第三章雜質檢查

第三章雜質檢查第1頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一一、藥物的雜質與純度1．藥物純度的概念：藥物的純度是指藥物的純潔程度。藥物中的雜質是影響藥物純度的主要因素，雜質檢查也稱純度檢查。藥物中所含雜質超過質量標準規(guī)定的純度要求，有可能使藥物的外觀性狀、物理常數(shù)發(fā)生變化，甚至會影響藥物的穩(wěn)定性，使活性降低、毒副作用增加。第一節(jié)藥物雜質與限量第2頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一例：青霉素在生產過程中可能引入過敏性雜質，可導致過敏性休克，甚至造成心衰死亡。例：阿司匹林中引入水分能促進其水解失效例：乙醚在麻醉中的過氧化物及醛對呼吸道

有刺激性，引起肺水腫及肺炎等，嚴重時甚至引起死亡。第3頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2、藥物純度的要求是不斷提高的：

例如：度冷丁1948年收入BP，1970年經GC分離鑒定出兩種無效異構體（Ⅱ）和（Ⅲ），有時高達20%～30%。

再如：ASA(阿司匹林)中除了SA(水楊酸)外，還存在乙酰水酸酐、乙酰水楊酰、乙酰水楊酸等SA的衍生物，具有致敏作用。

第4頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一3、藥物純度的評價：應把藥物的外觀性狀、理化常數(shù)、雜質檢查、含量測定等方面作為一個有聯(lián)系的整體來綜合評價。藥品中的雜質能否得到合理、有效地控制，直接關系到藥品質量可控性和安全性，在藥物研究與開發(fā)過程中，對雜質的研究備受重視。第5頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一4、化學試劑的純度與臨床用藥的純度不能相互混淆，藥用規(guī)格與試劑規(guī)格是不一樣的。化學試劑不考慮雜質的生理作用，其雜質限量只是從可能引起的化學變化對使用的影響來限定的，對試劑的使用范圍和使用目的加以規(guī)定，不考慮雜質對生物體的生理作用及毒副作用；㎡第6頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一藥物純度主要從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等方面考慮。例：BaSO4

化學試劑規(guī)格對可溶性鋇鹽不做檢查，藥用規(guī)格的硫酸鋇要做酸溶性鋇鹽、重金屬、砷鹽等檢查，如果存在可溶性鋇鹽會導致醫(yī)療事故。

化學試劑是不能代替藥品來使用的第7頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一二、藥物雜質的來源

了解藥物中的雜質的來源，可有針對性的制定出檢查的項目和方法。藥物中雜質主要來源有兩個：一、由生產中引入；二、在儲藏過程中受外界條件的影響，引起藥物理化性質發(fā)生變化而產生。

第8頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（一）

生產過程中引入的雜質主要指藥物（1）所用原料不純而引入其他物質；（2）在合成過程中，未反應的原料、中間體和副產物；（3）在制作過程中加入一些試劑、溶劑等而在精制時未完全除凈。例如：藥用NaCl的Br-、I-、SO42-、K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+ASA中的SA；地西泮中的去甲安定；嗎啡中的罌粟堿第9頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一如：制劑中生成的雜質：ASA片、栓劑中SA的檢查；鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇的檢查。

生產過程中殘留有機溶劑、酸性或堿性雜質的檢查。

藥物中無效、低效異構體或晶型的檢查例如：無味氯霉素存在A、B晶型，其中B為有效，A為低效。苯甲咪唑有A，B，C三種晶型；20%；40%～60%；90%

第10頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（二）貯藏過程引入的雜質主要指外界條件的變化或微生物的作用可能發(fā)生的水解、氧化、異構化、晶型轉化、聚合等變化，而產生的有關雜質。如：ASA水解生成SA和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸麻醉乙醚氧化為醛和有毒的過氧化物。第11頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一易發(fā)生水解反應的結構：苷類、酯、內酯、酰胺、鹵代烴等易發(fā)生氧化反應的結構：醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵第12頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一三、藥物雜質的分類

按雜質的來源分為一般雜質和特殊雜質；1、一般雜質是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產和貯藏過程中容易引入的雜質，它們含量高低與生產工藝水平密切相關，所以也稱信號雜質；ChP附錄中規(guī)定了一般雜質的檢查項目的檢查方法第13頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一2、特殊雜質是指在個別藥物的生產和貯藏過程引入的雜質。又稱為有關物質，這類雜質隨藥物的不同而不同。例：乙酰水楊酸引入水楊酸甲硝唑引入2-甲基-5-硝基咪唑第14頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

按照來源的不同還可將雜質分為：1、工藝雜質：合成未反應完全的反應物試劑中間體副產物等2、降解產物：從反應物及試劑中混入的其他外來雜質等。

第15頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一按照其毒性分類：雜質分為毒性雜質（重金屬、砷鹽）信號雜質一般無毒，但其含量的多少可反映出藥物的純度情況。如果藥物中信號雜質含量過多，提示該藥的生產工藝或生產控制有問題。如氯化物、硫酸鹽等）

第16頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一按化學類別和特性分為：無機雜質、有機雜質、殘留溶劑。無機雜質可能來源于生產過程，一般是已知和確定的。由于許多無機雜質直接影響

藥品的穩(wěn)定性，并可反映生產工藝本身的情況，了解藥品中無機雜質的情況對評價藥品生產工藝的狀況有重要意義。有機雜質主要包括合成中未反應的原料、中間體、副產品、降解產物等。有機雜質分特定雜質非特定雜質第17頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一特定雜質指在質量標準中分別規(guī)定了明確的限度，并單獨進行控制的雜質；特定雜質包括結構已知和結構未知的雜質非特定雜質指在質量標準中未單獨列出，而僅

采用一個通用的限度進行控制的一系列雜質，其在藥品中出現(xiàn)的種類與概率并不固定。如重金屬都以鉛限度來控制第18頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一四、雜質的限量

1．雜質限量的概念藥物中所含雜質的最大允許量，叫做雜質限量。通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。

藥物中雜質限量的控制方法有兩種（1）一種是限量檢查（2）一種是對雜質定量測定第19頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

限量檢查法：通常不要求測定其準確含量，只需檢查是否超過限量。

具體操作方法：對照法（多數(shù)采用）比較法靈敏法對照法：取一定量供試品和一定量被檢雜質標準溶液，

--------同條件下處理，比較反應結果

采用該法須注意平行原則，結果才有可比性（條件一致）第20頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一注意：該法檢查結果，只能判定藥物所含雜質是否符合限量規(guī)定，一般不能測定雜質的準確含量。第21頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一靈敏度法：供試品溶液中進入一定量試劑，在一定反應條件下，不得有正反應出現(xiàn)，從而判斷供試品中所含雜質是否符合雜質限量。例：乳酸中草酸、酒石酸等雜質檢查，在檢查條件下不得出現(xiàn)渾濁。P100第22頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一比較法：取供試品一定量，測定待檢雜質的參數(shù)（如吸光度等）與規(guī)定限量比較，不得更大。例：維生素B2中感光黃素（此雜質溶于三氯甲烷），維生素B2在三氯甲烷中不溶，在400nm下測定A,不得超過0.016.第23頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一藥物的雜質根據(jù)性質及危害性不同，限量要求也不一樣。對危害人體健康、影響藥物穩(wěn)定性的雜質，必須嚴格控制其限量如砷、鉛等；有些雜質本身一般無害，但其含量的多少可以反映出藥物的純度水平，如一些信號雜質則只要其不超過規(guī)定含量即可。第24頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2．雜質限量的計算雜質限量的計算公式：雜質限量=雜質的最大允許量÷供試品的量×100%

=標準液濃度×體積÷供試品的量×100%

L（%）=C×V/S×100%

第25頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一例1．對乙?；又械穆然锏臋z查：已知：S=2.0g×25/100；C=10μg/ml；V=5.0ml求：L=？解：L=C×V/S×100%=10×5.0/2.0×106×25/100×100%=0.01%

第26頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

例2．葡萄糖中重金屬的檢查：已知：S=4.0g；C=10μg/ml；L=5×10-6

求：V=？

解：V=L×S/C=5×10-6×4.0/10×10-6=2.0(ml)

第27頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一例3．葡萄糖中砷鹽的檢查：已知：V=2.0ml；C=1μg/ml；L=0.0004%

求：S=？

解：S=C×V/L=1×10-6×2.0/4×10-6=0.5(g)第28頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

例4．磷酸可待因中嗎啡的檢查：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g

求：L=？

解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%注意點①單位一致②稀釋倍數(shù)③表示方法（%，PPM）第29頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)雜質的檢查方法檢查藥物中存在的微量雜質，首要的問題就是選擇一個專屬性強的方法，使藥物對其所含微量雜質的檢測不產生干擾

藥物中雜質的檢查主要是依據(jù)藥物與雜質在物理性質或化學性質上的差異來進行。物理性質差異：指藥物與雜質在外觀性狀、分配或吸附以及對光的吸收等性質差別；化學性質差異：指藥物與雜質對某一化學反應的差別，一般是雜質與試劑反應，而藥物不反應。

第30頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一一、雜質的研究規(guī)范

制藥企業(yè)應該按照經國家藥品監(jiān)督管理部門依法審查批準的規(guī)定工藝和規(guī)定原輔料進行藥品的生產，如果變更生產工藝或原輔料，并因此而帶進新的雜質，則需對原質量標準進行修訂，并依法向有關藥品監(jiān)督管理部門申報批準。在新藥的研發(fā)中，應該對新藥中的雜質進行化學和安全性研究。雜質控制要合理地確定雜質檢查項目與限度，合理地選擇雜質檢查方法。第31頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（一）有機雜質在藥品質量標準中的項目名稱1、以雜質的化學名稱作為項目名稱

當被檢查的雜質是已知化合物時(特定雜質)，就以該化合物的化學名稱作為質量標準的項目名稱；

2、以某類雜質的總稱作為項目名稱

當雜質不能明確為單一物質而又為某一類物質時，則以這類物質總稱作為項目名稱。3、以檢測方法作為項目名稱

當被檢查雜質的結構未知，亦不屬于具體的類別時，可用“吸光度”等，與檢查方法相應的名稱作為項目名稱。第32頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（二）雜質檢查項目的確定

雜質檢查項目的確定要有針對性。

藥品標準中雜質檢查項目應包括藥物在質量研究和穩(wěn)定性考察中檢出的，并在批量生產中出現(xiàn)的雜質和降解產物。第33頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（三）雜質限度的確定P103雜質限量的確定要合理，在確保用藥安全有效的前提下，應考慮到：①生產的可行性及比與比之間的正常波動；②藥品本身的穩(wěn)定性③可根據(jù)原料每日劑量來制訂質控限度

第34頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一雜質限度制定時考慮的因素：①雜質及含一定量雜質的藥品的毒理學研究結果②給藥途徑③每日劑量④治療周期⑤給藥人群⑥雜質藥理學可能的研究結果⑦原料藥的來源⑧在保證安全有效的前提下，藥品生產企業(yè)對生產高質量藥品所需成本和消費者對藥品價格的承受力，等第35頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

對于創(chuàng)新藥物，雜質限度確定的依據(jù)主要是已進行的臨床前安全性研究中獲得的結果，通常是要求用于臨床試驗的樣品雜質不得超過用于臨床前安全性研究的樣品；

對于仿制藥物，可根據(jù)已有的標準制訂相應的雜質限度；

對于其他新藥，可參照創(chuàng)新藥物或仿制藥物的要求進行。第36頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（四）雜質檢查方法的選擇與驗證檢測方法包括：化學法光譜法色譜法等因藥物結構及雜質的不同采用不同的檢測方法。有機雜質的檢測方法多采用色譜法，特別是HPLC法、TLC法。對檢測方法的要求：專屬、靈敏。二、雜質的常用檢查方法

P104

第37頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（一）化學方法

當藥物中雜質與藥物的化學性質相差較大時，可選擇合適的試劑，使之與雜質發(fā)生化學反應，產生顏色、氣體、沉淀，從而檢查雜質的限量。采用化學方法檢查法可以對雜質進行：1、半定量檢查2、可采用滴定法或重量法進行定量測定第38頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一具體方法：P1041、顯色反應檢查法2、沉淀反應檢查法3、生成氣體檢查法4、滴定法第39頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（二）色譜法

藥物中的有機雜質，可能是已知的或未知的、揮發(fā)性或不揮發(fā)性的，其結構和性質往往和藥物相近。如果藥物和雜質與某些試劑的反應相同或相似，或者它們的光譜特征相似，就難以用化學法或光譜法對雜質進行檢查。色譜法可以利用藥物與雜質的色譜性質的差異，能有效地將雜質與藥物進行分離和檢測，因而色譜法廣泛應用于藥物雜質的檢查。一般是首選方法。第40頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一1、TLC法優(yōu)點：設備簡單、操作簡便、分離速度快靈敏度和分辨率較高應用：藥物中雜質的檢查方法：（1）雜質對照品法（2）供試品溶液自身稀釋對照法（3）雜質對照品與供試品溶液自身稀釋對照并用法（4）對照藥物法注意：質量標準中應規(guī)定雜質的個數(shù)和限量第41頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（1）雜質對照品法適用范圍：已知雜質并能制備雜質對照品方法：①根據(jù)雜質限量要求，取供試品溶液和一定濃度的雜質對照品溶液，分別點樣于同一薄層板，展開、斑點定位。②供試品溶液除主斑點（有效成分）外的其他斑點（雜質斑點）與相應的雜質對照品溶液的相應主斑點進行比較。判斷：根據(jù)《中國藥典》要求，判斷雜質限量例：P106第42頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（2）供試品溶液自身稀釋對照法適用范圍：①雜質的結構不明確；

②雖然雜質的結構明確，但沒有雜質對照品。要求：該方法僅限于雜質斑點顏色與主成分

斑點顏色相同或相近的情況下使用。方法：①配制一定濃度的供試品溶液，取一定量，將其按限量要求稀釋至一定濃度作為對照溶液；②將供試品溶液和對照溶液分別點于同一薄層板上，展開、斑點定位。判斷：供試品溶液所顯雜質斑點與自身稀釋對照溶液的相應主斑點比較，不得更深。（該斑點是何物？）例：P106

第43頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（3）雜質對照品與供試品溶液自身稀釋對照并用法

當藥物中存在多個雜質時，如果有已知雜質的對照品，則采用雜質對照品法檢查；共存的未知雜質或沒有對照品的雜質，則同時采用供試品溶液自身稀釋對照法檢查P107

第44頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（4）對照藥物法

無合適的雜質對照品，或者是供試品顯示的雜質斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可采用與供試品相同的藥物作為對照。對照藥物中所含待檢雜質需符合限量要求，且穩(wěn)定性好。（間接法）

第45頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一2、HPLC法優(yōu)點：分離效能高、專屬性強、檢測靈敏性好，可以準確測定各組分的峰面積（定量）方法：（1）外標法（2）加校正因子的主成分自身對照測定法（3）不加校正因子的主成分自身對照法（4）面積歸一化法例：P108第46頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一3、GC法適用：測定藥物中揮發(fā)性特殊雜質，特別是藥物中殘留溶劑的檢查第47頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（三）光譜方法依據(jù)：藥物與藥物中雜質對光選擇吸收性質差異進行。1、UV-VIS法2、IR法3、AAS法第48頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（四）其他方法1、熱分析法P113（1）熱重分析（2）差熱分析（3）差示掃描熱分析2、酸堿度檢查法P1163、物理性狀檢查法P117第49頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一第三節(jié)一般雜質的檢查方法

在原料藥及其制劑的生產過程中，常用到酸、堿、反應試劑、催化劑等，引入無機雜質。這些雜質的產生重要與生產工藝過程有關，可反映生產工藝情況，并直接影響藥品的穩(wěn)定性。

檢查無機雜質對評價藥品生產工藝的狀況有重要意義。第50頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一一般雜質檢查規(guī)則規(guī)定：（1）遵循平行操作原則1)儀器的配對性如納氏比色管應配對，刻度線高低相差不超過2mm；砷鹽檢查時導氣管長度及孔的大小要一致。

2）對照品與供試品要同步操作第51頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（2）依照《中國藥典》，正確取樣、供試品的稱量范圍（3）依照《中國藥典》，正確比色、比濁（4）檢查結果不符合規(guī)定或在限度邊緣時應對供試管和對照管各復查兩份第52頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一一、氯化物的檢查

1．原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀的白色渾濁液，與一定量標準氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀混濁液比較，以判斷供試品中氯化物是否超過限量。

Cl-+Ag+→AgCl↓（白）第53頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2．條件：

[Cl-]0.05mg～0.08mg/50ml,即相當于標準氯化鈉溶液5ml～8ml。

酸度稀硝酸10ml/50ml。

溫度30～40℃

第54頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

3．干擾的排除

（1）供試品液混濁：可用含硝酸的蒸餾水洗凈氯紙中氯化物后過濾來消除混濁對氯化物檢查的干擾。

第55頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（2）供試品有色：可采用內消色法，按中國藥典附錄規(guī)定的方法處理。供試品+AgNO3放置10min澄清溶液+標準NaCl+水對照溶液供試品+AgNO3+水供試品溶液暗處放置5min后比較第56頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一二、硫酸鹽檢查法

1．原理是利用SO42-在鹽酸酸性溶液中與氯化鋇試液作用，生成硫酸鋇的白色渾濁液，與一定量標準硫酸鉀溶液在相同條件下生成的硫酸鋇渾濁液比較，以判斷供試品中硫酸鹽是否超過限量。

第57頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2．條件：[SO42-]0.1mg～0.5mg/50ml,即相當于標準硫酸鉀溶液1～5ml。

酸度稀鹽酸2ml/50ml。3．干擾的排除供試品有色：可采用內消色法。第58頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

三、鐵鹽檢查法（一）硫氰酸鹽法1．原理Fe3++6SCN-{Fe(SCN)6-]3-

紅色2．條件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相當于標準鐵溶液1～5ml。酸度稀鹽酸4ml/50ml。

HCl第59頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

3．干擾的排除（1）當有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸銨氧化Fe2+成Fe3+。（2）當供試液管與對照溶液管色調不一致，或所呈硫氰酸鐵的顏色較淺不便比較時，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。因硫氰酸鐵離子在正丁醇等溶劑中溶解度大，故能增加顏色深度，且能排除某些干擾物質的影響。第60頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

(二）巰基醋酸法1.原理巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性試液中與Fe2

+

作用生成紅色配位離子。2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-第61頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2.說明

在加巰基醋酸溶液前，先加枸櫞酸溶液，使其與鐵離形成配位離子，以免在氨堿性溶液中產生氫氧化鐵沉淀。（此法靈敏度比較高，但試劑較貴）第62頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一四、重金屬檢查法

重金屬影響藥物穩(wěn)定性和安全性

重金屬是指在實驗室條件下與硫代乙酰胺或S2-作用顯色的金屬雜質.

如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，由于藥品生產過程中遇到鉛的機會比較多，鉛在體內容易積蓄中毒，故檢查時以鉛作為代表,以鉛的限量表示重金屬限度.（實驗條件主要指溶液的PH，因為溶液的PH直接影響重金屬與顯色劑反應是否完全，從而影響測定的準確度）

第63頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一中國藥典（2010年版）重金屬的檢查法規(guī)定了三種方法

第一法為硫代乙酰胺法；第二法是將供試品在500~600℃熾灼破壞后，再按第一法檢查；第三法是檢查能溶入堿溶液，而不溶于酸溶液的藥物，在堿性條件下用硫化鈉作顯色劑；第64頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

第一法硫代乙酰胺法1、原理

CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S合格＜H2S+Pb2+PbS↓+2H+

2．條件：[Pb2+]10μg～20μg/27ml,相當于標準鉛溶液1～2ml。

酸度pH3.0～3.5.合格＜

第65頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一3．干擾的排除

(1)供試品有色：可采用外消色法消除干擾。(2)供試品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氫析出硫，產生混濁影響比色，可加Vc或鹽酸羥胺使Fe3+氧化成Fe2+離子再檢查。

其他兩種方法見P122

第66頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一五、砷鹽檢查法

《中國藥典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC）檢查藥物中的微量的砷鹽。（一）古蔡法Gutzeit)(BP也采用此法）

1.原理As3++3Zn+3H+3Zn2++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+3Zn2++3H2O+AsH3

AsO43-+4Zn+11H+4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黃色)

As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色)第67頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2.裝置與試劑作用

(1)驗砷儀砷化氫發(fā)生瓶;中空磨口塞;導氣管(2)試劑的作用合格＜①KI-SnCl2的作用：交替還原作用；首先將AsO43-還原成AsO33-，生成的碘再被還原成碘離子。即:將五價砷還原成三價砷(五價砷與氫反應較慢)第68頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

AsO43-+2I-+2H+

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+

—2I-+Sn4+

4I-+Zn2+

—[ZnI4]2-

由于碘離子的存在,與鋅離子形成配合物,有利于

AsH3

氣體生成.

第69頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

②Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起極化作用,從而使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生.

極化:當電流通過電解池或電池時,使電極電位改變并產生一反電動勢的現(xiàn)象.

第70頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一1、Pb(AC)2棉太緊影響砷化氫氣體通過；太松，硫化氫也通過起不到作用。2、硫化氫來源：鋅及供試品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中產生硫化氫氣體③Pb(AC)2棉的作用：是消除供試品可能含有的少量的硫化物。S2-

+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(AC)2PbS+2HAC第71頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

3.干擾的排除（1）供試品為S2-,SO32-,S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+能消耗KI，SnCl2

應測定條件，先可加足量KI。第72頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（3）含銻藥物

銻鹽被還原為SbH3與HgBr2試紙作用，產生灰色銻斑，干擾砷斑的檢查，可改用Betterdorff法。白田道夫法原理：As3＋＋SnCl2＋HCl→As↓＋SnCl4＋H＋

棕褐色的膠態(tài)砷＋第73頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采用此法)

1.原理：是利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的銀還原為紅色膠態(tài)銀，以Ag-DDC溶液為空白，于510nm的波長處，測定吸收度，供試品溶液的吸收度不得大于標準砷溶液的吸收度。2.試劑的作用：同古蔡法。第74頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一六、溶液顏色檢查法

溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質量的方法。中國藥典（2010年版）收載有三種方法：K2Cr2O7黃、綠1.標準比色液進行比較的方法標準比色液CoCl2橙黃,橙紅2.分光光度法CuSO4藍色3.色差計法通過測定供試品與標準比色液或水之間的色差值第75頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一用分光光度法注意事項1、藥品溶液有色時，雜質檢查測定波長的選擇2、溶劑的選擇第76頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一七、易炭化物檢查法

是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質。這類雜質多數(shù)結構未知，用硫酸呈色的方法簡單控制其含量.常采用與標準比色液比色的方法進行檢查。標準比色液為CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4第77頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一注意事項：1、供試品為固體，應先研成細粉。如需加熱才能溶解時，可將供試品與硫酸混合均勻，加熱溶解后，放冷至室溫，再轉移置比色管中。2、操作時，應嚴格控制硫酸濃度、反應溫度及時間。因易炭化合物與硫酸呈現(xiàn)的顏色與上述因素有關。第78頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

是檢查藥物中的微量不溶性雜質。常采用與濁度標準液比濁的方法進行檢查。濁度標準液制備原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混濁

不同級號濁度標準液級號0.51234濁度標準原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度檢查法第79頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一1、標準濁度溶液的影響因素⑴溫度：在低溫（1℃）反應不能進行，不產生沉淀；高溫形成的濁度稍低。因此，藥典規(guī)定反應溫度為25±1℃⑵放置時間：硫酸肼溶液配制后，應放置4---6小時，然后再與烏洛托品反應。溶液不放置，制得的標準濁度溶液渾濁不穩(wěn)定。⑶濕度：各地的相對濕度不同，而試劑的含水量可直接影響溶液的濃度。因此，試劑應先經硅膠干燥劑干燥24h后使用為佳。⑷儲存期：應置涼處避光儲存。按規(guī)定儲存期使用，濁度無明顯變化。2、對于帶乳濁色供試液的澄清度檢查，不能用本法。應該用氯化鈉與硝酸銀產生的渾濁度比較。注意事項第80頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一渾濁程度分五級:澄清、輕微渾濁、微濁、渾濁、重度渾濁澄清系指供試品溶液的澄清度相同于所用的溶劑或未超過0.5號標準濁度溶液。判斷標準第81頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一補充：1、《中國藥典》還規(guī)定“注射液中不溶性微粒檢查法”。它與“澄清度”檢查的概念是不同的應予注意。2、微粒系指注射液可移動的不溶性外來物質。這些微粒進入血管能引起血管肉芽腫，靜脈炎，血栓及血小板減少，對心肌、肝、腎等亦有損害。第82頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一九、熾灼殘渣檢查法(residueonignition)

BP稱硫酸灰分（sulphatedash)是檢查有機藥物中混入的各種無機雜質。常采用重量方法進行檢查。

殘渣及坩堝重—坩堝重

殘渣%=×100%

供試品重第83頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一注意事項1、動植物生藥經灼燒后的灰燼稱為灰分，它是生藥藥品的正常成分。2、不含金屬元素組成的有機藥品經灼燒后，所留的殘渣稱熾灼殘渣加硫酸并灼燒至700--800℃后，所得的硫酸鹽又稱硫酸沿灰分。3、氫氟酸對瓷坩堝有腐蝕性，故含氟的藥品應置于白金坩堝中灼燒。4、加熱時，必須小心，先用小火加熱，以免供試品濺出；切不可直接大火加熱坩堝底部，否則易引起暴沸或燃燒。第84頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一5、自高溫爐取出坩堝時，應先將坩堝預熱（打開爐門），再與坩堝接觸，避免熱坩堝聚遇冷而破裂。6、有機藥品的灼燒可以一定量的已恒重的純沙或混以乙醇、甘油，以分散藥品增大與氧接觸的面，使灰化完全。7、坩堝置高溫爐內灼燒前，務必蒸發(fā)除盡硫酸，以免硫酸蒸汽腐蝕爐膛，造成漏電事故。8、可采用藍墨水與三氯化鐵溶液混合液涂寫烘烤，供瓷坩堝編號。注意事項第85頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一十、干燥失重檢查法

主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的物質。？常采用重量方法進行檢查。常用的方法有三種：（一）常壓恒溫干燥法

（二）干燥劑干燥法（注意常用干燥劑P127）

（三）

減壓干燥法第86頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（一）常壓恒溫干燥法

適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。干燥溫度一般為105℃注意：⑴供試品應鋪平，厚度∠5㎜，疏松物10㎜；

⑵結晶藥物應該研細；⑶瓶蓋半開或者放置旁邊；⑷取時，先蓋瓶蓋。

第87頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（二）干燥劑干燥法（注意常用干燥劑P127）

1）硅膠：吸水率居中。變色硅膠加有氧化鈷，無水氧化鈷藍色，吸水后含二分子結晶水呈淡紅色。

105℃干燥后可恢復使用。優(yōu)點：廉價、方便、無腐蝕性、可重復2）濃硫酸：吸水率低，有腐蝕性；3）五氧化二磷：吸水性好，不能重復使用第88頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一（三）

減壓干燥法適用于熔點低，受熱不穩(wěn)定或水分難以除去的藥物。除另行規(guī)定外，壓力在2.67KPa以下。第89頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

熱重分析法

熱分析法（thermoanalysis)

差示熱分析差示掃描量熱法1.熱重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)

在程序升溫下，測量物質的質量與溫度的關系，研究物質在加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質的變化，常用于藥物穩(wěn)定性的研究；貴重和易氧化藥物的干燥失重測定。第90頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2.差示熱分析（differentialthermlanalysis,DTA)

是在程序升溫下，測量被測物質和參比物之間的溫差與溫度關系的一種技術。參比物是一種惰性物質，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學變化。因此溫差(△T)只與被測物質的量質變化有關?！鱐=0被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應;△T=-為吸熱峰;△T=+為放熱峰.第91頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

測藥的溶點

DTA在藥物分析中應用尖峰為物理變化藥物定性分析寬峰為化學變化估測藥物的純度第92頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

3.差示掃描量熱法(differentialscanningcalorimetry,DSC)是在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度相同，系統(tǒng)所需供給樣品隨溫差變化的能量的一種技術。DSC與DTA的不同之處是記錄方式不同，是記錄系統(tǒng)供給的能量，吸熱供給能量；放熱減少供給的能量。在藥物分析中應用與DTA相同。DSC-TG常聯(lián)合用。

第93頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一十一、水分測定《中國藥典》收載方法

卡爾.費休法、甲苯法測定物：藥物中的結晶水、吸附水、游離水原理：碘將二氧化硫氧化成三氧化硫時，需要一定量的水參與反應，根據(jù)消耗碘的量測定水分（P127）費休試液組成：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶提問：1、甲醇、吡啶的作用？

2、為什么上述兩試劑需是無水的？第94頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一例：注射用青霉素鈉水分測定精密稱取本品0.7540g，置干燥具塞玻璃瓶中，加無水甲醇5ml，充分振搖后，用費休試液滴至溶液由淺黃色變成紅棕色，消耗用費休試液2.15ml；另取無水甲醇5ml，同法測定，消耗用費休試液0.15ml，求青霉素鈉的含水量（已知每1ml費休試液相當于3.52mg水）。解：供試品中含水量%=（A-B)F/W×100%%=（2.15-0.15）×3.15/0.7540×1000×100%=0.93%第95頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一注意：（1）費休法不適用于測定氧化劑、還原劑、以及能與試液生成水的化合物的測定，如：鉻酸鹽、過氧化物、硫代硫酸鹽、硫化物、堿性氧化物以及含氧弱酸鹽等的測定；一些羰基化合物如活潑的醛、酮可于試劑中的甲醇作用，生成縮醛和水，干擾測定。（2）費休試液的F值應在4.0mg/ml上下為宜，F(xiàn)值降至3.0mg/ml以下時，測定終點不敏銳，不宜再用。（3）整個操作應迅速，且不宜再陰雨或空氣濕度太大時進行。第96頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一十二、有機溶劑殘留量測定法[ChP(2010)]

主要檢查藥物在生產過程中引入的有害的有機溶劑(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。常采用氣相色譜法方法進行檢查。常用的方法有二種：①直接進樣法和②頂空進樣法（試用于揮發(fā)性大的樣品測定）。色譜系統(tǒng)性試驗的要求：(1)N＞1000;(2)用內標法測定時，要求R＞1.5;(3)外標法測定時，待測物的峰面積的RSD＜10%。第97頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一殘留有機溶劑測定的方法和限量

2010版藥典對殘留溶劑的控制種類和限度進行了較大的修訂,溶劑殘留量的種類與限度與人用藥品注冊技術范圍的國際協(xié)調會一致.按有機溶劑毒性的程度分為三類:一類有機溶媒毒性較大,具有致癌作用并對環(huán)境有害,應盡量避免使用;二類有機溶媒對人有一定毒性,盡量少用;三類有機溶媒對人的健康危險性較小,推薦使用.P129第98頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一補充：元素狀態(tài)的硒對人體無毒性，但硒化合物（二氧化硒）對人體劇毒。因此，對于有可能引入硒的一些藥物須對殘留硒進行限量檢查。第99頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)特殊雜質的檢查方法

一、特殊雜質的研究規(guī)范藥物中特殊雜質的研究是藥物質量控制的重要部分，該研究可以為藥物的工藝研究、質量研究·、穩(wěn)定性研究、藥理毒理及臨床研究提供重要信息，對特殊雜質研究直接體現(xiàn)創(chuàng)新藥物的研究水平。通過對有關物質的定性研究，可以獲得有關物質的結構信息，分析其形成過程，合成時可設法避免該雜質的形成，或經純化使之降至可接受的水平，或儲藏過程中控制好條件。第100頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一二、利用藥物和雜質在物理性質上的差（一）臭味及揮發(fā)性質的差異利用藥物中存在的雜質具有特殊臭味，可以從臭味判斷

例：黃凡士林中異性有機物檢查：本品2.0g,直火加熱無辛味。（二）顏色差異

例：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g，加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比，不得更深。第101頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（三）溶解行為的差異利用藥物可溶于水或有機溶劑、酸、堿中，而雜質不溶；反之雜質可溶而藥物不溶。例：吡哌酸中堿中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）檢查（四）旋光性質的差異例：硫酸阿托品中莨菪堿的檢查：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4

第102頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（五）對光吸收性質的差異1.紫外分光光度法：例:地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查

再如：苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸收度比來控制雜質;純品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%時A247nm/A258nm=0.79;

因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.第103頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2.原子吸收分光光度法：是通過測定藥物中所含待測元素原子,吸收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的含量。限量檢查時：對照品液=供試品+限量-----a

供試品液=------------------b

符合規(guī)定時b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。第104頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

3。紅外分光光度法：

主要用于藥物中無效或低效晶型檢查，如甲苯咪唑中A晶型檢查第105頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

A晶型C晶型在640cm-1有強吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有強吸收662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1供試品+10%A晶型D2D1

供試品D2D1＜10%

R=D1/D2＞R’=D’1/D’2第106頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

4.熒光分析法

3,4-二去氫利血平利血平中氧化產物檢查：利血平(無熒光)(I)(黃綠色熒光)3,4,5,6-四去氫利血平(II)(藍色熒光)第107頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一(六)吸附或分配性的差異

1.薄層色譜法(TLC)有關物質

(1)雜質對照品法例如:鹽酸左旋咪唑中檢查硅膠G2,3-二氫-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑鹽苯:甲醇:冰HAC樣品

對照品。·····第108頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一注意：①此法必須首先確認供試品中存在的待檢雜質是什么？并具備該雜質對照品。如具備上述條件，用該法檢查十分可靠。因為對照品與雜質系同一物質，且檢查條件完全一致。②如不能確認供試品中存在的待檢雜質是什么？選用可能存在的某種物質作為雜質對照品第109頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

當藥物存在的雜質未完全確認或待檢雜質不止一種時，可根據(jù)藥物合成路線，化學性質等推斷可能存在的雜質，并且能獲得該物質的對照品，即可采用此法。應用此法需注意雜質斑點與對照品應具有可比性。第110頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一(2)供試品溶液自身稀釋法檢查物為:結構不確定;或無雜質對照品的情況注意:該法限于雜質斑點的顏色與主成分斑點的顏色相同或相近的情況下使用.第111頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

(3)高低濃度對比品法(對照藥物法)

例如:鹽酸異丙嗪中有關物質的檢查硅膠G有多個雜質而且結構不清樣品10mg/ml;對照品(1)0.15mg/ml己烷:丙酮:乙胺(2)0.05mg/ml

樣品液對(1)(2)

供試液雜質斑點不多于3個;雜質斑點與對照(1)的主斑點比較,不得更深;如有一點超過,應不深于對照液(2)的主斑點.......

....

...第112頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

2.紙層析法(PC)

常用于極性大的藥物的分離、分析，如地高辛中的有關雜質的檢查。第113頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

3.高效液相色譜法(HPLC)（1）峰面積歸一化法：L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%例如：利巴韋林中有關雜質的檢查：對照品液(5μg/ml)進樣10μl,調靈敏度，使主峰達滿量程的20%～25%樣品液(0.4mg/ml)進樣10μl,雜質∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%第114頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（2）不加校正因子主成分對照法對照品液為供試品的稀釋液進樣測得A主

供試品液進樣測得∑Ai

其∑Ai＜A主即為合格.例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:對照品液(0.01mg/ml)進樣20μl,調靈敏度，使主峰達10%～30%樣品液(0.14mg/ml)進樣20μl,雜質∑Ai＜A主的1.0%.第115頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

（3）內標法加校正因子測定供試品中雜質的含量

對照品+內標進樣求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR)

供試品+內標進樣求AX.AS,則雜質濃度CX=f×AX/(AS/CS)第116頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一

4.氣相色譜法(GC)

主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質檢查，其檢查方法與HPLC法相同。第117頁，共130頁，2023年，2月20日，星期一三、利用藥物和雜質在化學性上的差異（一）酸堿性的差異

1.規(guī)定消耗滴定液體積例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH0.02mol/L)取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚藍微藍色＜0.50ml2.pH法例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸檢查：0.01g/mlpH3.0～4.5.3.指示劑法例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液不得使甲基橙顯紅