自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定

自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定摘要：本實驗應(yīng)用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖，因此，以某種培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是近似值【1】。目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在保證無菌的環(huán)境下，采取自來水的樣品，利用培養(yǎng)基制作平板，按菌落計數(shù)方法進(jìn)行計數(shù)，通過實驗測得的菌落數(shù)對照國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)來判斷水質(zhì)【2】。良好的飲用水細(xì)菌總數(shù)應(yīng)＜100CFU/mL，而＞500CFU/mL則不適宜飲用，我國飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB5749—85)規(guī)定每毫升水樣細(xì)菌總數(shù)37°。培養(yǎng)24h不得大于100個。對自來水用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定細(xì)菌總數(shù)，通過觀測得到如下結(jié)果：菌落數(shù)為61個/mL。關(guān)鍵詞：自來水普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板菌落計數(shù)技術(shù)細(xì)菌總數(shù)0引言各種天然水中常含一定數(shù)量的微生物，而水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。水中微生物的主要來源是：水中的水生性微生物(如光合藻類)、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道的污染物和人畜的排泄物等【3】。水是生命之源，人的生存離不開水環(huán)境，水質(zhì)的好壞對人們生活起著至關(guān)重要的作用，而判斷水質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，微生物在水中的數(shù)量、種類是必不可少的。自來水的微生物學(xué)檢驗，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時也是評價水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。水中細(xì)菌總數(shù)可說明被有機物污染的程度，細(xì)菌數(shù)越多，有機物質(zhì)含量越大。細(xì)菌總數(shù)是指1mL水樣在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，37。。經(jīng)24h培養(yǎng)后，所生長的菌落數(shù)。本實驗只包括一群能在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫的需氧細(xì)菌菌落總數(shù)【4】。微生物學(xué)指標(biāo)是評價水中生物性污染的重要指標(biāo)，是水質(zhì)在流行病學(xué)上安全的保證。近年來隨著環(huán)境污染加重我國水質(zhì)不斷下降，給居民飲水安全帶來隱患。因此，我們想通過測定自來水中的細(xì)菌總數(shù)，了解水質(zhì)情況，呼吁人們保護(hù)水資源。1材料和方法1.1時間與地點本實驗于2010年10月26?27日在太原師范學(xué)院微生物實驗室完成。1.2材料1.2.1實驗材料自來水1.2.2實驗試劑牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1mol/LNaOH1mol/LHCl蒸餾水1.2.3實驗儀器高壓蒸汽滅菌鍋培養(yǎng)皿三角燒瓶天平牛角匙pH試紙(pH5.5-9.0)量筒玻璃棒電熱爐溫度計1.3方法1.3.1滅菌1.3.1.1首先將高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)鍋層取出，再向外鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。1.3.1.2放回內(nèi)鍋層,并放入培養(yǎng)皿、三角燒瓶、量筒、移液管。1.3.1.3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺旋，使螺旋松緊一致，防止漏氣。1.3.1.4用電爐加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷氣。待冷氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力上升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用0.1MPa，121°C，20min滅菌。1.3.1.5滅菌時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至“0時打開排氣閥，旋松螺旋，打開蓋子，取出滅菌物品。1.3.2水樣的采取放開水龍頭使水流5min后，用已滅菌的三角燒瓶接取水樣，以待分析。1.3.3制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基稱量用天平稱量33g牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基粉末置于燒杯中。溶化在上述燒杯中加入1000mL蒸餾水，然后，在石棉網(wǎng)上加熱，并用玻璃棒攪拌直至沸騰2分鐘。調(diào)pH在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH。如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。1.3.4細(xì)菌總數(shù)測定1.3.4.1滅菌移液管吸取1mL水樣，注入其中一套滅菌的培養(yǎng)皿中。共做2個平皿。1.3.4.2分別傾注約15mL已溶化并冷卻到45。左右的牛肉膏蛋白豚瓊脂培養(yǎng)基，并立即在桌上作平面旋搖，使自來水和培養(yǎng)基混勻。1.3.4.3另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注肉膏蛋白豚瓊脂培養(yǎng)基15mL，作空白對照。1.3.4.4待培養(yǎng)基凝固后，倒置于37。溫箱中，培養(yǎng)24小時，進(jìn)行菌落計數(shù)。兩個平板的平均菌落數(shù)，即為1mL自來水的細(xì)菌總數(shù)。2結(jié)果與分析2.1結(jié)果2.1.1菌落照片2.1.2實驗數(shù)據(jù)測得培養(yǎng)皿中細(xì)菌菌落數(shù)如下表：自來水中菌落總數(shù)表實驗數(shù)據(jù)平板序號12對照組菌落數(shù)目（個）11211050自來水中細(xì)菌總數(shù)=（平板1菌落數(shù)+平板2菌落數(shù)）-2-對照組菌落數(shù)實驗中對照組的菌落為50，處理上表中數(shù)據(jù)知，該自來水中細(xì)菌平均數(shù)為61個/mL。2.2分析實驗測的該自來水中的細(xì)菌總數(shù)為61個/mL,符合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)。3討論人的生存離不開水環(huán)境，水質(zhì)的好壞對人們生活起著至關(guān)重要的作用，而判斷水質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，微生物在水中的數(shù)量、種類是必不可少的。細(xì)菌是微生物界的一個大類群，它與人類的生活密切相關(guān)，其中有的有益，有的有害，為了我們更好的生活，我們必須研究細(xì)菌，并掌握一些方法，來使細(xì)菌向人類有用的方面發(fā)展【5】。本實驗對照組中的菌數(shù)應(yīng)為0個，但實驗測得數(shù)據(jù)為50個，這主要是因為有雜菌混入，雜菌來源可能：培養(yǎng)皿滅菌不充分；滅菌后在空氣中放置又落入雜菌；培養(yǎng)基傾入培養(yǎng)皿后沒有立即加蓋；配置培養(yǎng)基時反復(fù)升降溫（沒有立即轉(zhuǎn)移使培養(yǎng)基凝固），使一些雜菌產(chǎn)生抗性【6】。雖然水中存在大量的細(xì)菌且種類繁多，但由于牛肉膏蛋白胨所提供的生長條件的限制，培養(yǎng)基中所得的細(xì)菌群落較單一為大腸桿菌，呈圓片狀【7】。實驗過程中應(yīng)做到：（1）將培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)。這樣絕大多數(shù)的細(xì)菌會著生在培養(yǎng)基表面。這是由于菌種在固體培養(yǎng)基上借助重力作用而形成的，有利于菌落計數(shù)。（2）倒置培養(yǎng)基時應(yīng)降溫至45°C，溫度過高會燙死大腸桿菌，過低會使培養(yǎng)基凝固；（3）傾注培養(yǎng)基后要將平皿在桌面上做勻速旋轉(zhuǎn)，將培養(yǎng)基和自來水樣搖勻，在培養(yǎng)基中觀察時可見一些菌苔就是平皿沒有搖勻的結(jié)果；（4）培養(yǎng)基不能反復(fù)升降溫，傾入培養(yǎng)皿后應(yīng)立即加蓋，且滅菌后不應(yīng)在空氣中放置，以免雜菌混入；（5）應(yīng)在高溫時在對照組中倒入培養(yǎng)基，否則對照組中會出現(xiàn)大量的菌落【8】。測定水樣是否符合飲用水的微生物方面的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，通常包括下列兩項：細(xì)菌總數(shù)測定和總大腸菌群的測定。除采用平板菌落計數(shù)測定細(xì)菌總數(shù)外，現(xiàn)在已有許多快速、簡便的微生物檢測儀或試劑紙（盒或卡）等用來測定水中細(xì)菌總數(shù)【9】。4結(jié)論實驗測的該自來水中的細(xì)菌總數(shù)為61個/mL，符合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)。通過此實驗，我們可知平板菌落計數(shù)技術(shù)法是測定水樣中細(xì)菌總數(shù)比較方便的方法，但它也存在一些無法避免的因素，比如在數(shù)菌落時，菌落太小且又處于培養(yǎng)基內(nèi)部，這樣就不能準(zhǔn)確地觀察到菌落，從而影響實驗結(jié)果；又如在培養(yǎng)過程中由于細(xì)菌之間的相互抑制也會使菌落計數(shù)的結(jié)果減少【10。因此，只有我們在不需要精確的情況下才可使用此方法。本實驗的成敗在于滅菌、無菌操作技術(shù)、培養(yǎng)基的溫度等方面是否操作正確，所以，今后要更加注意其方法及原理。參考文獻(xiàn)沈萍陳向東主編《微生物學(xué)實驗》（第4版）高等教育出版社李根生《干燥培養(yǎng)基恩德制造及應(yīng)用》上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1994陳聲明劉麗麗《微生物學(xué)實驗研究方法》北京：人民教育出版社，1982郝士?！冬F(xiàn)代細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)基和生化試驗手冊》北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社，1992張清敏，李洪遠(yuǎn)，王蘭.環(huán)境生物學(xué)實驗技術(shù)，2005顧孔珍錢純羅岳平.用R2AAgar培養(yǎng)基提高飲用水中細(xì)菌總數(shù)的檢出率[J].凈水技術(shù)，2004,2