紫外可見分光光度計的使用

紫外可見分光光度計的使用第1頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成2、分光光度計的使用

波長掃描

定量測定3、注意事項第2頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日第3頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：當白光照射到物質(zhì)上時，如果物質(zhì)對白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補色。一、工作原理及儀器組成第4頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日互補色原理植物葉子呈現(xiàn)綠色是因為植物中存在一種吸收藍紫光和紅光的載體——葉綠素顏色的產(chǎn)生第5頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復合光第6頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日利用一定頻率的紫外--可見光照射分析物，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質(zhì)的特征。

溶液對光的作用示意圖物質(zhì)對光的選擇性吸收－溶液對光的作用

第7頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日I0入射光輻射強度I透射光輻射強度T透射比a吸光系數(shù)ε摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對光吸收過程第8頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日0.575光源單色器吸收池檢測器顯示儀器組成-單光束分光光度計第9頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日雙光束分光光度計比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器第10頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日組成：光源、單色器、樣品池、檢測器1．光源：①能提供連續(xù)的輻射；②光強度足夠大；③在整個光譜區(qū)內(nèi)光譜強度不隨波長有明顯變化；④光譜范圍寬；⑤使用壽命長，價格低。

鎢燈——可見光區(qū)320～2500nm氫燈或氘燈——紫外光區(qū)195－375nmU3010（碘鎢燈、氘燈）波長范圍190-900nm

第11頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日2．單色器：包括狹縫、準直鏡、色散元件單色器是分光光度計的心臟部分，它的作用是把來自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長。它的主要組成部件和作用是：①入射狹縫——限制雜散光進入。②色散元件——即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。

③準直鏡——把來自入射狹縫的光束轉(zhuǎn)化為平等光，并把來自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫上。④出射狹縫——只讓特定波長的光射出單色器。

第12頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日3.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)；石英——適用于紫外和可見光區(qū)4．檢測器：將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置光電管光電倍增管二極管陣列檢測器5．記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)第13頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日第14頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日Slit1不存在，Mirror取代了光柵grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋轉(zhuǎn)鏡將光分成兩束，分別通過參比池和樣品池，然后聚集在PMT第15頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日第16頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦剡M行用戶基線校正按按鈕將樣品放入樣品池開始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面數(shù)據(jù)檢索峰值檢出圖譜平滑、求導二分光光度計的使用-波長掃描第17頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日啟動UVSolution軟件

打開儀器主機電源。用鼠標點擊Windows開始菜單中的[HitachiApplications]選項中的[UVSolutions2.0]選項?；蛘咧苯釉谧烂嫔想p擊UVSolution圖標。第18頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日

2運行UVSolution軟件。軟件將自動配置計算機的串行口（RS232Port）見圖第19頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日儀器在初始化過程中進行如下自檢工作：ROM檢測RAM檢測波長步進電機運轉(zhuǎn)檢測氘燈點亮檢測鎢燈點亮檢測儀器波長校正第20頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日3儀器主機開始初始化。見圖第21頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日4儀器主機初始化完畢，進入工作狀態(tài)。第22頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日5測量參數(shù)設(shè)置1在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。

第23頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日General:總體設(shè)置頁面Measurement測量:

Wavelengthscan波長掃描Timescan時間掃描

Photometry定波長測量Operator操作者:輸入操作者的姓名Instrument儀器:儀器型號由軟件自動從儀器主機獲得。UseSampleTable使用樣品表:選擇是否使用樣品表。Comments備注:填寫一些備注信息。[Load]按鈕:用于裝載原來保存的方法文件。[Save]按鈕:保存當前的設(shè)置參數(shù)。[SaveAs]按鈕:將當前設(shè)置參數(shù)另存為一個方法文件。第24頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面第25頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2Light一般選擇“Auto”第26頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日Monitor顯示頁面

第27頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日Processing數(shù)據(jù)處理頁面

第28頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日Report報告結(jié)果頁面

第29頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入第30頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設(shè)小一些；進行樣品掃描時，可設(shè)大一些。將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕系統(tǒng)基線校正方法。使用空氣作為參比和樣品。按按鈕出對話框見圖，選擇System后按[OK]按鈕，進行系統(tǒng)基線校正。第31頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日測量有兩種方法可以開始測量：使用菜單方式選擇[Spectrophotometer]菜單下Start]選項開始測量使用按鈕方式：按按鈕開始測量如果要終止掃描按按鈕。第32頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦貙悠贩湃霕悠烦亻_始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面進行用戶基線校正按按鈕定量測量設(shè)置波長輸入標樣二分光光度計的使用-光度法第33頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日測量參數(shù)設(shè)置在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項。出現(xiàn)下列設(shè)置窗口.第34頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日具體操作程序Method:general:Measurement測量方式選擇Photometry（光度計測量）

Quantitation定量參數(shù)設(shè)置頁面：第35頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日在measure中選擇波長wavelength，在Calibration中選擇“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校準。在concertration中鍵入標準濃度單位。3.Instrument第36頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日4

standards標準參數(shù)設(shè)置

鍵入標系的樣品濃度及名稱第37頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日5吸光度自動校零在開始測試前，需要進行吸光度校零。在樣品室參比和樣品光路中分別放入空白樣品。按按鈕進行吸光度校零。

6在wavelength中設(shè)定掃描的最大吸收波長，7放入標樣，選中第一個標樣，點measure依次測定完成后自動給出標準曲線。8選擇SAMPLE進行樣品測定，全部測定完后點擊END，此時自動生成一個文件，打開此文件，另存為所需的文件名。9關(guān)機時，先退出UVsolution，再關(guān)電腦，最后關(guān)光度計上的power。第38頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日三注意事項1.開機預熱15分鐘左右。2.測定時應注意：參照池和吸收池應是一對經(jīng)校正好的匹配的吸收池，材料和規(guī)格一致。使用前后應將洗手池洗凈，測量時不能用手接觸窗口。已匹配好的比色皿不能用爐子和火焰干燥，不能加熱，以免引起光程長度上的改變。第39頁，共42頁，2023年，2月20日，星期日3.測量條件的選擇：選擇適宜波長的入射光:由于有色物質(zhì)對光有選擇性吸收,為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度,必須選擇溶液最大吸收波長的入射光?？刂莆舛華的準確的讀數(shù)范圍:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7讀數(shù)范圍內(nèi)時,測量的準確度較高.選擇參比溶液：參比溶液是用來調(diào)節(jié)儀器工作零點的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液。4.用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計算機。5.正確登記，將儀器及實驗臺擦干凈。第40頁，共42