細(xì)菌常用的幾種試驗

細(xì)菌常用的幾種試驗演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有26頁\編輯于星期日優(yōu)選細(xì)菌常用的幾種試驗Ppt現(xiàn)在是2頁\一共有26頁\編輯于星期日

常做的實驗方法革蘭氏染色法拉絲試驗抗酸染色法氧化酶試驗觸酶試驗?zāi)堂冈囼瀶W普妥辛實驗衛(wèi)星實驗CAMP桿菌肽敏感實驗硝酸鹽還原試驗DNA酶試驗生化反應(yīng)血清學(xué)分型(志賀,沙門，霍亂、鏈球菌)現(xiàn)在是3頁\一共有26頁\編輯于星期日革蘭氏染色快速染色法：1、初染：結(jié)晶紫染色10秒，水洗，甩干；2、媒染：革蘭氏碘液染色10秒，水洗，甩干；3、脫色：95%酒精脫色10~20秒，水洗，甩干；4、復(fù)染：沙黃或復(fù)紅染色10秒，水洗，干后鏡檢。5、結(jié)果判定：G+呈紫色，G-菌呈紅色現(xiàn)在是4頁\一共有26頁\編輯于星期日G+菌G-菌現(xiàn)在是5頁\一共有26頁\編輯于星期日氫氧化鉀拉絲試驗“氫氧化鉀拉絲試驗”快速鑒定革蘭氏陽性菌

1、原理：由于革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁肽聚糖層數(shù)少于稀堿溶液內(nèi)易于破裂，而釋放出未斷裂的DNA螺旋，使KOH菌懸液呈現(xiàn)粘性，可有攪拌后拉出絲來，而革蘭陽性菌在稀堿溶液中仍保持不變。

2、試劑：4%KOH水溶液。應(yīng)新鮮配制。

3、方法：取1滴4%KOH水溶液于潔凈玻片上，用接種環(huán)于固體培養(yǎng)基上取新鮮配制菌落少許，于KOH溶液中攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環(huán)，觀察能否拉出絲來。

4、結(jié)果：能用接種環(huán)拉出絲來為陽性，仍為混懸液則為陰性。大多數(shù)革蘭陰性菌于5到10秒內(nèi)出現(xiàn)陽性，有的需30到45秒。革蘭陽性菌于60秒以后仍陰性。

現(xiàn)在是6頁\一共有26頁\編輯于星期日抗酸染色1、初染：石炭酸復(fù)紅加熱染色3-5分鐘，水洗，甩干；2、脫色：3%鹽酸酒精脫色30~60秒，水洗，甩干；3、復(fù)染：堿性美蘭60秒，水洗，干后鏡檢。4、結(jié)果判定：抗酸菌呈紅色，非抗酸菌呈蘭色5、意義：用于鑒別抗酸菌與非抗酸菌現(xiàn)在是7頁\一共有26頁\編輯于星期日抗酸染色---抗酸菌

現(xiàn)在是8頁\一共有26頁\編輯于星期日氧化酶試驗原理：具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C使對苯二胺氧化，生成有色的醌類化合物。方法：取一潔凈的濾紙一小塊，涂抹菌苔少許，加一滴氧化酶試劑（對苯二胺溶液）于菌上，觀察顏色變化。判斷：立即呈粉紅色并迅速轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色為陽性，不變色為陰性。意義：腸桿菌科細(xì)菌與氣單胞、假單胞菌的鑒別現(xiàn)在是9頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是10頁\一共有26頁\編輯于星期日觸酶試驗1.原理：具有觸酶（過氧化氫酶）的細(xì)菌，能催化過氧化氫，放出新生態(tài)氧，繼而形成分子氧，出現(xiàn)氣泡。2.方法：用接種環(huán)挑取固體培養(yǎng)基上的菌落置于潔凈的玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液一滴，觀察結(jié)果。3.結(jié)果判斷：在5秒內(nèi)釋放大量的氣泡為陽性。4.意義：大多數(shù)球菌觸酶試驗陽性，但鏈球菌為陰性，主要用于鑒別葡萄球菌與鏈球菌?，F(xiàn)在是11頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是12頁\一共有26頁\編輯于星期日血漿凝固酶試驗1.原理：金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶。一種是結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中纖維蛋白原變成纖維蛋白附著于細(xì)菌表面上，發(fā)生凝集，用玻片法測出。另一種是菌體生成后釋放與培養(yǎng)基中的游離凝固酶，能使凝固酶原變成凝血酶類物質(zhì)，從而使血漿凝固，可用試管法測出。2.方法：（1）玻片法：取血漿和生理鹽水各一滴分別滴到清潔玻片上，挑去待檢菌落分別與血漿及鹽水混合，如血漿中出現(xiàn)明顯凝集顆粒而鹽水中無自凝現(xiàn)象者為陽性。（2）試管法：取試管兩支，分別加入0.5ml的血漿（經(jīng)生理鹽水1：4稀釋）挑去菌落數(shù)個加入測定管充分研磨混勻，用一只陽性菌株加入對照管，37℃3-4小時。血漿凝固者為陽性?，F(xiàn)在是13頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是14頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是15頁\一共有26頁\編輯于星期日奧普妥辛實驗

（OP試驗）1.原理：肺炎鏈球菌對Optochin（乙基氫化去甲奎寧）十分敏感，作用機(jī)理是干擾肺炎鏈球菌葉酸的合成，可抑制其生長，其他鏈球菌如草綠色鏈球菌對其不敏感。借此可對肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌加以鑒別。2.方法：將待檢的a溶血的鏈球菌均勻的涂布于血平板上，貼放Optochin紙片（含藥5mg)35℃孵育18-24小時，觀察抑菌圈的大小。3.結(jié)果判斷：抑菌圈〉14mm為肺炎鏈球菌，無或見很窄的抑菌圈為草綠色鏈球菌。現(xiàn)在是16頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是17頁\一共有26頁\編輯于星期日衛(wèi)星試驗1.原理：流感嗜血桿菌生長時需要X、V兩種因子，在血平板上形成極小、圓形透明的菌落，若與金葡菌同時培養(yǎng)，由于金葡菌產(chǎn)生V因子，促進(jìn)流感嗜血桿菌的生長，在金葡菌周圍的細(xì)菌菌落較大，形成衛(wèi)星生長現(xiàn)象。在普通培養(yǎng)基上不生長。2.方法：用取菌環(huán)挑去可疑菌落分別接種在血平板、MH平板上，再用取菌針挑取金葡菌與原劃線垂直劃一直線接種在平板上。35℃24小時觀察結(jié)果。3.結(jié)果判斷：金葡菌周圍的細(xì)菌菌落較大，衛(wèi)星試驗陽性4.意義：僅血平板上出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象--流感嗜血桿菌；血平板與MH均呈衛(wèi)星現(xiàn)象--副流感嗜血桿菌。借此用于鑒別流感與副流感嗜血桿菌?，F(xiàn)在是18頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是19頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是20頁\一共有26頁\編輯于星期日CAMP試驗1.原理：B群鏈球菌在血平板上能產(chǎn)生CAMP因子，可促使金黃色葡萄球菌β

溶血素的活性，故在血平板上兩種細(xì)菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明狀溶血區(qū)。其他鏈球菌一般不產(chǎn)生CAMP因子，故此試驗可作為B群鏈球菌的鑒定指標(biāo)之一。2.方法：在血平板上，用金黃色葡萄球菌劃一條橫線，再于該直線相距5mm左右用被檢菌接種一或兩條垂直短線，35℃24小時觀察結(jié)果。3.結(jié)果觀察：在被檢菌接種線與金葡菌接種線之間有一個箭頭形或半月形透明溶血區(qū)為陽性，可推斷為B群鏈球菌。無溶血區(qū)為陰性。現(xiàn)在是21頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是22頁\一共有26頁\編輯于星期日桿菌肽敏感試驗1.原理：A群鏈球菌對桿菌肽非常敏感，而其他鏈球菌對桿菌肽通常耐藥，故此試驗可鑒別鏈球菌。2.方法：將被檢鏈球菌，密涂于血平板上，將桿菌肽紙片貼于血平板表面，35℃24小時觀察結(jié)果。3.在桿菌肽周圍出現(xiàn)明顯抑菌環(huán)〉10mm為陽性，則被推斷為A群鏈球菌,〈10mm為陰性，為其他群的鏈球菌。現(xiàn)在是23頁\一共有26頁\編輯于星期日現(xiàn)在是24頁\一共有26頁\編輯于星期日硝酸鹽還原試驗1.原理：某些細(xì)菌能還原培養(yǎng)基中的硝酸鹽生成亞硝酸鹽、氨和氮等。亞硝酸鹽與醋酸作用生成亞硝酸，亞硝酸再與對氨基苯磺酸作用形成重氮苯磺酸，它可與a-萘胺結(jié)合成紅色的N-a-奈氨苯磺酸。2.方法：將待檢菌接種硝酸鹽培養(yǎng)基中，35℃24小