第十五章分支桿菌

第十五章分支桿菌第1頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二分枝桿菌屬—含分支菌酸結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌副結(jié)核分枝桿菌棒狀桿菌屬—含分支菌酸奴卡菌屬—含分支菌酸紅球菌屬—含分支菌酸放線菌屬—不含分支菌酸牛放線菌主要包括G+第2頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二分枝桿菌屬(Mycobacterium)分枝桿菌

結(jié)核分支桿菌牛分支桿菌禽分支桿菌副結(jié)核分枝桿菌第3頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二

第4頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二世界上第一次發(fā)明了細菌照相法；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了炭疽熱的病原細菌——炭疽桿菌；世界上第一次證明了一種特定的微生物引起一種特定疾病的原因；世界上第一次分離出傷寒桿菌；世界上第一次發(fā)明了蒸汽殺菌法；世界上第一次分離出結(jié)核病細菌；世界上第一次發(fā)明了預(yù)防炭疽病的接種方法；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了霍亂弧菌；世界上第一次提出了霍亂預(yù)防法；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了鼠蚤傳播鼠疫的秘密；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了睡眠癥是由采采蠅傳播的；制定科赫法則；創(chuàng)立了固體培養(yǎng)基劃線分離純種法。

諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎第5頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二一類細長彎曲的桿菌，因有分枝生長的趨勢而命名主要特點細長彎曲，分枝狀生長細胞壁含有大量脂質(zhì)（分枝菌酸）常用抗酸染色鑒定，呈抗酸染色陽性引起疾病都呈慢性，并伴肉芽腫第6頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二抗酸染色－齊尼二氏（Ziehl-Neelson)由于細菌細胞壁中含大量脂質(zhì)，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長染色時間而著色后又能抵抗強脫色劑鹽酸酒精的脫色，故又稱抗酸桿菌(acid-fastbacilli)5%石炭酸復(fù)紅初染加熱3%鹽酸酒精脫色1min鏡檢堿性美蘭復(fù)染5min1min第7頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二M.tuberculosis第8頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二M.aviumsubsp.paratuberculosis(Z-N)第9頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二結(jié)核分支桿菌俗稱結(jié)核桿菌，引起人類結(jié)核病致病菌主要為結(jié)核分支桿菌（M.tuberculosis)、牛分支桿菌（M.bovis)世界上1/3人感染，70%在亞洲世界防治結(jié)核病日：3月24日第10頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二結(jié)核分支桿菌第11頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二形態(tài)與染色特性細長略帶彎曲，分枝狀，無莢膜、鞭毛或芽孢，抗酸染色陽性牛分支桿菌菌體較短而粗；禽分支桿菌呈多形性。第12頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二培養(yǎng)特性特點專性需氧生長緩慢（10-30d）營養(yǎng)要求高，常用羅杰二氏培養(yǎng)基生長液體：表面生長（菌膜）固體：表面粗糙、隆起、不透明、邊緣不整齊、呈顆粒、結(jié)節(jié)、花菜狀菌落，乳白或米黃饞懶癩第13頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類觸酶試驗陽性，而熱觸酶試驗陰性（細菌懸液68度加熱20min，加入過氧化氫不產(chǎn)生氣泡）

四不怕干燥（存活6-8個月）酸（3%HCl或6%H2SO4)或堿（4%NaOH)有抵抗力堿性染料（結(jié)晶紫或孔雀綠）青霉素等抗生素

四怕乙醇濕熱（62-63度，15min）紫外線抗癆藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）抵抗力第14頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二形態(tài)結(jié)構(gòu)變異結(jié)核桿菌的L型：異煙肼誘導(dǎo)，胞壁消失，呈多形性，顆粒狀、絲狀毒力變異卡介苗BCG：Calmette和Guerin將牛分支桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒活疫苗株耐藥性變異耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多變異性第15頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二致病性致病物質(zhì)，沒有內(nèi)毒素和外毒素脂質(zhì)索狀因子（破壞細胞呼吸，引起肉芽腫）磷脂（形成結(jié)核結(jié)節(jié)）硫酸腦苷脂（抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合）蠟質(zhì)D（引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)）蛋白質(zhì)結(jié)核分枝桿菌菌體內(nèi)含有多種蛋白質(zhì)，其中重要的是結(jié)核菌素（tuberculin）。結(jié)核菌素與蠟質(zhì)D結(jié)合，能引起較強的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。第16頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二致病機理以細胞內(nèi)寄生和形成局部病灶為特點。細菌主要通過呼吸道侵入機體肺泡，被肺泡巨噬細胞吞噬，但不被消化降解，相反在其內(nèi)繁殖，形成病灶，產(chǎn)生干酪樣壞死。壞死灶被吞噬細胞、免疫細胞等包圍，形成結(jié)核結(jié)節(jié)，此時細菌停止增殖，病理損傷局限化，病灶鈣化而痊愈；但是免疫低下者，細菌繼續(xù)增殖，病灶可能破潰，菌體隨痰咳出體外傳染或散布全身。第17頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二所致疾病結(jié)核桿菌 主要引起人的結(jié)核病，靈長類動物、犬及其他與人接觸的動物均可感染。牛分支桿菌 主要引起牛結(jié)核病，其他家畜、野生反芻動物、人、靈長目動物、犬、貓等肉食動物均可感染。禽分支桿菌 主要引起禽結(jié)核，包括家禽與野禽，也可引起豬的局限性病灶。第18頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二Acinous,acino-nodosustuberculosis(cattlelung)第19頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二Tuberculosis(wildboar)第20頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二7.免疫性與變態(tài)反應(yīng)帶菌免疫，也叫傳染性免疫；細胞免疫與體液免疫存在分離現(xiàn)象，細胞免疫隨著病情的加重而減弱，體液免疫隨著病情的加重而增強；大量結(jié)核桿菌繁殖產(chǎn)生的特異性蛋白和脂質(zhì)，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，加強了對機體的進一步損傷；細胞免疫和遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)共存。第21頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二診斷技術(shù)試紙條γ-干擾素檢測ELISAPPD皮試免疫學(xué)診斷分子生物學(xué)體液免疫細菌學(xué)診斷細胞免疫8.微生物學(xué)診斷第22頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二第23頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二細菌學(xué)診斷顯微鏡檢查

取結(jié)核結(jié)節(jié)或病變與非病變交界處組織直接涂片，抗酸染色后鏡檢，如發(fā)現(xiàn)紅色成叢桿菌時，可做出初步診斷。分離培養(yǎng)

常用羅杰二氏培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)8周，培養(yǎng)陽性時，進行培養(yǎng)特性和生化特性鑒定。動物接種

病料接種動物：禽分支桿菌→雞；結(jié)核桿菌→豚鼠；牛分支桿菌→兔，接種后3周至3個月死亡。第24頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二免疫學(xué)檢測細胞免疫水平結(jié)核菌素皮試：純蛋白衍生物(PPD)γ干擾素釋放試驗(IGRA)體液免疫酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：PPD、ESAT-6、CFP-10、Ag85、MPB83、MPB70方便,快速,適合大批量檢測（IDEXX公司）試紙條第25頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二變態(tài)反應(yīng)

剃毛測量皮皺厚,記錄,標記皮內(nèi)注射結(jié)核菌素測量皮皺厚,記錄,標記皮厚差大于或等于4.0mm為陽性第26頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二采用結(jié)核菌素（PPD）皮內(nèi)注射法，牛頸部皮內(nèi)注射72h后皮腫脹厚度差≥4mm為陽性；皮腫脹厚度差在2-4mm為疑似；30d后需復(fù)檢一次，如仍為疑似，經(jīng)30-45d再次復(fù)檢，如仍為疑似可判為陽性;皮膚腫脹厚度差≤2mm為陰性。第27頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二γ干擾素釋放試驗流程第28頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二分子生物學(xué)聚合酶鏈反應(yīng)：普通PCR、巢式PCR、實時熒光定量PCR等能快速擴增結(jié)核分枝桿菌DNA檢測假陽性和假陰性問題是影響其應(yīng)用的關(guān)鍵問題環(huán)等溫PCR擴增(LAMP)操作十分簡單，對儀器設(shè)備要求低肉眼觀察白色渾濁或綠色熒光的生成來判斷16s～23srDNA(rRNA)序列法用于分枝桿菌的菌種鑒定基因芯片基因芯片耐多藥檢測試劑已獲得歐盟體外診斷試劑證書（CE-IVD）操作較復(fù)雜，不適于基層檢測第29頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二9.免疫與治療結(jié)核病：全球三大疫病“艾滋病、肺結(jié)核、瘧疾”之一人類廣泛采用卡介苗免疫接種，免疫期達4-5年。接種卡介苗的牛一年后仍維持變態(tài)反應(yīng)陽性，在用結(jié)核菌素檢疫時無法與自然感染牛區(qū)別。飼養(yǎng)牛群不接種卡介苗，每年春、秋需進行檢疫，對檢出的患結(jié)核病動物要撲殺處理。該病為人畜共患病，凡對人結(jié)核病有效的藥物，對動物也有效。但除珍稀或觀賞動物外，不提倡用藥物治療。第30頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二可引發(fā)反芻獸慢性消耗性傳染病，牛的主要臨床癥狀為持續(xù)性腹瀉和進行性消瘦。與禽分支桿菌有較多的相似性，變態(tài)反應(yīng)也與禽分支桿菌有明顯交叉反應(yīng)，現(xiàn)歸屬于禽分枝桿菌副結(jié)核亞種。副結(jié)核分支桿菌M.paratuberculosis第31頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二第32頁，共34頁，2023年，2月20日，星期二主要特性短桿菌，無