微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（第2課時） 練習(xí) 高中生物新人教版選擇性必修3（2022-2023學(xué)年）

第2節(jié)微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（第2課時）單選題1．用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)時，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中的活菌數(shù)，原因是（）A．菌落中的細(xì)菌數(shù)目是固定的B．平板上的一個菌落就是一個細(xì)菌C．通過此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)與活菌的實際數(shù)目相同D．平板上的一個菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌【答案】D【分析】稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻坑孟♂屚坎计桨宸ㄟM(jìn)行微生物計數(shù)時，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約含有多少活菌，D正確，ABC錯誤。2．由于石油等不可再生資源供應(yīng)日趨緊張，開發(fā)各種再生纖維素纖維成為獲取新型紡織原料的主要渠道，而纖維素分解菌在轉(zhuǎn)化可再生纖維素方面具有巨大的應(yīng)用價值。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．富集纖維素分解菌時，應(yīng)用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)B．分離纖維素分解菌時，培養(yǎng)基中應(yīng)加入適量的剛果紅C．可用平板劃線法對纖維素分解菌進(jìn)行純化培養(yǎng)D．培養(yǎng)纖維素分解菌時，接種后的培養(yǎng)基需倒置【答案】A【分析】1、篩選纖維素分解菌應(yīng)用以纖維素為唯一碳源的擇選培養(yǎng)基。2、剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶可以水解纖維素而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈，所以可以用剛果紅染液鑒別纖維素分解菌?！驹斀狻緼、在分離出纖維素分解菌之前，需對微生物進(jìn)行富集培養(yǎng)，此時應(yīng)用液體培養(yǎng)基，利于培養(yǎng)液與微生物充分接觸，加速微生物繁殖，A錯誤；B、在分離纖維素分解菌時，培養(yǎng)基以纖維素作為唯一碳源，且應(yīng)加入剛果紅染液，B正確；C、對纖維素分解菌進(jìn)行純化培養(yǎng)時，可采用平板劃線法或稀釋涂布平板法，C正確；D、接種后，為防止皿蓋上凝結(jié)的水珠滴落在培養(yǎng)基上造成培養(yǎng)基污染，應(yīng)將培養(yǎng)基進(jìn)行倒置培養(yǎng)，D正確。故選A。3．如圖為分離和純化分解甲醛的細(xì)菌的實驗過程，其中LB培養(yǎng)基能使菌種成倍擴(kuò)增，以下說法正確的是（

）A．需要對活性污泥作滅菌處理B．②中LB培養(yǎng)基只能以甲醛為唯一碳源C．目的菌種異化作用類型為厭氧型D．經(jīng)⑤處理后，應(yīng)選擇瓶中甲醛濃度最低的一組進(jìn)一步純化培養(yǎng)【答案】D【分析】據(jù)圖分析：在分離和純化分解甲醛的細(xì)菌的過程中，通過①過程制取各種菌的懸濁液，②過程用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)后，可以獲得大量微生物，從而增加目的菌的菌群數(shù)量；③中的培養(yǎng)基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的細(xì)菌能夠存活，通過③過程可以篩選出能分解甲醛的微生物；④過程可以獲得單個菌落，獲得單個菌落過程中常用的接種方法是平板劃線法或者稀釋涂布平板法，為避免水滴污染培養(yǎng)基，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿須倒置；經(jīng)過⑤過程后，取樣測定甲醛濃度，選出甲醛濃度最低的培養(yǎng)瓶，再分離、培養(yǎng)菌株?！驹斀狻緼、該實驗是從活性污泥中分離和純化能分解甲醛的細(xì)菌，故不需要對活性污泥作滅菌處理，A錯誤；B、②過程用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)后，可以獲得大量微生物，從而增加目的菌的菌群數(shù)量，故②中LB培養(yǎng)基不是以甲醛為唯一碳源；③過程可以篩選出能分解甲醛的微生物，需要以甲醛為唯一碳源的培養(yǎng)基，B錯誤；C、圖示分解甲醛的細(xì)菌是在培養(yǎng)皿中進(jìn)行的，故目的菌種異化作用類型屬于需氧型細(xì)菌，C錯誤；D、經(jīng)⑤處理后，瓶中甲醛濃度降低，甲醛濃度最低的一組中分解甲醛的細(xì)菌純度最高，可進(jìn)一步純化培養(yǎng)，D正確。4．某生物學(xué)興趣小組嘗試對土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離并計數(shù)，相關(guān)敘述正確的是（

）A．制備選擇培養(yǎng)基時，需加入尿素、瓊脂、葡萄糖、硝酸鹽等物質(zhì)B．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計結(jié)果，活菌的實際數(shù)目往往比統(tǒng)計的菌落數(shù)低C．脲酶將尿素分解成氨使培養(yǎng)基的pH降低，加入酚紅指示劑后變紅D．每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量=某一稀釋倍數(shù)下至少3個培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)÷菌液稀釋液體積×稀釋倍數(shù)【答案】D【分析】1、稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)時，應(yīng)選擇30-300的菌落數(shù)進(jìn)行計數(shù)。2、間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）的原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。3、如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基；在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，PH增高，使指示劑變紅色【詳解】A、分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基中要有尿素、瓊脂、葡萄糖，尿素給分解尿素的細(xì)菌提供氮源，不能加硝酸鹽，否則無法起到選擇出尿素分解菌的作用，A錯誤；B、用稀釋涂布平板法統(tǒng)計結(jié)果時，有的活菌在培養(yǎng)過程中會死亡，而有的菌落是由多個活菌共同形成的，故活菌的實際數(shù)目往往比統(tǒng)計的菌落數(shù)高，B錯誤；C、脲酶將尿素分解成氨使培養(yǎng)基的pH升高，加入酚紅指示劑后變紅，C錯誤；D、根據(jù)活菌計數(shù)法的計數(shù)公式可知，每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量=某一稀釋倍數(shù)下至少3個培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)÷菌液稀釋液體積×稀釋倍數(shù)，D正確?！军c睛】本題考查了微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)知識?？忌R記和掌握利用培養(yǎng)基對土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行選擇和鑒定的方法和原理，利用分析與綜合的科學(xué)思維，結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。5．在“果醋制作過程”中，獲得較多的醋酸桿菌菌種的最簡便方法是（）A．不必人為加入菌種，在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸桿菌B．從變酸的葡萄酒表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離C．從泡菜壇蓋邊沿的水槽中的表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離D．從土壤中分離提取【答案】B【分析】參與果醋制作的菌種是醋酸桿菌，醋酸桿菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足的時候才能進(jìn)行旺盛的生理活動。變酸的酒的表面觀察的菌膜就是醋酸桿菌在液面上大量繁殖而形成的，因此從變酸的葡萄酒表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離可以獲得較多的醋酸桿菌菌種。【詳解】A、在葡萄等水果表面存在大量的酵母菌，不是醋酸桿菌，A錯誤；B、變酸的葡萄酒表面的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的，可以用此菌膜培養(yǎng)、分離獲得醋酸菌，B正確；C、泡菜壇蓋邊沿的水槽中的表面獲得菌膜是酵母菌形成的，C錯誤；D、土壤中有多種微生物，不容易分離出醋酸菌，D錯誤；6．稀釋涂布平板法不僅是分離和純化微生物的重要方法，也是測定微生物數(shù)量的重要方法。用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在統(tǒng)計數(shù)據(jù)時應(yīng)（

）A．隨機(jī)抽取某個稀釋度的培養(yǎng)基，統(tǒng)計菌落數(shù)B．將不同稀釋度的3個培養(yǎng)基上的菌落數(shù)求和C．將相同稀釋度的全部培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行計數(shù)D．隨機(jī)抽取相同稀釋度的3個培養(yǎng)基統(tǒng)計菌落數(shù)后求平均值【答案】D【分析】檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)，可以看出采用的計數(shù)方法是稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)。用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求取平均值，再通過計算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)?！驹斀狻坑孟♂屚坎计桨宸y定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求其平均值，再通過計算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)。7．某同學(xué)利用選擇培養(yǎng)基成功分離出了土壤中的自生固氮菌，得到了如圖所示的實驗結(jié)果，以下說法正確的是（

）A．該實驗使用了劃線法接種B．該實驗使用了液體培養(yǎng)基C．該實驗使用了無碳培養(yǎng)基D．該實驗使用了無氮培養(yǎng)基【答案】D【分析】自生固氮菌可以利用空氣中氮氣為氮源，所以培養(yǎng)基中不需要添加氮源，自生固氮菌就能生長，而在沒有氮源的培養(yǎng)基上其它不能固氮的微生物不能生長，所以該培養(yǎng)基可用于篩選自生固氮菌?！驹斀狻緼、稀釋涂布平板法是將菌液稀釋成不同濃度進(jìn)行涂布，而平板劃線法是挑取單個菌落在平板上劃線，據(jù)此可判斷該實驗中將土壤浸出液接種到培養(yǎng)基的方法為稀釋涂布平板法，A錯誤；B、圖示中是將土壤浸出液接種到無氮培養(yǎng)基上選擇自生固氮菌的過程，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，B錯誤；C、自生固氮微生物屬于異養(yǎng)微生物，沒有碳源不能生長，所以為了保證自生固氮菌的生長培養(yǎng)基中應(yīng)添加碳源，C錯誤；D、由于自生固氮菌可以利用空氣中氮氣為氮源，而其它不能固氮的微生物不能利用氮氣做氮源，所以在無氮的培養(yǎng)基上可以篩選出自生固氮菌，故圖示中使用了無氮培養(yǎng)基，D正確。8．高濃度的銨鹽對池塘養(yǎng)殖的對蝦有一定的毒害作用，硝化細(xì)菌是一種好氧菌，可有效凈化水體中銨鹽，降低對蝦的死亡率。科研人員擬從當(dāng)?shù)貙ξr養(yǎng)殖池塘中篩選出對銨鹽降解率高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株，操作流程如下圖所示。下列敘述錯誤的是（

）A．從對蝦死亡率低的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率B．純化菌種時，若按圖中所示的接種方法接種，接種環(huán)需要灼燒5次C．在錐形瓶中培養(yǎng)硝化細(xì)菌時需要振蕩培養(yǎng)，目的是增加硝化細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)、溶解氧的充分接觸D．可選擇銨鹽濃度減小得最多的一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)【答案】B【分析】1、微生物常見的接種的方法：(1)平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。(2)稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。2、振蕩培養(yǎng)：提供充足氧氣、并使細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，擴(kuò)大培養(yǎng)?！驹斀狻緼、本題想要篩選出對銨鹽降解率高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株，那么從對蝦死亡率低的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率，A正確；B、純化菌種時，采用圖示方法接種時，每次劃線前后都要灼燒接種環(huán)，共有5個劃線區(qū)域，因此接種環(huán)需要灼燒6次，B錯誤；C、已知硝化細(xì)菌是好氧性細(xì)菌，則擴(kuò)大培養(yǎng)時需要振蕩的目的是增加硝化細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)、溶解氧的充分接觸，C正確；D、對銨鹽降解率越高，培養(yǎng)基中銨鹽濃度減小得越多，所以可選擇銨鹽濃度減小得最多的一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)，D正確。9．甲、乙、丙是三種微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（

）粉狀硫10gK2HPO44gFeSO40．5g蔗糖10g（NH4）2SO40．4gH2O100mlMgSO49．25gCaCl20．5gⅠ++++-+++Ⅱ+++-++++Ⅲ++++++++A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物B．甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C．甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物D．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物【答案】D【分析】據(jù)表分析：Ⅰ培養(yǎng)基的特點是缺氮，能在這樣的培養(yǎng)基上存活的只能是固氮微生物；Ⅱ培養(yǎng)基的特點是沒有有機(jī)碳源，是培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基；Ⅲ培養(yǎng)基是適宜異養(yǎng)微生物生長的培養(yǎng)基。根據(jù)表格分析，甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培養(yǎng)基缺氮，說明甲能夠自身固氮，屬于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，而甲和乙都不能，Ⅱ培養(yǎng)基中沒有有機(jī)碳源，說明丙能夠合成有機(jī)物，屬于自養(yǎng)微生物；而丙不能在Ⅰ培養(yǎng)基中生長，說明不能固氮；又不能在Ⅱ培養(yǎng)基中生長，說明不能合成有機(jī)物，只能在Ⅲ培養(yǎng)基中生長，說明丙屬于異養(yǎng)微生物。【詳解】根據(jù)表格分析，甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培養(yǎng)基缺氮，說明甲能夠自身固氮，屬于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，而甲和乙都不能，Ⅱ培養(yǎng)基中沒有有機(jī)碳源，說明丙能夠合成有機(jī)物，屬于自養(yǎng)微生物；而丙不能在Ⅰ培養(yǎng)基中生長，說明不能固氮；又不能在Ⅱ培養(yǎng)基中生長，說明不能合成有機(jī)物，只能在Ⅲ培養(yǎng)基中生長，說明丙屬于異養(yǎng)微生物，D正確。10．利用農(nóng)作物秸稈等纖維質(zhì)原料生產(chǎn)的乙醇，經(jīng)加工可制成燃料乙醇，從而減少了對石油資源的依賴，下圖為生產(chǎn)燃料乙醇的簡要流程，據(jù)圖分析錯誤的一項是（

）A．要得到微生物A，最好選擇富含纖維素的土壤采集土樣B．圖中②過程常用的微生物B是酵母菌C．微生物A和微生物B可利用的碳源相同D．可用纖維素酶制劑代替微生物A起作用【答案】C【分析】土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。【詳解】A、據(jù)圖分析可知，微生物A可以產(chǎn)生纖維素酶，所以要得到微生物A，最好選擇富含纖維素的土壤采集土樣，A正確；B、酒精發(fā)酵產(chǎn)生乙醇常用的菌種（微生物B）是酵母菌，B正確；C、微生物A和微生物B可利用的碳源分別是纖維素和葡萄糖，C錯誤；D、生物A之所以能利用纖維質(zhì)原料是因為其含有纖維素酶，故可用纖維素酶制劑代替微生物A起作用，D正確。11．將大腸桿菌接種到適宜的細(xì)菌培養(yǎng)基上，加蓋后，以不同的方式處理，并放置在不同的溫度環(huán)境中，培養(yǎng)24小時后，觀察所得結(jié)果列表如下。編號處理方法溫度結(jié)果A接種大腸桿菌40℃全表面呈渾濁B接種大腸桿菌并覆蓋一吸有抗生素X的圓紙片40℃紙片周圍呈現(xiàn)一片清晰區(qū)，其余表面呈渾濁C接種大腸桿菌并覆蓋一吸有抗生素Y的圓紙片40℃全表面呈渾濁D接種大腸桿菌，表面全被醋覆蓋40℃全表面清晰E接種大腸桿菌0℃全表面清晰F未接菌種40℃全表面清晰根據(jù)上述實驗結(jié)果所作出的下列判斷中，錯誤的是（

）A．編號A和F比較可知，有大腸桿菌的培養(yǎng)基表面會變渾濁B．根據(jù)編號B和C的觀察結(jié)果，可知抗生素Y比抗生素X的殺菌能力強(qiáng)C．將編號E和A的結(jié)果比較可知，0℃的環(huán)境不適合大腸桿菌生長D．若揭開編號F的蓋子，24小時后可觀察到培養(yǎng)基表面會出現(xiàn)渾濁【答案】B【分析】分析表格：表中表示將大腸桿菌接種到適宜的細(xì)菌培養(yǎng)基上，加蓋后，以不同的方式處理，并放置在不同的溫度環(huán)境中，培養(yǎng)24小時后，觀察所得的結(jié)果。比較A和F可知有大腸桿菌培養(yǎng)基的表面會變渾濁；比較B和C可知抗生素X比抗生素Y的殺菌能力強(qiáng)；比較E和A可知0℃不適合大腸桿菌生長?！驹斀狻緼、根據(jù)對照原則，A、F的區(qū)別在于是否接種了大腸桿菌，比較A、F的觀察結(jié)果，有大腸桿菌培養(yǎng)基的表面會變渾濁，A正確；B、含有抗生素的紙片覆蓋在大腸桿菌的培養(yǎng)基上，可根據(jù)培養(yǎng)基表面的渾濁程度判定此種抗生素對大腸桿菌的殺菌能力，即抗生素X比抗生素Y的殺菌能力強(qiáng)，B錯誤；C、E、A形成對照，其自變量是溫度，可知0℃不適合大腸桿菌生長，C正確；D、F暴露在空氣中后，會自然接種菌種，形成菌落，使培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁，D正確。12．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對其計數(shù)(如下圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）A．將培養(yǎng)基調(diào)至酸性時，有利于降解菌的生長繁殖B．利用該方法計數(shù)結(jié)果往往比顯微鏡直接計數(shù)法偏小C．以丙草胺為唯一氮源培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)可提高降解菌的濃度D．5號試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1．7×109個【答案】A【分析】1、微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落；（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。2、在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基?！驹斀狻緼、培養(yǎng)細(xì)菌時，應(yīng)該將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，A錯誤；B、該計數(shù)方法為稀釋涂布平板法，由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故計數(shù)結(jié)果比顯微鏡直接計數(shù)法偏小，B正確；C、若以丙草胺作為唯一氮源，則只有具有降解能力的降解菌能夠存活，故可以提高降解菌的濃度，C正確；D、根據(jù)5號試管的數(shù)據(jù)可知，每克土壤中菌株數(shù)為（168+175+167）÷3÷0.1×106=1.7×109個，D正確。13．酵母菌的品質(zhì)影響葡萄酒的產(chǎn)量和質(zhì)量，研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌菌株，進(jìn)行了如圖I所示實驗，甲、乙、丙、丁錐形瓶內(nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基，下列說法錯誤的是（

）A．葡萄酒發(fā)酵過程中，缺氧酸性環(huán)境、酵母菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物酒精等可抑制雜菌的繁殖B．用稀釋涂布平板法計算出葡萄酒過濾液的活菌數(shù)為6.8×109個/L，此數(shù)值可能低于實際的活菌數(shù)C．對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，菌種接種過程中的試管口、瓶口等需灼燒滅菌D．由圖Ⅱ可知，丙瓶培養(yǎng)基渾濁的原因是培養(yǎng)基滅菌不徹底，丁組酵母菌產(chǎn)酒精能力比乙強(qiáng)【答案】D【分析】果酒制作過程中的相關(guān)實驗操作：材料的選擇和處理→滅菌→榨汁→發(fā)酵。利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的環(huán)境下發(fā)酵產(chǎn)酒精。若對菌液計數(shù)，需選取菌落數(shù)處于30~300的培養(yǎng)皿計數(shù)。平均菌落數(shù)除以涂布體積乘上稀釋倍數(shù)求的是每毫升發(fā)酵液的微生物數(shù)量，還應(yīng)該再乘10算每升發(fā)酵液的微生物數(shù)?！驹斀狻緼、利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的環(huán)境下發(fā)酵產(chǎn)酒精。次生代謝不是生物生長所必需的，產(chǎn)生的酒精不是酵母菌生長所必需的物質(zhì)，所以是次生代謝物。大多數(shù)雜菌在缺氧、有酒精的環(huán)境下無法繁殖，A正確；B、若對菌液計數(shù)，需選取菌落數(shù)處于30~300的培養(yǎng)皿計數(shù)。平均菌落數(shù)除以涂布體積乘上稀釋倍數(shù)求的是每毫升發(fā)酵液的微生物數(shù)量，還應(yīng)該再乘10算每升發(fā)酵液的微生物數(shù)，故先求平均菌落數(shù)為（62+68+74）÷3=68，除以涂布體積0.1mL后等于680個/mL，稀釋倍數(shù)為1×104，再乘103，最后為6.8×109個/L，計數(shù)過程中兩個或兩個以上細(xì)胞連在一起，平板上生長出一個菌落，所以數(shù)目偏小，B正確；C、培養(yǎng)基滅菌采用高壓蒸汽滅菌，玻璃器皿、接種用具可采用干熱滅菌，接種時的玻璃瓶口等都需在酒精燈火焰處進(jìn)行灼燒滅菌，C正確；D、乙、丙、丁挑取不同的菌落培養(yǎng)，丙瓶與乙、丁瓶相同條件培養(yǎng)，但培養(yǎng)液沒有酒精產(chǎn)生，且瓶內(nèi)活菌數(shù)量不低，推測丙瓶是通氣培養(yǎng)；甲接種無菌水，瓶中無菌，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，無菌操作正常，丁組的活菌數(shù)比乙組少，但是產(chǎn)生的酒精和乙組一樣多，所以丁組產(chǎn)生酒精能力比乙強(qiáng)，D錯誤。14．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如下圖所示，①為土壤樣品。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）A．圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源B．如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法C．若圖中④為對照實驗，則其中應(yīng)以苯酚作為唯一的碳源D．使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落【答案】C【分析】1、從土壤中篩選目的微生物的流程一般為：土壤取樣→樣品的稀釋→涂布培養(yǎng)→挑選能生長的菌落→鑒定。2、微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻緼、由題干信息分析可知，該實驗的目的是從土壤中篩選獲得只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，故圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為唯一碳源，以增加目的菌的濃度，A正確；B、如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法，B正確；C、④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別是④的培養(yǎng)基不加入苯酚作碳源，⑤的培養(yǎng)基加入苯酚作碳源，這樣才能形成對照，C錯誤；D、平板劃線法和稀釋涂布平板法都可能在培養(yǎng)基上形成單個菌落，D正確。二、綜合題15．測定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測定大腸桿菌的數(shù)目。流程如圖所示，濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細(xì)菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上培養(yǎng)→統(tǒng)計菌落數(shù)目。據(jù)圖回答問題：(1)過濾待測水樣用到的濾杯、濾膜和濾瓶首先需要進(jìn)行消毒滅菌處理，保證實驗不受其它微生物干擾。與過濾有關(guān)的操作都要在___________________旁進(jìn)行。(2)將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的_______________操作。從物理狀態(tài)角度分析，EMB培養(yǎng)基屬于_______________培養(yǎng)基，制備培養(yǎng)基時需要采用_______________法滅菌。(3)某生物興趣小組的某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測定，無菌操作下將10ml待測水樣加入到90ml無菌水中，稀釋后的100ml菌液通過濾膜法測得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為124，黑色菌落數(shù)平均為31，則推測1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為___________________個。(4)該同學(xué)進(jìn)一步思考，利用濾膜法也可能用于測定待測水樣中其他微生物的數(shù)目。他取了兩份水樣，一份待測水樣來自變酸的果酒，從中檢測到兩種微生物，它們在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是___________________。另一份來自某公園的觀賞湖，若要通過測量藍(lán)細(xì)菌的數(shù)目來研究水華，培養(yǎng)基配方中則必需添加___________________（水、無機(jī)鹽、碳源、氮源）?！敬鸢浮?1)酒精燈火焰(2)

接種

固體

高壓蒸汽滅菌(3)3100(4)

有無核膜為界限的（成形的）細(xì)胞核

水、無機(jī)鹽、氮源【分析】培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；根據(jù)物理性質(zhì)分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求。（1）與過濾有關(guān)的操作都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，這是因為酒精燈火焰旁存在無菌區(qū)域，能夠減少雜菌污染。（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的接種操作。從物理性質(zhì)角度分析，EMB培養(yǎng)基能夠讓微生物在培養(yǎng)基上形成菌落，屬于固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。（3）某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測定，無菌操作下將10mL待測水樣加入到90mL無菌水中，即稀釋了10倍，稀釋后的100ml菌液通過濾膜法測得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為124，黑色菌落數(shù)平均為31，黑色菌落為大腸桿菌，則推測1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為31÷100×10×1000=3100個。（4）變酸的果酒里含有酵母菌和醋酸桿菌，酵母菌屬于真核生物中的真菌，醋酸桿菌屬于原核生物，它們在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是有無核膜為界限的（成形的）細(xì)胞核。若要通過測量藍(lán)細(xì)菌的數(shù)目來研究水華，結(jié)合藍(lán)細(xì)菌是自養(yǎng)型微生物，能夠利用光合作用合成自身所需的有機(jī)物，碳源來自空氣中的二氧化碳，故培養(yǎng)基配方中則必需添加水、無機(jī)鹽、氮源。16．在我國，樂果是一種廣泛使用的有機(jī)磷農(nóng)藥，對樂果污染的土壤進(jìn)行微生物修復(fù)一直是科學(xué)家研究的熱點?，F(xiàn)要從土壤中篩選能有效降解樂果的微生物，回答下列問題：(1)用于篩選的樣品應(yīng)來自________________的土壤。(2)微生物馴化是指在培養(yǎng)過程中，逐步加入某種物質(zhì)，讓其逐漸適應(yīng)，得到對此種物質(zhì)耐受或者能降解此種物質(zhì)的微生物的過程。該實驗中，所用馴化培養(yǎng)基含有蛋白胨10．0g、氯化鈉1．0g、磷酸二氫鉀1．0g、水1L、葡萄糖1．0g，其中的蛋白胨可提供____________等營養(yǎng)要素，氯化鈉和磷酸二氫鉀除提供無機(jī)鹽外，在培養(yǎng)基中還分別具有____________的作用，馴化時，培養(yǎng)液逐步加大濃度的物質(zhì)為________________________。(3)將馴化后的微生物進(jìn)行平板劃線純種分離時，不需要進(jìn)行一定倍數(shù)的梯度稀釋，原因是____________________________________從分離得到的單一菌落中挑取菌種，接種于牛肉膏斜面培養(yǎng)基中適宜溫度下培養(yǎng)48小時后，可在____________℃冰箱中臨時保藏。(4)從不同斜面培養(yǎng)基中取菌株進(jìn)行活化后制成菌懸液，接種于以樂果原液為碳源的培養(yǎng)液中，適宜溫度振蕩培養(yǎng)24小時后，通過測定培養(yǎng)瓶中____________，可篩選出分解樂果能力較強(qiáng)的微生物。(5)若要探究某菌株對樂果的降解能力與樂果濃度的關(guān)系，實驗的設(shè)計思路為____________________________________________________。【答案】(1)常年施用樂果(2)

碳源、氮源（和維生素）

調(diào)節(jié)滲透壓、充當(dāng)緩沖物質(zhì)

樂果(3)

通過在平板上連續(xù)劃線，可將聚集的菌種逐步稀釋分散，分離獲得單菌落

4(4)樂果的剩余量(5)在不同濃度的樂果溶液中，接種相同量的該菌株，一定時間后測定樂果的剩余量（并計算樂果的降解率）【分析】各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。牛肉膏在培養(yǎng)基中的作用是為微生物生長提供碳源、氮源、生長因子等。【詳解】（1）本題是要從土壤中篩選能有效降解樂果的微生物，因此在樂果污染的土壤中該微生物數(shù)量較多，所以用于篩選的樣品應(yīng)來自常年施用樂果的土壤中。（2）蛋白胨是含C和N的有機(jī)物，可為微生物生長提供碳源、氮源（和維生素）。氯化鈉和磷酸二氫鉀除提供無機(jī)鹽外，在培養(yǎng)基中還分別具有調(diào)節(jié)滲透壓、充當(dāng)緩沖物質(zhì)的作用，馴化時，培養(yǎng)液逐步加大濃度的物質(zhì)為樂果，目的是篩選能有效降解樂果的微生物。（3）平板劃線法是通過在平板上連續(xù)劃線，可將聚集的菌種逐步稀釋分散，分離獲得單菌落，因此不需要梯度稀釋。臨時保藏需要將挑取的菌種接種于牛肉膏斜面培養(yǎng)基中適宜溫度下培養(yǎng)48小時后，并在4℃冰箱中臨時保藏。（4）單位時間內(nèi)剩余的樂果量越少，說明篩選出的微生物分解樂果的能力越強(qiáng)，因此通過測定培養(yǎng)瓶中樂果的剩余量，可篩選出分解樂果能力較強(qiáng)的微生物。（5）若要探究某菌株對樂果的降解能力與樂果濃度的關(guān)系，則自變量為樂果的濃度，因變量為樂果的剩余量，其余無關(guān)變量應(yīng)相同且適宜，因此實驗設(shè)計的思路為：在不同濃度的樂果溶液中，接種相同量的該菌株，一定時間后測定樂果的剩余量（并計算樂果的降解率）。17．每家每天都會產(chǎn)生一定數(shù)量的廚余垃圾，這類垃圾富含有機(jī)物，極易腐爛變質(zhì)。某廠家對研制的微生物處理機(jī)進(jìn)行宣傳時稱幾小時能降解10公斤爛菜葉、腥臭的爛魚蝦等。研發(fā)微生物處理機(jī)的過程中，研究人員需從廚余垃圾中分離純化出高效分解垃圾的微生物?；卮鹣铝袉栴}：(1)分離純化分解菌的過程中需用到固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，對配制的培養(yǎng)基常采用_________法滅菌；檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可采用的方法是__________。(2)分離分解菌時，需先將廚余垃圾樣品提取液進(jìn)行梯度稀釋，原因是_______；測定培養(yǎng)液中分解菌的數(shù)量時，需做三個重復(fù)試驗，目的是________。(3)若整個分離過程中沒有受到雜菌污染，但培養(yǎng)基上出現(xiàn)了多種特征的菌落，這說明_______。統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)時，一般在固定的時間選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為統(tǒng)計結(jié)果，這樣做的目的是_______。(4)長期保存高效分解菌菌種時，可采用_________法?！敬鸢浮?1)

高壓蒸汽滅菌

將未接種的培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落產(chǎn)生(2)

菌液中細(xì)菌濃度較大，直接涂布培養(yǎng)很難分離獲得單菌落

減小實驗誤差(3)

多種微生物都能分解廚余垃圾（或分解菌不止一種）

防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落(4)甘油管藏【分析】1、菌種的保存：①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏法；②對于需要長時間保存的菌種，可以采用甘油管藏法。2、滅菌方法：①灼燒滅菌適用于接種工具；②干熱滅菌適用于玻璃器皿、金屬用具；③高壓蒸汽滅菌使用于培養(yǎng)基及容器。(1)滅菌方法包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌，其中對培養(yǎng)基及容器需用高壓蒸汽滅菌。要判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可采用的方法是將滅菌后的培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時間后觀察是否出現(xiàn)菌落，若出現(xiàn)，說明滅菌不徹底。(2)分離分解菌時若不進(jìn)行稀釋，菌液中細(xì)菌濃度會較大，難以獲得單菌落。則在測定培養(yǎng)液中分解菌的數(shù)量時，需至少做三個重復(fù)實驗，起相互對照的作用，其目的是排除偶然因素產(chǎn)生的誤差對實驗結(jié)果的影響。(3)若在整個分離過程中無雜菌污染，培養(yǎng)基上出現(xiàn)多種菌落特征，則最可能的原因是分解菌的種類較多，形成不同的菌落，而多種微生物都能分解廚余垃圾。每隔段時間統(tǒng)計一次，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣做的目的是防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致菌落遺漏。(4)甘油管藏法適用于長期保存的菌種。利用液體培養(yǎng)基在零下20℃條件下將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內(nèi)保存。18．自生固氮菌是土壤中能獨立固定空氣中N2的細(xì)菌，將玉米種子用自身固氨菌拌種后播種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量?？蒲腥藛T進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如下圖。請回答：(1)步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)豞___________（填“表層”或“深層”）土壤；步驟②需充分振蕩20min，主要目的是____________。(2)步驟③將土壤懸浮液稀釋了____________倍，步驟④所用的接種工具是____________。(3)下表為兩種培養(yǎng)基的配方，步驟④應(yīng)選其中的____________培養(yǎng)基，并加入瓊脂后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌、倒平板。純化培養(yǎng)時，需同時進(jìn)行未接種培養(yǎng)基的培養(yǎng)，目的是_______。Ashby培養(yǎng)基：甘露醇（C6H14O6）10g，KH2PO40．2g，MgSO4·7H2O0．2g，NaCl0．2g，K2SO40．3g，CaCO35g，蒸餾水1000mL。LB培養(yǎng)基：蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaCl5g，蒸餾水1000mL，pH7．0-7．2(4)將純化的固氮菌置于完全培養(yǎng)液中擴(kuò)大培養(yǎng)48小時，經(jīng)離心后收集下層細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至特定培養(yǎng)基中進(jìn)行固氮能力的測定，篩選出固氮能力最強(qiáng)的菌種CM12為進(jìn)一步鑒定其固氮，科研人員選用發(fā)芽一致的玉米種子進(jìn)行3組盆栽實驗，30d