Shimadzu液相色譜基礎(chǔ)課件

液相色譜基礎(chǔ)

1色譜起源石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。2島津高效液相色譜儀LC-10Avp系列3色譜分離過程Temporalcourse流動(dòng)相5高效液相色譜原理

色譜法：利用樣品組分在兩相間分配系數(shù)

不同而進(jìn)行分離的技術(shù)流動(dòng)相：攜帶樣品流過整個(gè)系統(tǒng)的液體固定相：靜止不動(dòng)的一相，化學(xué)鍵合型固 定相

6高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。HPLC有以下特點(diǎn)：高壓-壓力可達(dá)15~30MPa。高速-流速為0.001~10.000ml/min。高效。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。高靈敏度-紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。7高效液相色譜法的分類

按分離機(jī)制不同分為液固色譜法鍵合相液相色譜法

正相色譜法反相色譜法離子交換色譜法離子對(duì)色譜法體積排阻色譜法8

流動(dòng)相流動(dòng)相選擇注意事項(xiàng)：純度：采用“HPLC”級(jí)溶劑避免使用會(huì)引起柱效損失或保留特性變化的溶劑對(duì)試樣有適宜的溶解度溶劑粘度要小與檢測(cè)器相匹配10溶劑前處理過濾：0.45um或更小孔徑濾膜目的：除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞色譜柱，尤其是使用無機(jī)鹽配制的緩沖液。脫氣目的：除去流動(dòng)相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對(duì)測(cè)定的影響：

1）柱流量不準(zhǔn)

2）檢測(cè)器基線波動(dòng)脫氣注意點(diǎn)：

1）每天脫氣(無在線脫氣器時(shí)）

2）混合溶劑脫氣時(shí)間不能過長11何時(shí)需要使用在線脫氣機(jī)13輸液泵送液方式：恒流控制恒壓控制VP系列：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵Prominence：LC-20AD、LC-20AT、LC-20AB泵

D泵：并聯(lián)微體積往復(fù)式泵

T泵：串聯(lián)式往復(fù)泵

B泵：并聯(lián)微體積往復(fù)式泵（2組）14等度洗脫和梯度洗脫等度洗脫梯度洗脫15高壓梯度泵系統(tǒng)17四元低壓梯度泵系統(tǒng)18進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器

SIL-10HTSIL-10ASIL-20A/C手動(dòng)進(jìn)樣器

Rheodyne7725/7725i原理：（六通閥）注入方式：

1）全量注入

2）部分注入19

裝填狀態(tài)樣品注入六通閥21柱溫箱柱溫控制的優(yōu)點(diǎn)：分析結(jié)果重現(xiàn)性好提高柱效降低柱壓保證檢測(cè)穩(wěn)定性22低價(jià)格，小體積可安裝手動(dòng)進(jìn)樣器溫度范圍

室溫-15oC∽80oC室溫傳感器

保證分析在可靠的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行可單獨(dú)進(jìn)行操作容量大，可容納

2個(gè)切換閥，手動(dòng)進(jìn)樣器混合室，VP副控制器

CDD/L-ECD檢測(cè)池溫度范圍

室溫+10oC∽80oC（Avp)

室溫-10oC∽80oC（ACvp)室溫傳感器

保證分析在可靠的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行可單獨(dú)進(jìn)行操作CTO-10ASvp(半導(dǎo)體模塊加熱式）CTO-10A(C)vp(空氣循環(huán)式）CTO-10A系列23檢測(cè)器SPD-10Avp(190—600nm)紫外檢測(cè)器SPD-10AVvp(190-900nm)紫外檢測(cè)器SPD-M10Avp(190—800nm)二極管陣列檢測(cè)器RF-10AXL熒光檢測(cè)器RID-10A示差折光檢測(cè)器CDD-10Avp電導(dǎo)檢測(cè)器L-ECD-6A電化學(xué)檢測(cè)器ELSD蒸發(fā)光散射檢測(cè)器25紫外可見光檢測(cè)器EinEoutA=eCl

=-log(Eout/Ein)

比爾定律檢測(cè)池C:濃度l優(yōu)點(diǎn)：1）靈敏度高

2）對(duì)溫度和流速不敏感

3）可用于梯度洗脫缺點(diǎn)：僅適用于測(cè)定有紫外吸收的物質(zhì)原理：26雙波長檢測(cè)水溶維生素的雙波長檢測(cè)29比例色譜30停機(jī)掃描31二極管陣列檢測(cè)器色譜圖光譜圖吸光度波長時(shí)間32熒光檢測(cè)器優(yōu)點(diǎn)：1）靈敏度極高，是最靈敏的檢測(cè)器之一2）選擇性好

3）對(duì)溫度和流速不敏感，可用于梯度洗脫缺點(diǎn)：僅適用于測(cè)定可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)可檢測(cè)物質(zhì)：多環(huán)芳烴、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、兒茶酚氨等（具有對(duì)稱共軛體系）33示差折光檢測(cè)器原理：連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率來測(cè)定試樣中各組分濃度。優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測(cè)器缺點(diǎn)：1）對(duì)溫度變化敏感2）對(duì)溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測(cè)3）屬于中等靈敏度的檢測(cè)器34電導(dǎo)檢測(cè)器原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來測(cè)定電離物質(zhì)含量。優(yōu)點(diǎn)：對(duì)流動(dòng)相流速和壓力的改變不敏感，可用于梯度洗脫缺點(diǎn)：對(duì)溫度變化敏感（每升高1度，電導(dǎo)率增加2%-2.5%)廣泛應(yīng)用于離子色譜。主要用于檢測(cè)水溶性無機(jī)和有機(jī)離子35電化學(xué)檢測(cè)器原理：測(cè)量電活性分子在工作電極表面氧化或還原反應(yīng)時(shí)所產(chǎn)生電流變化的檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：1）靈敏度高2）選擇性好，只檢測(cè)電活性物質(zhì)缺點(diǎn)：1）不適用于梯度洗脫2）對(duì)溫度、壓力變化敏感36蒸發(fā)光散射檢測(cè)器原理：柱流出物霧化流動(dòng)相蒸發(fā)溶質(zhì)粒子散射光強(qiáng)度檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：1、適用于沒有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待測(cè)物2、可以應(yīng)用有強(qiáng)紫外吸收的試劑，如氯仿、丙酮等3、適用于梯度洗脫4、通用型檢測(cè)器，只要待測(cè)物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用5、對(duì)環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作6、沒有溶劑前緣峰，適用于保留時(shí)間短的物質(zhì)的檢測(cè)缺點(diǎn)：1、如果流動(dòng)相不能揮發(fā)（如含有鈉鹽、鉀鹽等)，不適用2、對(duì)有紫外特征吸收的物質(zhì)，檢測(cè)靈敏度不如紫外檢測(cè)器