血常規(guī)檢查及鏡檢

血常規(guī)檢查及鏡檢第1頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日今日議題血常規(guī)檢查的內(nèi)容血球分析儀的發(fā)展歷程鏡檢的意義血球分析儀存在的問題及解決方案第2頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日血常規(guī)檢查的內(nèi)容血紅蛋白測定各種細胞計數(shù)及比例各種細胞的形態(tài)學變化血液中其它物質(zhì)和生物體第3頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日各種細胞的形態(tài)學第4頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日各種細胞的形態(tài)學第5頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第6頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日各種細胞的形態(tài)學第7頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日

第8頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第9頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第10頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第11頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第12頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第13頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日第14頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日血球計數(shù)儀的發(fā)展史590年荷蘭人米德爾堡和詹森設計制造了最原始的顯微鏡1610年伽利略使用望遠鏡觀察小的物體并將其放大，后來被列文霍克改進成為原始的顯微鏡。1658年意大利人馬爾皮基應用最原始的顯微鏡首先觀察到了紅細胞，他是第一個見到紅細胞的人開始進行紅細胞計數(shù)則是200年后的事情了而設計并生產(chǎn)出第一臺血細胞計數(shù)儀則又過了近100年。第15頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日

1852年就有人開始設計對紅細胞的計數(shù)辦法1855年發(fā)明了用于計數(shù)血細胞的計數(shù)板

目前仍然使用的改良Neubauer計數(shù)板就是應用最為廣泛和持續(xù)時間最為長久的經(jīng)典一種，仍然是最為可靠和最為經(jīng)典的計數(shù)技術它不僅適用于血細胞計數(shù)，還可用于其他細胞、動物血細胞、微小粒子及需要在顯微鏡下計數(shù)的各種樣品。第16頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日

直到PaulEhrlich通過用苯胺染料(anilinedyes)對血細胞進行染色，可以區(qū)分細胞核、細胞漿以及一些完好的細胞結構把各種不同的白色的細胞（whitecells）劃分為五種類型，也就是今天仍然沿用的分類標準。

第17頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日1912年出生在美國阿肯色州一個小城的人WallanceH.Coulter發(fā)現(xiàn)了微小粒子通過特殊的小孔時可產(chǎn)生電阻變化這一現(xiàn)象，并根據(jù)這種電阻變化特點將其應用于微小粒子的粒度測量和計數(shù)上?？萍冀鐬楸碚盟陌l(fā)明，將其稱為庫爾特原理（Coulterprinciple）。

Coulter先生將其引入到血液細胞計數(shù)上，在1953年獲得美國發(fā)明專利

第18頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日細胞分類儀器將體積為35～450fL的血細胞，分為256個通道（channel）。每個通道：1.64fl。根據(jù)細胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細胞體積分布直方圖(Histogram)。

經(jīng)溶血素處理脫水后，血細胞體積大小發(fā)生了變化?。。〉谝蝗海?5～90fl）小細胞區(qū)：淋巴細胞（體積最?。?。第二群（90～160fl）單個核細胞區(qū)，（中間細胞）：單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、原始、幼稚細胞、異常細胞等。第三群（160fl以上）大細胞區(qū)：嗜中性粒細胞（體積最大）。第19頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日經(jīng)過半個多世紀的發(fā)展，這種儀器已經(jīng)有了非常明顯的進步。以前因為只能進行細胞計數(shù)，因此我們一般將這類儀器叫做血細胞計數(shù)儀（BloodCellCounter）,由于技術的進步目前這類儀器可以提供除了血細胞計數(shù)以外的更多參數(shù)的聯(lián)合測定和分析，因此我們一般將這類儀器統(tǒng)稱為血液細胞分析儀(HematologyAnalyzer)。

光散射法血液分析儀檢測原理

組合應用 電學 光學 細胞化學等第20頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日血細胞分類方法采用VCS技術進行五分類的儀器采用采用阻抗、激光散射和熒光染色技術

激光散射和細胞化學染色技術

多角度偏振光散射法應用于白細胞五分類（MAPSS技術）

采用圖像分析的單純細胞分類儀

第21頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日VCS技術V代表體積測量法，可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細胞和單核細胞。C代表高頻電導性。細胞核的化學組份可使電流的傳導性產(chǎn)生變化，其變化量可以反映出細胞內(nèi)含物的信息?？蓞^(qū)分體積相近而內(nèi)部性質(zhì)不同的細胞群體，如淋巴細胞和嗜堿性粒細胞S代表激光散射測量技術，激光束可穿透細胞，探測細胞內(nèi)核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況，以區(qū)分出顆粒特性不同的細胞群體。例如細胞內(nèi)顆粒粗的要比顆粒細的散射光更強，因此可以用于區(qū)分粒細胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細胞。第22頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日阻抗、激光散射和熒光染色技術白細胞分析DIFF通道：STROMATOLYSER-4DL試劑中的表面活性劑可以溶解掉標本中的紅細胞和血小板，并在白細胞膜上打出小孔；然后第二種試劑TROMATOLYSER-4DS中的聚次甲基染料通過這個小孔進入白細胞中，與細胞核的核酸和細胞器結合，在經(jīng)過波長633nm的激光照射，產(chǎn)生的熒光強度與細胞的核酸含量成正比。STROMATOLYSER-4DL試劑還具有與嗜酸性顆粒特異性結合的能力，可根據(jù)側(cè)向散射光信號強度，將嗜酸性粒細胞從中性粒細胞中分離出來。前向散射光（FSC）信號可反應細胞體積大?。粋?cè)向散射光（SSC）信號可反應細胞的顆粒和細胞核等內(nèi)含物的信息在DIFF散射圖當中可以得到中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞等四個分群第23頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日WBC/BASO通道是專用作檢測嗜堿性粒細胞的通道STROMATOLYSER–FB是一種酸性試劑，可將紅細胞和血小板形成淡影化，將除嗜堿性粒細胞以外的白細胞處理成裸核形態(tài)，然后采用前向散射光（FSC）信號和側(cè)向散射光（SSC）信號使嗜堿性粒細胞從其它細胞中分離出來。第24頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日核酸熒光染色法幼稚粒細胞分析上有特殊的IMI通道，在IMI檢測通道中主要應用射頻（RF）技術和直流電阻抗法（DC）。這個測定通道根據(jù)幼稚細胞膜表面比成熟細胞膜表面含有脂質(zhì)少的現(xiàn)象，在稀釋液中加入硫化氨基酸（IM試劑），由于占位不同，結合在幼稚細胞表面的氨基酸較多，對溶血劑有抵抗作用，對幼稚細胞具有保護作用。當加入溶血劑后成熟細胞易被溶解掉，而幼稚細胞不易被溶解破壞，用通道-NRBC通道，在處理標本時加入STROMATOLYSER－NR專用試劑，它能使成熟紅細胞溶解又可保持有核紅細胞的核結構，通過檢測熒光強度得到：白細胞核大熒光強度高，有核紅細胞核小，熒光強度低，正常紅細胞無細胞核和破碎，熒光強度極低。第25頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日激光散射和細胞化學染色技術

在白細胞分類上采用了白細胞過氧化酶測定通道和嗜堿粒細胞測定通道。嗜酸性粒細胞具有最強的過氧化物酶，中性粒細胞含有較強的過氧化物酶，嗜堿粒細胞不含此酶。單核細胞除早期原始階段外，均含有較弱的過氧化物酶。淋巴細胞不含過氧化物酶。根據(jù)激光法散射光強度進行的細胞體積的測量同時也獲得了細胞大小的信息在白細胞過氧化物酶散點圖上，X軸表現(xiàn)過氧化物酶強度，過氧化物酶強陽性細胞位于右端；Y軸表現(xiàn)散射光強度信號。嗜堿細胞則是通過嗜堿細胞和分葉核通道測定的，因淋巴細胞與嗜堿粒細胞都無過氧化物酶第26頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日多角度偏振光散射法應用于白細胞五分類（MAPSS技術）

標本在水動力聚焦系統(tǒng)的作用下進入檢測部，在激光束的照射下，細胞在多個角度都產(chǎn)生散射光。儀器特別設置了四個角度來收集散射光的信號。0度為前角光散射，

用于粗略判斷細胞體積大小；10度為狹角散射，

用于檢測細胞結構及其內(nèi)部復雜性的指標；90度為垂直光散射，用于對細胞內(nèi)部顆粒及細胞核分葉情況的分析；90度偏振光散射，基于顆?？梢詫⒋怪苯嵌鹊募す庀竦奶匦裕瑢⑹人嵝约毎麖闹行粤＜毎推渌毎蟹蛛x出來。第27頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日血球分析儀的盲點紅細胞形態(tài)RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW球形？大or小，哪個多？中心淡染區(qū)情況？細胞內(nèi)有無異常？碎片？有核細胞除了正常大小，細胞內(nèi)限定的內(nèi)含物之外概不知道?。。「黝惣毎g有干擾第28頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日環(huán)境溫度的干擾計數(shù)時稀釋液的溫度應為(22土4)℃有些溶血劑在低溫時可出現(xiàn)結晶白細胞計數(shù)增高易激活血小板，引起血小板凝集，造成血小板計數(shù)假性降低劉忠倫等報告1O℃時血小板計數(shù)結果儀器法顯著低于手工法，且血小板直方圖異常；25℃時儀器法計數(shù)結果與手工法一致，顯示正常的血小板直方圖第29頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日抗凝劑的影響ICSH推薦采用EDTA-K2抗凝的靜脈血進行血液細胞分析血量過多抗凝不充分，會出現(xiàn)凝塊；血量過少，會導致抗凝劑過濃，延長血細胞內(nèi)外K+的平衡時間第30頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日標本放置時間的影響靜脈全血標本，大部分參數(shù)在8h內(nèi)沒有顯著改變平均血小板體積、血小板分布寬度、大血小板比率和血小板壓積在2h內(nèi)已明顯增高標本放置時間過長會導致細胞分層，分層的細胞會產(chǎn)生不同的代謝物，形成微環(huán)境第31頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾對新生兒血液進行分析時，使用正常量溶血劑計數(shù)白細胞，各項結果與實際有差異常規(guī)溶血劑用量不能將紅細胞完全破壞當平均紅細胞體積小于70fL時，血小板計數(shù)假性升高，這時需用顯微鏡人工計數(shù)才能得到準確的結果黃疸導致血小板計數(shù)降低，與膽紅素濃度呈負相關，相關系數(shù)為-0.9925；當膽紅素濃度大于或等于47.2μmol/L時，血紅蛋白測定受干擾乳糜標本，血紅蛋白濃度假性增高，相關系數(shù)為0.9991；第32頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾脂血標本脂血是最常見的干擾因素，干擾所有型號的血液分析儀的HGB、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、WBC、PLT等參數(shù)的檢測。脂肪乳液成為臨床常用腸外營養(yǎng)和高脂血癥患者的增加第33頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾冷凝集標本某些疾病的患者(如支原體肺炎等)血液里存在冷凝集素，使血液RBC在離開機體后幾分鐘內(nèi)發(fā)生聚集。干擾所有型號的血液分析儀的RBC、MCV和MCHC等參數(shù)。在報告單的備注欄注明該標本有冷凝集現(xiàn)象，并提示醫(yī)生注意第34頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾RBC緡錢狀標本某些疾病(如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥等)的血液標本RBC呈緡錢狀排列。干擾所有型號的血液分析儀的RBC、MCV和MCHC等參數(shù)。在報告單備注欄注明該標本的RBC呈緡錢狀排列，提示醫(yī)生注意(該現(xiàn)象對診斷漿細胞系統(tǒng)疾病很有幫助)。第35頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾難溶血或溶血不良(細胞碎片)標本某些疾病，如嚴重肝病、球形RBC增多癥等。全博等對3O例肝病患者的全血標本用血液分析儀進行了分析，對WBC異常增高的樣本進行手工復檢，同時用洗滌法與水浴法排除了高球蛋白、纖維蛋白原與冷凝集素的干擾以及用溶血劑破壞RBC后重新進行試驗。結果顯示其測定值同手工測定結果一致說明WBC的異常增高與RBC的存在有關由于疾病因素的影響而使紅細胞膜抗溶性增強，最終影響WBC的準確計數(shù)第36頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾馬曉明等報道3例病例，臨床體征均有嚴重的感染，嗜堿性粒細胞計數(shù)均增高用瑞氏染色法進行人工復片．發(fā)現(xiàn)中性粒細胞呈中毒性改變，粒細胞中出現(xiàn)了大量的中毒顆粒、形似嗜堿性顆粒，同時細胞核分葉減少固縮，染色質(zhì)呈塊狀，核漿比例改變，影響了血細胞分析儀的判讀，最終造成了嗜堿性粒細胞假性升高的結果。第37頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾溶血標本某些傷害(如毒蛇咬傷后)誘發(fā)的彌散性血管內(nèi)溶血(DIC)，或采血不順利等因素可引起標本溶血。干擾所有型號的血液分析儀RBC、MCV和MCHC等參數(shù)。第38頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾小RBC由于方法學的問題，某些貧血(如缺鐵性貧血、地中海貧血等)患者的小RBC對KX-21、K4500和XS-1000i等儀器測定PLT數(shù)量時有明顯干擾，使PLT假性增高。第39頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾巨大PLT如PLT增多癥、慢性粒細胞白血病等血液系統(tǒng)疾病患者血液中可能出現(xiàn)與WBC大小樣的巨大PLT，其干擾所有型號的血液分析儀的WBC參數(shù)。第40頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾PLT聚集采血不順利或部分患者高凝狀態(tài)。干擾所有型號血液分析儀的PLT參數(shù)。PLT衛(wèi)星現(xiàn)象PLT聚集在中性粒細胞周圍的現(xiàn)象，稱為衛(wèi)星現(xiàn)象，出現(xiàn)這種現(xiàn)象公認的原因，是在當血液與EDTA抗凝劑接觸的15min內(nèi)可能出現(xiàn)。但有少數(shù)患者的標本，采集2h后仍存在此現(xiàn)象，干擾所有型號的血液分析儀的PLT參數(shù)。第41頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾有核紅細胞(NRBC)在某些病理情況下外周血出現(xiàn)NRBC，干擾所有型號血液分析儀的WBC參數(shù)。高WBC某些疾病(如白血病)引起WBC異常增高。干擾所有型號血液分析儀的RBC參數(shù)。第42頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾豪-周(Howell-Jollys，HJ)小體見于巨幼RBC貧血和溶血性貧血、脾切除等，為RBC內(nèi)存在的染色質(zhì)小體，干擾XE-2100血液分析儀的RET參數(shù)。瘧原蟲寄生在RBC內(nèi)的瘧原蟲使RET計數(shù)假性增高。干擾XE-2100血液分析儀的RET參數(shù)。第43頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾敖凌云等報道，血細胞儀分析標本結果顯示，白細胞直方圖在5OfL以下出現(xiàn)異常峰，紅細胞提示懷疑有核紅細胞存在，血小板提示懷疑血小板聚集。在排除其他干擾因素后，經(jīng)涂片染色，油鏡下檢查發(fā)現(xiàn)間日瘧原蟲。第44頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日生理和病理因素的干擾念珠菌孢子念珠菌菌血癥患者血液里的真菌孢子可對所有型號的儀器的WBC、PLT干擾院內(nèi)真菌感染的發(fā)病率不斷遞增第45頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日小結自動化血液分析儀是以正常細胞為模板，建立起來的分析系統(tǒng)，對異常形態(tài)的細胞識別能力有限血液中的各種細胞間有相互干擾儀器的重復性可能很好，但有可能是“假”的各種生理和病理情況均會對儀器的分析產(chǎn)生干擾作用第46頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日鏡檢的意義是血常規(guī)檢查中不可或缺的內(nèi)容是目前任何儀器均無法替代的操作某些形態(tài)學的改變和發(fā)現(xiàn)是臨床診斷的有力證據(jù)是對儀器分析結果的校正，是最后的確認手段第47頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日血分析儀結果真的可以直接報告嗎？這些能分辨嗎？

《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》認為以下情況均需鏡檢：血液分析儀檢測結果出現(xiàn)異常計數(shù)、警示標志、異常散點圖等情況這些顆粒能分辨48第48頁，共55頁，2023年，2月20日，星期日鏡檢的意義以患者為中心降低醫(yī)療風險全局觀念盡快使患者得到有效治療，解除病痛縮短平均住院日，加快病床周轉(zhuǎn)，接納更多的患者增加收入第4