血型的鑒定方法及操作課件

紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測血型的發(fā)現(xiàn)1900年，ABO血型系統(tǒng)1940年，Rh血型系統(tǒng)

KarlLandsteiner血型（bloodtype)狹義地講，存在于紅細胞上的特異性同種抗原。廣義地講，是人類遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血液中各種成分都有其各自型別。紅細胞血型抗體天然抗體、免疫抗體規(guī)則抗體、不規(guī)則抗體完全抗體，不完全抗體同種抗體，自身抗體天然抗體和免疫抗體天然抗體：ABO血型系統(tǒng)中，A型個體血漿中天然存在抗B，B型個體血漿中存在抗A。多數(shù)天然抗體是IgM型，最佳反應溫度為室溫或更低。免疫抗體：一般通過輸血、妊娠、注射三種方式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是IgG型，最佳反應溫度是37oC。天然抗體和免疫抗體特性比較規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體規(guī)則抗體：ABO系統(tǒng)產生抗Ａ、抗Ｂ是有規(guī)律的。

Landsteiner規(guī)律：Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ不規(guī)則抗體：除ABO系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產生的抗體均不符合上述規(guī)律。

正常人血液中一般沒有不規(guī)則抗體，又稱為意外抗體（unexpectedantibody）。

完全抗體和不完全抗體完全抗體：在鹽水介質中能凝集紅細胞抗體，多為IgM抗體。不完全抗體：能使紅細胞致敏，但在鹽水質中不能凝集紅細胞，需要通過抗球蛋白法或其他非鹽水介質法進行檢測，多為IgG抗體?？笽gG同種抗體、自身抗體同種抗體：針對患者缺乏的抗原所產生的抗體即為同種抗體，如Rh陰性者輸血后產生的抗Ｄ抗體。自身抗體：針對自身抗原產生的抗體，如引起自身免疫型溶血性貧血。一、ABO血型系統(tǒng)

1.ABO血型抗原和抗體特性2.ABO血型的遺傳與生化（1）ABO基因型與表型

A型——AA，AOB型——BB，BOAB型——ABO型——O

A，B是顯性基因，O是隱性基因

ABO基因不是產生ABO抗原的遺傳密碼（2）ABO血型的生化合成H基因——

α

–L-fucocyltransferase，19chr

A基因——

α–N-acetyl-0-galactosaminyltransferase，9chrB基因——galactosyltransferase,9chrO基因——無效基因，不產生轉移酶，O型紅細胞含有H物質基因酶合成抗原（3）ABH可溶性抗原形成分泌型血型物質：ABH抗原存在于紅細胞、內皮細胞、血小板、淋巴細胞、上皮細胞等，也可出現(xiàn)在除腦脊液外的分泌液中，唾液中最豐富。Se，se基因——與體液分泌有關，Se編碼α–L-fucocyltransferase，形成分泌液中的H抗原，H也可轉化為A或B抗原，Se不影響紅細胞上ABH形成，Se為分泌型；se為非分泌型；19chr。分泌型血型物質的意義：在RBC抗原弱表達個體中確定ABO血型。檢測唾液、羊水中的血型物質，輔助鑒定血型和預測胎兒血型。能中和天然抗體（IgM），有助鑒別Ab性質。3.ABO亞型：亞型：同一血型抗原的結構、性能（質）或抗原位點數(shù)（量）存在一定差異。A亞型：A1，A2，A3，Ax，Ay，AmB亞型：B1，B2，B3，Bx，Bm1.遺傳與發(fā)育規(guī)律胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血/新生兒紅細胞同成人。基因位于1chr，分別命名為RHD，RHCE，RHD編碼D抗原，RHCE編碼不同組合的CE抗原，ce，cE，Ce，CE。2.命名和種類三種命名方式

Fisher-Race、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法3.Rh血型種類D、E、C、e、c抗原的強弱次序

D>E>C>c>e5.Rh抗體Rh抗體產生天然抗體罕見主要通過輸血和妊娠免疫產生IgG

初次免疫后3~6月出現(xiàn)，再次免疫后3周達高峰Rh抗體種類抗D，抗E，抗C，抗c，抗e1.鹽水介質法（saltmediumtest）原理：根據(jù)IgM類抗體與紅細胞膜上特異性抗原能發(fā)生凝集反應。正定型：已知血型抗體試劑+紅細胞

反定型：已知標準紅細胞+血清鑒定紅細胞上血型抗原鑒定血清中抗體反應條件：生理鹽水介質，室溫，肉眼可見凝集反應平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可信賴。應用：ABO血型定型、RhD抗原定型（IgG+IgM，IgM單克隆抗體），交叉合血結果判斷注意事項（一）：標準血清：健康壯年人混合血清，培養(yǎng)細胞株的單克隆抗體要求：高效價：抗A、抗B≥1：128

高親和性：15s內出現(xiàn)凝集，3min后凝集塊>

1mm2

單克隆抗體具有檢出A2，A2B的能力冷凝集素效價<

1：4

無菌，病毒滅活注意事項（二）：紅細胞試劑：三個健康者同型新鮮紅細胞混合，用生理鹽水洗滌三次。紅細胞懸液不能過濃或過淡，5%生理鹽水紅細胞懸液注意事項（三）：所有器材清潔干燥一般先加血清，后加紅細胞反應溫度：IgM抗體反應最適溫度為40C，為防止冷凝集素干擾，采用室溫，370C反應減弱離心時間和速度：3000g,30s反定型不宜用玻片法結果核對，避免筆誤正、反定型結果一致才能報告，否則查找原因正反定型不一致的可能原因（一）：操作技術上的錯誤：主要原因

離心過度或不足細胞與血清反應比例不適當陽性反應產生溶血現(xiàn)象而未能識別漏加試劑、結果判讀錯誤等

正反定型不一致的可能原因（二）：出現(xiàn)假陰性的常見原因：

某些白血病患者和難治性貧血等導致ABO抗原減弱；免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、4月~6月內嬰兒、抗體水平下降的老人；亞型紅細胞抗原性弱，難以檢出；低丙種球蛋白血癥患者，血清定型時不凝集或弱凝集。

正反定型不一致的可能原因（三）出現(xiàn)假陽性的常見原因：

紅細胞出現(xiàn)多凝集現(xiàn)象；嚴重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細胞獲得類B現(xiàn)象；異常的血漿蛋白升高、白蛋白/球蛋白異常，高濃度纖維蛋白原造成假凝集現(xiàn)象；待檢血清中有不規(guī)則抗體存在；右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細胞類似凝集。方法學評價簡單，靈敏度低，只適合IgM抗體試管法：需時短，離心增強凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的反應，正、反定型皆適合玻片法：適合大規(guī)模血型普查，反應時間長，有時漏掉弱反應，反定型不適合。2.酶介質法（enzymicmediumtest）：原理和方法：主要用于Rh血型鑒定（IgG抗體）蛋白水解酶增強IgG抗體的凝集作用注意事項：Rh血型不需作反定型每次實驗均需作陽性、陰性對照方法學評價簡單經濟穩(wěn)定性、準確性較差，不能檢出MN、Duffy血型系統(tǒng)3.抗人球蛋白實驗（Coomb’stest）原理和方法抗IgG待測紅細胞+抗RhD（IgG）+抗人球蛋白紅細胞凝集應用延伸：檢測紅細胞同種抗體的經典方法，新生兒溶血、病、溶血性輸血反應、自身免疫性溶血性貧血直接Coomb’s（directantiglobulintest,DAT）間接Coomb’s（indirectantiglobulintest,IDAT）DAT：檢查紅細胞是否致敏

IDAT：檢測血清中不完全抗體

4.聚凝胺介質法（polybrenetest）原理和方法

低離子強度鹽溶液（lowionicstrengthsaltsolution,LISS)：降低介質離子強度，增加抗原抗體結合

聚凝胺：中和紅細胞表面負電荷，使紅細胞發(fā)生非特異性凝集。

重懸液（resuspension)方法學評價適于各類抗體（IgM，IgG）快速、靈敏、可靠對檢測Kell血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素抗凝。5.微柱凝膠法(gelcardswithmicrotubes)1986年法國人Dr.YvesLappierre發(fā)明1994年，獲美國FDA認證原理和方法葡聚糖做成微型凝膠柱，上端為反應室，下端凝膠柱為抗原抗體凝集反應的介質?？乖c抗體結合后離心，經過凝膠分子篩作用，游離紅細胞在凝膠底部，而與抗體結合凝集的紅細胞位于凝膠上部或懸浮于凝膠中。

反應室凝膠柱結果判讀：陽性結果：紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和（或）出現(xiàn)溶血。注意事項：專用水平離心機假陽性：鐮型紅細胞、巨幼紅細胞白細胞過多纖維蛋白原未完全去除細菌污染，血漿蛋白異常假陰性：抗原抗體比例不合適不適用于直接Coombs陽性的紅細胞標本、酶處理的紅細胞標本方法學評價靈敏度和準確性高，實驗結果重復性好，可長時間保存自動化程度高，實驗過程標準化，ISO9000/CE認證成本高

應用延伸：用于ABO正反定型，交叉配血、其他血型抗原檢測（CcEe）、不規(guī)則抗體檢測、Coombs實驗凝