血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶1SGK1在RON介導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞侵襲性生長中的作用百替生物課件

報(bào)告人：Adam2014-12-25血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶1（SGK1）在RON介導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞侵襲性生長中的作用簡介SGK1作為RON、ERK1/2、β-catenin和EMT信號傳導(dǎo)的關(guān)鍵蛋白，在RON介導(dǎo)的肺腺癌發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。Questions：受體酪氨酸激酶RON：RON是受體酪氨酸家族MET原癌基因亞家族中的一員,主要在上皮細(xì)胞中表達(dá),其配體是巨噬細(xì)胞刺激蛋白(macrophagestimulatingprotein,MSP)。激活后的RON在體外引起細(xì)胞的分化、遷移、形變和基質(zhì)侵襲。RON的過度表達(dá)、突變及其剪切變異體與人類的結(jié)直腸癌、乳腺癌、肺癌及腎癌等多種人體上皮源性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。關(guān)鍵詞RON激活方式：研究顯示RON激活的方式有2種,即配體依賴和配體非依賴方式。

RON與MSP結(jié)合后,迅速通過二聚化產(chǎn)生自身激酶域的磷酸化,而導(dǎo)致催化效率極大提高,并且磷酸化的RON亦能發(fā)生構(gòu)象變化,C末端產(chǎn)生特殊的結(jié)合信息分子的多功能錨定位點(diǎn)。而后通過不同的級聯(lián)途徑轉(zhuǎn)導(dǎo)各種信號。這些級聯(lián)徑中包括Ras/有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK),磷脂酰肌醇-3-磷酸(PI-3K)/AKT,junN-末端激酶(JNK)/應(yīng)激激活蛋白激酶,β-catenin,Smad和核因子-kB(NF-kB)分子等。關(guān)鍵詞RON的致癌機(jī)制：EMT分類：I型EMT：與胚胎形成相關(guān)，涉及Wnt、Notch通路；II型EMT：與損傷修復(fù)相關(guān)，涉及Smads、ERK-MAPK、PI3K-AKT通路；III型EMT：與上皮細(xì)胞惡性腫瘤相關(guān)，涉及酪氨酸激酶受體、整合素、Wnt、NF-kB、TGF-β1通路。關(guān)鍵詞血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶（SGK）：一種新的絲/蘇氨酸蛋白激酶，與蛋白激酶B（PKB/Akt）具有高度同源性。當(dāng)細(xì)胞受到糖皮質(zhì)激素或血清刺激后，SGK的轉(zhuǎn)錄水平會迅速升高，因此命名為血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶，有SGK1、2、3三種異構(gòu)體。SGK1參與了人體許多重要的生理過程，如離子通道活化、細(xì)胞增殖與凋亡等。關(guān)鍵詞Erk1/2：細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular

regulated

protein

kinases,

ERK)分為ERK1和ERK2,統(tǒng)稱為ERK1/2,主要被各種生長因子、離子射線、過氧化氫等磷酸化而激活,進(jìn)入細(xì)胞核作用于E1k-1,c-myc,c-fos,c-jun,ATF,NF-kB和AP-1等轉(zhuǎn)錄因子,促進(jìn)某些基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá),和細(xì)胞的增殖與分化密切相關(guān)。關(guān)鍵詞臨床樣本中指標(biāo)檢測A549細(xì)胞中指標(biāo)檢測siRNA干擾A549細(xì)胞SGK1抑制劑處理肺腺癌動物造模小鼠體內(nèi)的siRNA干擾課題設(shè)計(jì)1.臨床樣本中指標(biāo)檢測實(shí)驗(yàn)分組：肺腺癌組織癌旁正常組織實(shí)驗(yàn)方法：WesternblotqRT-PCR檢測指標(biāo)：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist2.A549細(xì)胞中指標(biāo)檢測實(shí)驗(yàn)分組：A549細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法：WesternblotqRT-PCR檢測指標(biāo)：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist4.SGK1抑制劑處理實(shí)驗(yàn)分組：A549細(xì)胞A549+SGK1抑制劑處理實(shí)驗(yàn)方法：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染W(wǎng)esternblotqRT-PCRCCK-8流式細(xì)胞術(shù)Transwell檢測裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測指標(biāo)：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist5.肺腺癌動物造模實(shí)驗(yàn)分組：正常小鼠模型小鼠實(shí)驗(yàn)方法：見下頁檢測指標(biāo)：利用WB檢測RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist6.小鼠體內(nèi)的siRNA干擾實(shí)驗(yàn)分組：正常小鼠造模組siRNA干擾小鼠造模組實(shí)驗(yàn)方法：WesternblotHE染色檢測指標(biāo)：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E