分析方法的驗證確認和轉(zhuǎn)移

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明確分析方法的驗證、確認和轉(zhuǎn)移的管理制度，確保所采用的分析方法適合于相應檢測要求和目的，被測樣品質(zhì)量可控，保證得到一致、可靠和確鑿的測定結(jié)果，同時也證明檢驗人員有能力操作分析方法。

2適用范圍

分析方法的驗證：在建立藥品質(zhì)量標準時，分析方法需經(jīng)驗證；在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，質(zhì)量標準分析方法也需進行驗證。

分析方法的確認：在采用藥典分析方法或法定分析方法進行檢驗時，不需要再對方法進行驗證，但是需要進行方法確認，以證明承檢試驗室能夠正確地操作藥典方法。

分析方法的轉(zhuǎn)移：分析方法由公司的研發(fā)試驗室轉(zhuǎn)移到質(zhì)控試驗室；由于生產(chǎn)線轉(zhuǎn)移使分析方法從A生產(chǎn)地點轉(zhuǎn)移到B生產(chǎn)地點；分析方法由某公司轉(zhuǎn)移到合同公司；由于X公司購買了Y公司的產(chǎn)品，方法由Y公司轉(zhuǎn)移到X公司。

3職責及責任者

3.1分析方法驗證及確認的職責及責任者

3.1.1檢驗員負責方案的起草、工作具體實施以及完成記錄、起草報告，負責報告驗證/確認中發(fā)生的任何偏差。

3.1.2化驗室主任負責方案、記錄、報告的審核，負責對發(fā)生的偏差組織調(diào)查，確保方案的正確實施。

3.1.3質(zhì)量部負責人負責方案、報告的審核，監(jiān)視工作的實施，對驗證/確認工作中出現(xiàn)的問題提出改進看法并監(jiān)視落實。

3.1.4質(zhì)量受權人負責方案及報告的批準。3.2分析方法轉(zhuǎn)移的職責及責任者

3.2.1研發(fā)員或轉(zhuǎn)移方人員負責方案的起草、工作具體實施以及完成記錄、起草報告，負責報告驗證/確認中發(fā)生的任何偏差。

3.2.2如需要可邀請轉(zhuǎn)移方人員作為驗證團隊的一員，參與接收方的試驗室方法轉(zhuǎn)移。

3.2.2化驗室主任負責方案、記錄、報告的審核，負責對發(fā)生的偏差組織調(diào)查，確保方案的正確實施。

3.2.3質(zhì)量部負責人負責方案、報告的審核，監(jiān)視工作的實施，對驗證/確認工作中出現(xiàn)的問題提出改進看法并監(jiān)視落實。

3.2.4質(zhì)量受權人負責方案及報告的批準。

4定義

4.1分析方法：分析方法是為完成檢驗項目而設定和建立的測試方法，它詳細描述了完成分析檢驗的每一步驟。一般包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗、供試品溶液與對照品溶液等的制備，測定，計算及測定結(jié)果的報告等。測試方法可采用化學分析方法和儀器分析方法。這些方法各有特點，同一測試方法可用于不同的檢測項目，但驗證內(nèi)容可不一致。

4.2分析方法驗證：分析方法驗證是試驗室通過試驗設計和測試，證明被驗證的方法適用于該方法擬定的檢測用途。

4.3分析方法確認：根據(jù)方法的繁雜性和特點，對藥典方法或法定方法中關鍵的方法學參數(shù)進行有選擇性的考察，以證明分析方法適用于被測樣品，被測樣品的質(zhì)量可控，方法可行，同時還證明方法適用人員有能力成功地操作藥典分析方法或者法定分析方法。

4.4分析方法轉(zhuǎn)移：一個試驗室建立了分析方法并經(jīng)過驗證后，當其他試驗室（方法接收試驗室）再使用這個方法進行檢驗檢測時，接收方法的試驗室需要證明其能夠成功地在本試驗室中運行該方法。

4.5確鑿度：系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，確鑿度應在規(guī)定的范圍內(nèi)測定。

4.6縝密度：系指在規(guī)定的條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)屢屢取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度?？b密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。在一致條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的縝密度稱為重復性；在同一個試驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結(jié)果之間的縝密度，稱為中間縝密度；在不同試驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的縝密度，稱為重現(xiàn)性。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應考察方法的縝密度。

4.7專屬性：系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）存在下，采用的方法能正確測定被測物的特性。鑒別反應、雜質(zhì)檢查和含量測定方法，均應考察其專屬性。如方法專屬性不強，應采用多種不同原理的方法予以補充。

4.8檢測限：系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。藥品的鑒別試驗和雜質(zhì)檢查方法，應通過測試確定方法的檢測限。檢測限僅作為限度試驗指標和定性鑒別的依據(jù)，沒有定量意義。

4.9定量限：系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應符合確鑿度和確切度要求。4.10線性：系指在設計的范圍內(nèi)，測定響應值與試樣中被測物濃度呈比例關系的程度。

4.11范圍：系指分析方法能達到一定縝密度、確鑿度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。4.10耐用性：系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為所建立的方法用于日常檢驗提供依據(jù)。

5程序內(nèi)容

5.1驗證方法的內(nèi)容與指標

需驗證的分析項目有：鑒別試驗、限量或定量檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等，中藥中其他殘留物、添加劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等的測定方法也應進行必要驗證。

驗證指標有：確鑿度、縝密度(包括重復性、中間縝密度和重現(xiàn)性)、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。在分析方法驗證中，須采用標準物質(zhì)進行試驗。由于分析方法具有各自的特點，并隨分析對象而變化，因此需要視具體方法擬訂驗證的指標。表1中列出的分析項目和相應的驗證指標可供參考。

表1檢驗項目和驗證指標

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項目鑒別內(nèi)容確鑿度縝密度中間縝密度專屬性②檢測限定量限線性范圍耐用性否是否否否否是重復性否否雜質(zhì)測定定量是是是①是否③是是是是限度否否否是是否否否是含量測定及溶出量測定是是是①是否否是是是是是是是否是是是是校正因子備注：①已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間縝密度

②如一種方法不夠?qū)?，可用其它分析方法予以補充③視具體狀況予以驗證

參數(shù)驗證方法與接受標準：下面所描述的是分析方法驗證所需遵守的一般指導性方法。5.1.1確鑿度

在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份樣品的結(jié)果進行評價；或設計3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進行評價。對于化學藥，一般中間濃度參與量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品參與量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1,1:1,0.8:1左右，應報告已知參與量的回收率（%），或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其相對標準偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）；對于校正因此，應報告測定方法、測定結(jié)果和RSD%。樣品中待測定成分含量和回收率限度關系可參考表2。在基質(zhì)繁雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當放寬。

表2樣品中帶測定成分含量和回收率限度

帶測定成分含量100%回收率限度（%）98～101阻止復印

10%1%0.1%0.01%10μg/g（ppm）1μg/g10μg/kg(ppb)5.1.2縝密度5.1.2.1重復性

95～10292～10590～10885～11080～11575～12070～125在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份的結(jié)果進行評價；或設計3中不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進行評價。

5.1.2.2中間縝密度

考察隨機變動因素如日期、不同分析人員、不同一起對縝密度的影響，應設計方案進行中間縝密度試驗。

5.1.2.3重現(xiàn)性

國家藥品質(zhì)量標準采用的分析方法，應進行重現(xiàn)性試驗，如通過不同試驗室檢驗獲得重現(xiàn)性結(jié)果。

5.1.2.4數(shù)據(jù)要求

均應報告偏差、標準偏差、相對標準偏差或置信區(qū)間。樣品中帶測定成分含量和縝密度可接受范圍參考表3。在基質(zhì)繁雜、含量低于0.01%及多成分等分析中，縝密度接受范圍可適當放寬。

表3樣品中帶測定成分含量和縝密度RSD可接受范圍

帶測定成分含量100%10%1%0.1%0.01%重復性（RSD%）11.5234重現(xiàn)性（RSD%）23468阻止復印

10μg/g（ppm）1μg/g10μg/kg(ppb)5.1.3專屬性5.1.3.1鑒別反應

6815111632應能區(qū)分可能共存的物質(zhì)和結(jié)構(gòu)相像化合物。不含被測成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相像或組分中的有關化合物，應均呈陰性反應。5.1.3.2含量測定和雜質(zhì)測定

采用色譜法和其它分開方法，應附代表圖譜，以說明方法的專屬性，并應標明諸成分在圖中的位置，色譜法中目標峰應為純峰，且目標峰與其它共存物質(zhì)峰達到基線分開，分開度應≥1.5(假使目標峰與某些組分的分開度達不到要求，但對測定結(jié)果無明顯影響，則可以適當降低標準)。

在雜質(zhì)可獲得的狀況下，對于含量測定，試樣中可以參與雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測定結(jié)果。對于雜質(zhì)檢查，也可以向試樣中參與一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)之間能否得到分開。

在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的狀況下，可將含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進行測定，與另一個經(jīng)驗證了的方法或藥典方法比較結(jié)果。也可用強光照射、高溫、高濕、酸(堿)水解或氧化的方法進行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑對含量測定和雜質(zhì)測定的影響。含量測定方法應比對二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應比對檢出的雜質(zhì)個數(shù)，必要時可采用光二極管陣列檢測器和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查。5.1.4檢測限5.1.4.1直觀法

用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠檢測出的最低濃度和量。5.1.4.2信噪比法

用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2:1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。

5.1.4.3基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法

依照LOD=3.3δ/S公式計算。

式中LOD：檢測限；δ：響應值的偏差；S：標準曲線的斜率。

δ可以通過以下方法測得：測定空白紙的標準偏差；標準曲線的剩余標準偏差或截距的標準偏差來代替。

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5.1.4.4數(shù)據(jù)要求

上述計算方法獲得的檢測限度數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進行驗證。應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。5.1.5定量限5.1.5.1直觀法

用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地定量測定的最低定量濃度或量。5.1.5.2儀器測定法

用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地定量的被測物質(zhì)的最低濃度或量。一般以信噪比為10︰1時相應的濃度或注入儀器的量確定定量限。5.1.5.2儀器測定法

用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地定量的被測物質(zhì)的最低濃度或量。一般以信噪比為10︰1時相應的濃度或注入儀器的量確定定量限。

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5.1.5.3基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法

依照LOD=10δ/S公式計算。

式中LOD：檢測限；δ：響應值的偏差；S：標準曲線的斜率。

δ可以通過以下方法測得：測定空白紙的標準偏差；標準曲線的剩余標準偏差或截距的標準偏差來代替。5.1.5.4數(shù)據(jù)要求

上述計算方法獲得的定量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進行驗證。應附測試圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)果，包括確鑿度和縝密度驗證數(shù)據(jù)。5.1.6線性

應在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關系?？捎猛粚φ掌焚A備液經(jīng)縝密稀釋，或分別縝密稱定，制備一系列供試樣品的方法進行測定，至少制備5份不同濃度的對照品溶液。以測得的響應信號對被測物濃度作圖，觀測是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經(jīng)數(shù)學轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算?；蛘呖刹捎妹枋鰸舛?響應關系的非線性模型。

數(shù)據(jù)要求：應列出回歸方程、相關系數(shù)和線性圖（或其他屬性模型）。其相關系數(shù)R應≥0.990。5.1.7范圍

范圍應根據(jù)檢驗方法的具體應用和線性、確鑿度、縝密度結(jié)果和要求確定。原料藥、制劑含量測定，范圍一般為測試濃度的80～120%；

制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測試濃度的70～130%；特別劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當放寬；

溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍一般為限度的±30%；

如規(guī)定了限度范圍，則應根據(jù)初步實際測定數(shù)據(jù)，擬定為規(guī)定限度的±20%；雜質(zhì)測定，范圍應根據(jù)初步實際測定數(shù)據(jù)，擬定為規(guī)定限度的±20%。

如含量測定與雜質(zhì)檢查同時進行，用峰面積歸一化法進行計算，則線性范圍應為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的+20%。5.1.8耐用性

開始研究分析方法時，就應考慮其耐用性。假使測定條件要求苛刻，則應在方法中寫明，并注明可以接受變動的范圍，可以先采用均勻設計確定主要影響因素，再通過單因素分析等確定變動范圍。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)、時間等。高效液相色譜法中典型的變動因素有：滾動相的組成和pH值、不同品牌或不同批號的同類型色譜柱、柱溫、流速等。氣相色譜法變動因素有：不同品牌或批號的色譜柱、固定相、不同類型的擔體、載氣流速、柱溫、進樣口和檢測器溫度等。

經(jīng)試驗，測定條件小的變動應能滿足系統(tǒng)適用性試驗要求，以確保方法的可靠性。

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5.1.9分析方法的再驗證

在某些狀況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進行全面或部分驗證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗證。

再驗證原則：根據(jù)改變的程度進行相應的再驗證。

當原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進行驗證，以證明有關物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應無干擾。

當制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的確鑿度，因此需要對鑒別、含量測定方法進行再驗證。

當原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時，可能會影響雜質(zhì)檢查和含量測定的專屬性和確鑿度，因此需要對雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法進行再驗證。

當質(zhì)量標準中某一項目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發(fā)生改變，則需要重新進行檢測限、專屬性、確鑿度、縝密度、線性等內(nèi)容的驗證，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。

方法再驗證是對分析方法的完善過程，應根據(jù)實際改變狀況進行再驗證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。5.2分析方法的確認

分析方法的確認要求應建立在對方法和方法應用的產(chǎn)品的繁雜性評估基礎上。盡管不需要對一個藥典方法進行全面再驗證來確認方法在實際使用條件下適用，但是一些分析性能參數(shù)可以用于確認目的。僅需要評價那些被認為是適合于方法確認的性能參數(shù)。確認過程的程度和范圍可能取決于使用者的培訓狀況和經(jīng)驗水平、方法的類型和相關設備或儀器、具體的操作步驟以及被檢測的產(chǎn)品。",除了一些特別的分析方法外，試驗室日常測試操作步驟尋常不需要確認，例如：枯燥失重、熾灼殘渣、酸值和簡單的儀器方法。

分析方法的確認遵循以下指導看法：

①通過系統(tǒng)適用性試驗證明試驗室的操作能力和檢驗系統(tǒng)的適用性；②判斷方法的繁雜程度；

③確定方法操作的關鍵步驟和影響檢驗結(jié)果的關鍵方法學參數(shù)

④根據(jù)方法的繁雜程度，如必要，選擇最為關鍵的幾個方法學參數(shù)進行考察。

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5.3分析方法的轉(zhuǎn)移5.3.1分析方法轉(zhuǎn)移類型

分析程序轉(zhuǎn)移（TPA），尋常也被稱作分析方法轉(zhuǎn)移，是指當一個試驗室（接收方）在使用由另一個試驗室（轉(zhuǎn)移方，也稱作轉(zhuǎn)出方）所開發(fā)的分析方法前，確保接受方試驗室具有系統(tǒng)的知識和能力來轉(zhuǎn)移該方法資格的一系列文件記錄過程。分析方法轉(zhuǎn)移的類型包括對比測試、再驗證或者部分再驗證、轉(zhuǎn)移豁免。具體見表4。

表4分析方法轉(zhuǎn)移分類狀況表

序號1種類名稱對比試驗適用范圍普遍方法轉(zhuǎn)出方和接收方對同一批次（原則上不少于3批）的樣品進行檢驗結(jié)果對比2共同驗證兩個試驗室或多個試驗室間接收方作為驗證小組的成員參與方法的全部或部分驗證（重現(xiàn)性）34再驗證轉(zhuǎn)移豁免不常使用1.新產(chǎn)品的成分與已有的品種的成分類似或濃度類似，并且對于使用的分析方法，接收方有經(jīng)驗；2.檢驗方法與已使用的方法一致或十分接近；3.負責方法開發(fā)、驗證或產(chǎn)品日常檢驗的人員由轉(zhuǎn)出方調(diào)到接收方。4.待轉(zhuǎn)移的方法出自藥典，并且沒有改變，這種狀況下只需做方法確認。接收方進行部分或全驗證假使有資格轉(zhuǎn)移豁免，接收方應以適當?shù)睦碛蓪⑵溆涗浵聛?/p>

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5.3.2分析方法轉(zhuǎn)移的步驟

分析方法轉(zhuǎn)移的步驟見表5。

表5分析方法轉(zhuǎn)移步驟

階段轉(zhuǎn)移方案批準前負責人工作內(nèi)容轉(zhuǎn)移方負責提供分析方法、對照品、驗證報告，必要的文件，提供必要的培訓。接收方1.確保具有適當資質(zhì)的人員；2.對人員進行適當?shù)呐嘤枺M行的培訓應記錄；3.確保儀器設備經(jīng)過校驗和確認；4.確認試驗室體系符合相應的法規(guī)；5.在轉(zhuǎn)移方案簽字前接收方使用一下轉(zhuǎn)移方的方法并確認存在哪些問題。雙方轉(zhuǎn)移方和接收方間應預先開個轉(zhuǎn)移會議，這樣便于雙方就方法轉(zhuǎn)移過程爭議的地方可以講明白，并解答轉(zhuǎn)移過程中