瘧疾鏡檢的實驗室技術(shù)

瘧疾鏡檢的實驗室技術(shù)第1頁/共20頁血片的清潔新的載玻片必須洗潔凈后才可直接浸于95%的酒精中，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。用過的載玻片可用5％之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一張一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細心拭擦。再用清水漂洗干凈并以紗布擦干，然后浸于95％酒精內(nèi)脫脂，照上述法處理，亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應(yīng)注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。第2頁/共20頁采血的部位和方法以耳垂采血為主。以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指緊捏耳垂，右手持一次性采血針迅速刺入，適可而止第一滴血不必擦掉，即可應(yīng)用。（若由指頭取血則受檢者痛楚較大，且易引起創(chuàng)口感染，一投不宜采用。）第3頁/共20頁采血的血量厚血膜血量約為5立方毫米左右(即一小滴)，涂成邊緣光滑之園形，直徑約0.8—1.0厘米左右。薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,過多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約2.5厘米，寬約2厘米第4頁/共20頁采血的時間進行瘧疾普查時，在同一時間內(nèi)常常需要檢查很多居民，故一般無法考慮取血的時間。但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應(yīng)當(dāng)考慮在什么時候取血較為適宜，尤在確定不下蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患者的情況下。第5頁/共20頁采血的時間---間日瘧間日瘧原蟲及三日瘧原蟲，在患者剛發(fā)冷發(fā)熱以后，大部是在環(huán)狀滋養(yǎng)體期，故這一時期區(qū)別瘧原蟲種類是不容易的。雖在—般情況下，隨便什么時間檢查感染者的末稍血液，多少能查到各個時期的原蟲，但適當(dāng)?shù)娜⊙獣r間，一般是在患者發(fā)作數(shù)小時至十余小時，即已滋養(yǎng)發(fā)育至具有易于鑒別的晚期滋養(yǎng)體期．第6頁/共20頁采血的時間---惡性瘧惡性瘧原蟲，從理論上說，因為惡性原蟲的裂體生殖是在內(nèi)臟的毛細血管內(nèi)進行的，所以在發(fā)作之前，患者的末稍血液中不易查到。但實際情況不盡如此，一般在受染者的末稍血液中，隨時能見到少數(shù)惡性瘧原蟲的環(huán)狀滋養(yǎng)體，雖然如此，較理想的取血時間，是在發(fā)作后的20小時左右，因為這個時候，環(huán)狀滋養(yǎng)體雖已滋長發(fā)育至最高峰，但尚未回至內(nèi)臟的毛細血管中去進行裂體生殖。環(huán)狀滋養(yǎng)體的數(shù)量與構(gòu)造，有助于瘧原蟲種類的鑒別。惡性瘧原蟲的配子體很易識別，但在初發(fā)時，一般需要在發(fā)作八日后才能在末稍血液中出現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)注意第7頁/共20頁厚、薄血膜的形狀和位置薄血膜寬2cm，長2.5cm厚血膜直徑0.8-1cm假定將玻片劃成三格等分，則厚血膜應(yīng)位于中格靠右側(cè)線處，薄血膜則從玻片中央起至左格中部止，右端空格供記錄姓名，編號或貼標(biāo)簽之用(如圖)第8頁/共20頁血片的制作1玻片的執(zhí)持方法：無論在拭擦玻片，制作血片或染色血片時，手指僅可夾持玻片兩側(cè)緣，切匆觸及玻片之上下面以免手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不勻，厚血膜易于脫落第9頁/共20頁血片的制作-厚血膜涂制取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二側(cè)，以左端下角從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當(dāng)位置，自內(nèi)向外回轉(zhuǎn)擴大，涂成厚血膜，使厚薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之殘留小量血液。第10頁/共20頁血片的制作--薄血膜涂制

以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻片約成25一45度角，使血滴向二旁擴展至一定寬度時，立即向左邊輕輕迅速推出即成薄血膜。推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一層血細胞，血細胞的分布排列比較均勻。無裂縫，無空隙。第11頁/共20頁血片的編號血片編號可根據(jù)實際操作進行。號碼必須不易脫落，建議用鉛筆在薄血膜上編號。第12頁/共20頁血片的固定和脫膜薄血膜用甲醇固定現(xiàn)場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，直接染色。保存時間較長的標(biāo)本片厚血膜要脫血膜后保存。第13頁/共20頁血片制作的注意事項平放、有蓋、防止灰、塵和植物孢子污染。防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸自然干燥，不能太陽曬和火烤第14頁/共20頁制作血片的注意事項制成的血片切勿用火烤、日曬或放在新購置之標(biāo)本盒內(nèi)，以免血紅蛋白凝固無法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中血細胞沉在一邊，可使厚薄不勻。此外還要防止蒼蠅吮吸血膜和灰塵污染血片。制成的血膜須完全干燥后(自然情況下約4-12小時才能全干燥；必要時，可置于37℃的暖箱中，促其速干)始可進行固定及染色否則薄血膜中的紅細胞邊緣皺縮，厚血膜容易在染色時脫落，而?，F(xiàn)網(wǎng)狀的背景；反之；血片擱置過久則有霉菌及枯草桿菌生長，血紅蛋白凝固，也不能使用，因此不利于鏡檢。若把未經(jīng)固定的血片能盛于氯化鈣的干燥器內(nèi)，然后放入冰箱中，可保存3年之久，并仍可較滿意的染色。第15頁/共20頁血片的染色吉氏染液的成份原料：吉氏染粉10g

中性甘油500ml

純甲醇500ml第16頁/共20頁吉氏液染色方法將吉氏染液配成3%的稀釋液水97ml+3ml吉氏液PH7.0--7.2染色25—30分鐘第17頁/共20頁影響染色效果的因素染料和溶劑