血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定課件

血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定轉(zhuǎn)移酶（transferases）催化特定的基團(tuán)從一種底物轉(zhuǎn)移到另一種底物的酶。反應(yīng)代表式為：AB+CA+BCB為被轉(zhuǎn)移的基團(tuán)，如氨基（—NH2）等轉(zhuǎn)氨酶（transaminase）又稱氨基轉(zhuǎn)移酶。大多數(shù)轉(zhuǎn)氨酶是催化α-氨基酸的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮酸的酮基上，產(chǎn)生另一種α-酮酸和α-氨基酸。酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測(cè)法原理：L-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADHL-乳酸+NAD+在340nm連續(xù)監(jiān)測(cè)NADH的消耗量，從而計(jì)算出ALT的活力。ALTLD方法學(xué)評(píng)價(jià)：血清中也含有酮酸及LDH，可以消耗NADH而使測(cè)定結(jié)果偏高。對(duì)策：采用過量的NADH（終濃度0.14~0.2mmol/L），將血清同不含α-酮戊二酸的所有試劑一起預(yù)溫，使其他副反應(yīng)充分進(jìn)行，再加入α-酮戊二酸以啟動(dòng)酶反應(yīng)，監(jiān)測(cè)光吸收的變化，可完全排除這種干擾。定時(shí)比色法國內(nèi)采用的比色測(cè)定法有三種：賴氏法（30min）金氏法（60min）改良穆氏法（30min）三種方法的原理、試劑、操作步驟和酶作用溫度都相似，單位定義和標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法有差異。國內(nèi)較多采用賴氏法，其優(yōu)點(diǎn)為：標(biāo)準(zhǔn)曲線中兩種酮酸的量客觀地反映了酶作用的實(shí)際情況；標(biāo)準(zhǔn)曲線上單位的數(shù)字準(zhǔn)確地反映出酶活力的大小；測(cè)定結(jié)果可以直接與分光光度法相比較。臨床意義ALT常作為判斷肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo)。1、急性病毒性肝炎，可觀察病情發(fā)展，作預(yù)后判斷。2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝，正?；蜉p度增高。3、肝硬化、肝癌時(shí)，ALT輕度或中度增高，提示可能并發(fā)肝細(xì)胞壞死。4、其它原因引起的肝臟損害、骨骼肌損傷、多發(fā)性肌炎等亦可引起ALT增高。注意事項(xiàng)1、嚴(yán)重脂血癥或黃疸血清可使測(cè)定管吸光度明顯增加，檢測(cè)此類標(biāo)本時(shí)，應(yīng)作血清對(duì)照管。2、加入2，4-二硝基苯肼溶液后應(yīng)充分混勻，使反應(yīng)完全，否則影響重復(fù)性。3、呈色物質(zhì)配制必須準(zhǔn)確。4、應(yīng)使用外觀潔