毛細管電泳激光誘導(dǎo)熒光分離檢測腦課件

毛細管電泳激光誘導(dǎo)熒光分離檢測腦腸肽研究意義生物活性肽是一類具有重要生物學(xué)功能的多肽，生物活性肽的研究是生命科學(xué)，神經(jīng)生理學(xué)、藥理學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的前沿課題，開展生物活性肽的分離分析研究，尋求靈敏，高效，快速和簡便的分析方法具有重要意義。生物活性多肽在內(nèi)源性物質(zhì)中占有非常重要的地位。作為激素、神經(jīng)遞質(zhì)、免疫調(diào)節(jié)器、輔酶或酶阻劑、藥物、毒素和生物抗體，它們參與控制和調(diào)節(jié)生物體中的許多重要的生理過程。當(dāng)它們在體內(nèi)分泌失常或代謝失調(diào)，就導(dǎo)致嚴重的病變。已有的測定方法RIA

CCK-4GelChromatography-RIACE-MSNTorNT8-13

CZE-UVTLCHPLC-UVELISACE-MSCE-LIF的優(yōu)點CE由于具有高的分離效率,樣品用量少,快速,簡便,環(huán)保等特點,因而是分離生物活性物質(zhì)如蛋白質(zhì),多肽和核酸的強有力的工具.由于紫外檢測受毛細管短光程的限制,CE-UV的檢測靈敏度為10-5~10-6mol/L,CE-LIF檢測是CE最靈敏的檢測方法之一.Ar+激光器(激發(fā)波長488nm,發(fā)射波長520nm)是最常用的一種商品化的VIS區(qū)的激光源.利用自身的熒光進行檢測,僅局限與那些具有芳香環(huán)氨基酸殘基(色氨酸和酪氨酸)的多肽分子.對于大部分的肽來說,事先要經(jīng)過衍生化處理使其轉(zhuǎn)化為具有熒光基團的化合物.1,NT8-13:5.0x10-9M;2,NT:1.0x10-8M,NKB:5.0x10-9

M,CCK:5.0x10-9

MPH9.5110mMborate,20%methanol0.5psi-10sPeptideLinearRegressionequationCorrelationcoefficientLinearRangeDetectionlimitNT8-13Y=1160.1Χ+2662.5

0.99531~20nM0.5nMNTY=688.24Χ+375.81

0.99632~40nM1.0nMNKBY=455.6Χ+464.14

0.99832~20nM1.0nMCCKY=754.87Χ+1645.8

0.99701~20nM0.8nMTransient

pseudo-isotachophoresisforsample

concentrationincapillaryelectrophoresis

Manywatermiscibleorganicsolventssuchasacetonitrile,acetoneandsmallalcoholscanfunctionasaterminatingionintransientisotachophoresis,whichleadstosampleconcentrationonthecapillary.Itissuggestedthatthismethodcouldbetermedtransient“pseudo-sotachophoresis”(pseudo-ITP).

Becauseoftheirlowconductivity,thesewatermiscibleorganicsolventsprovidethehighfieldstrengthnecessaryforbandsharpeningsimilartothatprovidedbytheterminatingion.Salts,whenpresentinsuchsamplesactbrieflyasleadingions,migratingrapidlyintheorganicsolventuntiltheyareslowedattheinterfaceoftheseparationbuffer.1,NT8-13:5.0x10-9M;2,NT:1.0x10-8M,NKB:5.0x10-9

M,CCK:5.0x10-9

MTheconcentrationofNaClintheaqueousphasewasheldconstantat1%(w/v)Runningbuffer:PH9.5110mMborate,20%methanol5psi-25s1,NT8-13:1.0x10-9M;2,NT:2.0x10-9M,NKB:1.0x10-9

M,CCK:1.0x10-9

MThepercentageofmethanolinthesamplewaskeptconstantat70%(v/v);theconcentrationofNaClintheaqueousphasewasheldconstantat1%(w/v)Runningbuffer:PH9.5110mmMborate,20%methanol5psi-25sPeptideLinearRegressionequationCorrelationcoefficientLinearRangeDetectionlimitNT8-13Y=238855Χ-48646

0.99450.25~10nM0.04nMNTY=67587Χ-13525

0.99720.25~10nM