腎活檢組織光鏡和免疫熒光標(biāo)本的制備及檢查

腎活檢組織光鏡和免疫熒光標(biāo)本的制備及檢查第1頁(yè)/共22頁(yè)前言光鏡、免疫熒光、電鏡觀察腎活檢組織結(jié)構(gòu)對(duì)診斷各種類型的腎小球疾病有重要意義標(biāo)本處理及制片質(zhì)量的好壞，與診斷的難易及準(zhǔn)確與否有著極為密切的關(guān)系必須重視標(biāo)本制備中的每個(gè)細(xì)小環(huán)節(jié)第2頁(yè)/共22頁(yè)準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（10％的中性福爾馬林溶液），蓋塞緊后備用清潔5ml小瓶?jī)?nèi)加冷電鏡固定液3ml置冰瓶（4%戊二醛）第3頁(yè)/共22頁(yè)腎活檢標(biāo)本的初步處理第4頁(yè)/共22頁(yè)取材判斷皮質(zhì)組織皮髓交界組織皮質(zhì)-髓質(zhì)-皮質(zhì)組織僅取得髓質(zhì)組織則為取材不成功第5頁(yè)/共22頁(yè)取材判斷判斷已取組織：腎組織，肌肉、脂肪、結(jié)締組織等用解剖顯微鏡或放大鏡判斷腎組織部位（皮質(zhì)和髓質(zhì)，有無腎小球），及時(shí)與術(shù)者聯(lián)系腎皮質(zhì)色淡，見分布不規(guī)則，朦朧的紅色小點(diǎn)（腎小球）。隨經(jīng)驗(yàn)積累，可肉眼判定立即置腎組織于蠟板上，迅速測(cè)量其長(zhǎng)度（cm），記錄、分割，迅速固定取標(biāo)本部位、量重要。如無腎小球或皮質(zhì)<1cm，考慮再次穿刺第6頁(yè)/共22頁(yè)標(biāo)本分切法取組織長(zhǎng)1.5cm~2.0cm最佳（1次）小鑷子將組織輕置蠟板上，鏡下觀察、量長(zhǎng)度銳利刀片切割組織1mm、2mm及4mm數(shù)段先供電鏡標(biāo)本，要求皮質(zhì)1mm（腎小球1個(gè)）其次免疫病理，需組織約2mm（腎小球3~5個(gè)）余組織供光鏡（腎小球>10個(gè)）第7頁(yè)/共22頁(yè)標(biāo)本分切法腎活檢穿刺組織的分取腎活檢穿刺組織的分取LM：光鏡；IF：免疫熒光；EM：電鏡第8頁(yè)/共22頁(yè)標(biāo)本的處理光鏡分切后的組織平放蠟板上（勿扭曲）小鑷子沾少許光鏡固定液于組織表面，約30″組織稍硬后，再將整條組織放入固定液內(nèi)（這樣固定的組織平整、不易彎曲，便于切出完整的切片）第9頁(yè)/共22頁(yè)標(biāo)本的處理免疫熒光及免疫酶標(biāo)分切后的組織迅速置預(yù)冷的培養(yǎng)皿內(nèi)的濕紗布中置冰瓶即送至恒溫冷凍切片機(jī)內(nèi)（<-30℃）進(jìn)行包埋、切片如不能即切片，標(biāo)本必須置-40℃~-70℃冰箱保存（保持抗原活性，防止抗原移位或流失），但放置時(shí)間不宜>2d第10頁(yè)/共22頁(yè)標(biāo)本的處理電鏡將分切后的腎組織即浸4%的冷戊二醛固定液中，置冰瓶?jī)?nèi)送至電鏡室第11頁(yè)/共22頁(yè)注意事項(xiàng)短時(shí)完成觀察和分切標(biāo)本，注意保持腎組織濕潤(rùn)，切勿使其干涸解剖顯微鏡光源不宜太強(qiáng)，否則觀察組織易干涸，不易看清腎小球免疫熒光用的腎組織必須避免接觸固定液，尤其含酒精固定液（避免影響冰凍切片結(jié)果）；電鏡和光鏡固定液不得互相混淆動(dòng)作輕柔夾取未固定組織，勿牽扯組織，避免人為因素造成組織細(xì)胞變形第12頁(yè)/共22頁(yè)腎活檢標(biāo)本光鏡檢查第13頁(yè)/共22頁(yè)第14頁(yè)/共22頁(yè)HEPASPASMMasson第15頁(yè)/共22頁(yè)腎活檢標(biāo)本免疫熒光檢查第16頁(yè)/共22頁(yè)第17頁(yè)/共22頁(yè)MN-IgG

IgAN-IgALN-IgM第18頁(yè)/共22頁(yè)免疫熒光電鏡常用染色HEPASMassonPAM-Masson剛果紅油紅“O”光鏡IgAIgG第19頁(yè)/共22頁(yè)小結(jié)按指南要求安全開展腎活