蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定和沉淀反應(yīng)

蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定和沉淀反應(yīng)第1頁/共6頁3．操作（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。（2）向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL，加一管，搖勻一管。此時1、2、3、4管的pH依次為5.9、5.3、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。最混濁的一管的pH即為酪蛋白的等電點(diǎn)。第2頁/共6頁二、蛋白質(zhì)的沉淀及變性1．目的（1）加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識。（2）了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實(shí)用意義。（3）了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。2．原理

在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋?。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。

（1）可逆的沉淀反應(yīng);（2）不可逆沉淀反應(yīng);

蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。第3頁/共6頁3．操作（1）蛋白質(zhì)的鹽析無機(jī)鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。加5％卵清蛋白溶液5mL于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止，此時析出的沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。第4頁/共6頁

（2）重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3％硝酸銀溶液1～2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？（3）某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5％三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻，傾出上清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。（4）有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入