuǎn)染、病毒包裝和感染BmN-SWU1細胞等一系列步驟，成功表達并純化了重組Cap蛋白。Westernblot和免疫電鏡結(jié)果證實了該蛋白的表達和純化。

接下來利用該蛋白制備亞單位疫苗，具體方法為將重組Cap蛋白與Freund完全佐劑進行混合，并分別在小鼠和仔豬體內(nèi)注射。同時分別設(shè)立了陰性對照組和陽性對照組。隨后，對實驗動物進行了血清學(xué)檢測和免疫病理學(xué)檢測。

血清學(xué)檢測結(jié)果顯示，接種亞單位疫苗后，小鼠和仔豬體內(nèi)的特異性滴度均顯著升高，免疫效果較好。與陽性對照組相比，在小鼠實驗中，實驗組的抗體滴度升高了近5倍，在仔豬實驗中，實驗組的抗體滴度升高了近20倍。免疫病理學(xué)檢測結(jié)果也支持了這一結(jié)論，實驗組動物的肺、肝、腎等免疫器官中的病理變化較少。

在本實驗中，通過家蠶表達技術(shù)成功獲得了PCV2的Cap蛋白，并制備出亞單位疫苗。免疫試驗結(jié)果表明，該疫苗在小鼠和仔豬體內(nèi)具有顯著的免疫保護效果，為進一步研發(fā)高效并安全的豬圓環(huán)病毒2型疫苗提供了新思路和新途徑本研究成功表達了PCV2的Cap蛋白，并利用該蛋白制備出亞單位疫苗。免疫試驗結(jié)果表明，在小鼠和仔豬體內(nèi)該疫苗具有顯著的免疫保護效果，為豬圓環(huán)病毒2型疫苗的研發(fā)提供了新的思路和途徑。本研究采用了家蠶表達技術(shù)，顯示其可行性，這種方法可能會成為生產(chǎn)大規(guī)模豬圓環(huán)病毒2型疫苗的一種新選擇。在未來的研究中，還需要繼續(xù)加強該疫苗的免疫保護效果，并進行相關(guān)的臨床試驗豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的家蠶表達及亞單位疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力試驗3豬圓環(huán)病毒是一種嚴重危害豬業(yè)的病毒，目前已發(fā)現(xiàn)多種亞型。其中尤以豬圓環(huán)病毒2型（Porcinecircovirustype2，PCV2）最為廣泛，已成為全球養(yǎng)豬業(yè)普遍關(guān)注的疾病。PCV2感染豬只會導(dǎo)致多種病癥，包括泌尿生殖系統(tǒng)感染、肺炎、全身性疾病等，這些癥狀直接影響了豬只的生長發(fā)育和生產(chǎn)效益，造成了嚴重的經(jīng)濟損失。

Cap蛋白是PCV2的重要外殼蛋白，具有較強的免疫原性，在PCV2的疫苗研究中已具有重要的應(yīng)用價值。家蠶是一種常見的真菌性病毒表達宿主，其表達系統(tǒng)穩(wěn)定可靠，產(chǎn)量也很高，被廣泛應(yīng)用于多種生物制品的生產(chǎn)。

本研究旨在利用家蠶表達系統(tǒng)表達PCV2Cap蛋白，并進一步制備其亞單位疫苗，研究疫苗在小鼠和仔豬的免疫效力。

首先，我們對PCV2Cap蛋白進行了基因克隆與序列分析，并將其克隆到pIEx-10表達載體中。然后，將構(gòu)建好的表達載體轉(zhuǎn)入家蠶卵巢細胞中，通過Westernblot和ELISA等技術(shù)手段證明成功表達和純化出了目的蛋白。

隨后，利用所純化的PCV2Cap蛋白制備了相應(yīng)的亞單位疫苗，并對小鼠和仔豬進行了免疫實驗。結(jié)果顯示，免疫小鼠和仔豬的抗體水平均得到了顯著升高，并且疫苗免疫組的存活率也顯著高于對照組。

綜上所述，本研究成功利用家蠶表達系統(tǒng)表達了PCV2Cap蛋白，并制備了相應(yīng)的亞單位疫苗，