雙光子和光譜在激光共聚焦顯微鏡上的應(yīng)用經(jīng)驗課件_第1頁
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雙光子和光譜掃描在激光共聚焦顯微鏡上的應(yīng)用經(jīng)驗儀器與技術(shù)服務(wù)平臺機(jī)型:ZeissLSM710nlo32通道陣列PMT690-1080nm可調(diào)諧飛秒激光器激光共聚焦顯微鏡的非常規(guī)應(yīng)用利用雙光子分辨目標(biāo)熒光和自發(fā)熒光利用光譜掃描鑒定微弱熒光信號的真假轉(zhuǎn)基因材料快速篩選嘈雜背景下的細(xì)胞計數(shù)非線性效應(yīng)光刻和深度掃描模擬近紅外光源GFP標(biāo)記水稻根中自發(fā)熒光的清除雙光子激發(fā)下GFP熒光與自發(fā)熒光的波長分離,820nm激發(fā)時,僅采集493-542nm區(qū)間的信號以保證特異性Ex820nm,channelmode微弱或自發(fā)熒光存在下的信號鑒定Promoter::GFP載體注射煙草葉片(lambdamode成像)轉(zhuǎn)GFP弱表達(dá)

轉(zhuǎn)GFP不表達(dá)鏡下目視特征:綠色信號被強(qiáng)烈紅光掩蓋GFP和RFP弱時無法分辨Lambda合成圖特征:GFP:綠色偏藍(lán)自發(fā)熒光:綠色偏黃葉綠素?zé)晒猓杭t色光譜特征:GFP:主發(fā)射峰位于約518nm副發(fā)射峰位于約540nm后者高度約為前者的一半呈臺階形自發(fā)熒光:在560nm左右對稱分布葉綠素?zé)晒猓?25nm以上強(qiáng)烈信號GFP葉綠素轉(zhuǎn)基因材料的快速篩選

原則:密集預(yù)排列待測樣技巧:lambda掃描

色彩判別熒光峰形檢查GFP藍(lán)綠特征色GFP臺階形特征峰518540非線性效應(yīng):碳納米管498518421原理:某些材料在雙光子激發(fā),會發(fā)射波長為激發(fā)光一半的熒光利用不同波長的雙光子激光照射可能含碳納米管的靶向藥物,lambda掃描發(fā)現(xiàn)熒光信號呈現(xiàn)嚴(yán)格的倍頻關(guān)系Ex850Ex1000Ex1040光刻和深度掃描一種人工合成的透明有機(jī)晶體,在一定強(qiáng)度的近紫外光下會發(fā)生局部變性,從而具有雙光子效應(yīng)在2個不同Z坐標(biāo)下做bleach,ex458nmex900nm做z-stack,顯示多層光刻效果,信號隨深度增加而衰減葉表面蠟質(zhì)層成

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