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文檔簡介

上海交大實驗動物學實驗動物微生物質量與動物實驗演示文稿目前一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點優(yōu)選上海交大實驗動物學實驗動物微生物質量與動物實驗ppt目前二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點實驗動物傳染病流行的基本環(huán)節(jié)實驗動物微生物學和寄生蟲學分類合格動物群中常見微生物和寄生蟲污染及控制實驗動物微生物學和寄生蟲學質量檢測目前三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點傳染源傳播途徑易感動物一、實驗動物傳染病流行的基本環(huán)節(jié)目前四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點傳染源(1)人源性(2)動物源性引起傳染的條件(1)要有病原性和一定的毒力

(2)侵入體內的病原體要達到一定的數(shù)量(3)病原體要有適當?shù)那秩腴T戶目前五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點傳播途徑

切斷傳播途徑是控制傳染病的主要措施。(1)、直接傳染:健康動物與患病動物(包括攜帶病原體動物)直接接觸而感染。如狂犬病病毒、猴B病毒、艾滋病病毒等。①水平傳播:實驗動物群體中互相的傳播。傳播途徑包括消化道、呼吸道或皮膚粘膜創(chuàng)傷等。如沙門氏菌常經消化道感染;仙臺病毒常經呼吸道;布氏桿菌病常由配種直接感染等。②垂直傳播:由母體通過胎盤將病原體傳給胎兒,例如支原體、細小病毒等。目前六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點間接傳播(一)非生物性傳播:a、經空氣飛沫、塵埃傳播;b、以飼料、墊料傳播;c、經飲水和飲水用具傳播;d、經籠器具傳播。(二)生物性傳播:a、節(jié)肢動物:蒼蠅、蚊子、蟑螂、蚤、虱、蜱、螨等。b、野生動物:野生嚙齒類動物,常攜帶各種病原體,例如攜帶流行性出血熱病毒的野鼠的尿污染實驗動物的墊料、飼料。c、實驗動物:從外部新購入的實驗動物,未經嚴格檢疫和隔離。d、飼養(yǎng)、實驗人員不注意衛(wèi)生防疫傳染病原體;有些人獸共患病,也可經人傳播給實驗動物,例如結核、布氏桿菌病等。目前七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點易感動物1)種類(品種)

2)年齡

3)營養(yǎng)狀況

4)機體的抵抗力5)機體防御器官狀況目前八頁\總數(shù)七十六頁\編于十點

傳染源、傳播途徑和易感動物是傳染病傳播的三個基本環(huán)節(jié),缺少任何一個環(huán)節(jié),新的傳染病就不可能發(fā)生,也不可能造成傳染病在實驗動物中的流行。而當傳染病流行已經形成時,切斷任何一個環(huán)節(jié),流行即告終止。傳染源傳播途徑易感動物目前九頁\總數(shù)七十六頁\編于十點在醫(yī)學和獸醫(yī)學研究領域,疫苗接種和藥物治療是預防傳染病的有效手段。但是實驗動物一般不采取疫苗接種和藥物治療,主要由于實驗動物的特殊性:

1、應用疫苗或治療制劑可能干擾實驗結果。

2、經過治療或免疫的動物,外表健康,但可能是帶菌或帶毒者,可能成為潛在的傳染源。

3、對于小型實驗動物,治療措施可能在經濟上不合算目前十頁\總數(shù)七十六頁\編于十點實驗動物衛(wèi)生防疫主要包括以下幾個方面的內容:

1、平時的預防措施

2、發(fā)生疫病時的撲滅措施

3、消毒措施

4、隔離措施目前十一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點物理性消毒(1)高壓蒸汽消毒:103.4Kpa,121.3℃15-30min??蓺⑺姥挎咴趦鹊乃形⑸?。飼料、墊料、器具等消毒。(2)高熱煮沸:器械、籠具、水瓶等消毒100℃(20min)。(3)干烤消毒:可達180-280℃(15min~30min),消毒效果較好。(4)火焰消毒:溫度可達300℃,主要用于不銹鋼籠具、金屬器械、墻壁的消毒。(5)照射:紫外線、γ-射線等,用于空氣、飼料、墊料和器具的消毒。目前十二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點化學消毒是使用化學藥物噴灑、浸泡、熏蒸等,以達到消毒滅菌的目的。常用化學消毒方法包括液體消毒和蒸汽消毒。

(1)液體消毒劑:包括石炭酸、過氧乙酸、來蘇水、次氯酸等。(2)熏蒸消毒:包括福爾馬林和三聚甲醛等。

目前十三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點實驗動物微生物微生物學和寄生蟲學分類目前十四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點實驗動物的體表、粘膜和消化道內容物中微生物共生微生物叢病原體條件致病烈性傳染病對宿主有益對動物和實驗產生不良影響實驗動物群全部毀滅影響人類健康目前十五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點二、實驗動物微生物學和寄生蟲學等級分類普通動物(conventionalanimal)CV清潔動物(cleananimal)CL無特定病原體動物(specificpathogenfreeanimal)SPF無菌動物(germfreeanimal)GF悉生動物(gnotobioticanimal)GN目前十六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點普通動物conventionalanimal(CV)

必須是不攜帶主要人獸共患病病原體和動物烈性傳染病的病原體。目前十七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點飼養(yǎng)條件

飼育在開放環(huán)境里,使用的墊料和飼料,只消毒不滅菌;其飲水須符合城市飲用水標準。適用范圍只能用于教學實驗和某些科研工作的預實驗,不能用于科學研究和發(fā)表論文的實驗。目前十八頁\總數(shù)七十六頁\編于十點清潔級動物(cleananimal)CL亦稱最少疾病動物(minimaldiseaseanimal)此類動物必須是不攜帶主要人獸共患病原體和動物烈性傳染病的病原體,又不攜帶對動物危害大和對科學研究影響大的病原體。目前十九頁\總數(shù)七十六頁\編于十點飼養(yǎng)環(huán)境清潔級動物常來自屏障環(huán)境的SPF動物的后代或降級。飼育使用的墊料、飼料、引用水和用具等均應經過高壓蒸汽消毒;或飲用水經過酸化,飼料經過鈷(co60)輻射滅菌。工作人員需穿無菌服進入屏障環(huán)境進行飼養(yǎng)和實驗。適用范圍課題研究和論文發(fā)表,以及研制新藥,生物制品,保健食品,化妝品等科學實驗。目前二十頁\總數(shù)七十六頁\編于十點無特定病原體動物(specificpathogenfreeanimal)SPF不攜帶主要人獸共患病原體和動物烈性傳染病的病原體;不攜帶對動物危害大和對科學研究影響大的病原體;還不攜帶主要潛在感染或條件致病菌和對科學實驗影響大的病原體的動物。目前二十一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點飼養(yǎng)環(huán)境

SPF動物的飼育,一般是先培育出無菌動物,然后再將其后代轉移到屏障環(huán)境中進行繁育建群。工作人員需穿無菌服裝才能進入屏障環(huán)境進行飼育或試驗操作。適用范圍適用于大多數(shù)科研工作。目前二十二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點無菌動物(germfreeanimal)GF

無菌動物是指:動物體內外無可檢出的一切生命體的動物。

目前二十三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點飼養(yǎng)環(huán)境子宮摘除術(剖腹產)飼育在隔離環(huán)境(隔離器內)一切用品經過嚴格包裝、嚴格滅菌后,通過傳遞倉送入隔離器通過手套進行間接實驗操作。目前二十四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點悉生動物(gnotobioticanimal)GN動物體內外所攜帶的生命體是已知的目前二十五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點隔離環(huán)境GF動物植入GN動物污染GF動物

植入污染屏障環(huán)境SPF動物目前二十六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點普通級動物清潔級動物SPF級動物無菌動物悉生動物目前二十七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點項目GFSPFCV傳染病無無有或可能有寄生蟲無很少有或可能有實驗結果準確較準確有疑問應用動物數(shù)少量少量多或大量長期實驗效果可能好可能好困難死亡率很低低高長期實驗存活率約100%約90%40%左右實驗標準設計可能可能不可能統(tǒng)計價值很好較好不準確實驗結果的價值很高高有疑問不同微生物學等級的實驗動物比較目前二十八頁\總數(shù)七十六頁\編于十點實驗小鼠和大鼠病毒學檢測標準國家或國際組織動物應排除病毒項目ICLAS小鼠/大鼠14/9中國小鼠/大鼠5+6/7芬蘭小鼠/大鼠16/8日本小鼠/大鼠8/9美國小鼠/大鼠(9)10/8澳大利亞小鼠/大鼠13/8荷蘭小鼠/大鼠11/10目前二十九頁\總數(shù)七十六頁\編于十點小鼠應排除病毒項目

淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒漢坦病毒鼠痘病毒小鼠肝炎病毒仙臺病毒小鼠肺炎病毒呼腸孤病毒III型小鼠細小病毒小鼠腦脊髓炎病毒小鼠腺病毒多瘤病毒LymphocyticChoriomeningitisVirusHantavirusEctromeliaVirusMouseHepatitisVirusSendaiVirusPneumoniaVirusofMiceReovirustypeIIIMinuteVirusofmiceTheiler’sMouseEncephalomyelitisVirusMouseAdenovirusPolyomaVirus目前三十頁\總數(shù)七十六頁\編于十點大鼠應排除病毒項目

漢坦病毒仙臺病毒小鼠肺炎病毒呼腸孤病毒III型大鼠細小病毒RV株大鼠細小病毒H-1株大鼠冠狀病毒/大鼠延淚腺炎病毒HantavirusSendaiVirusPneumoniaVirusofMiceReovirustypeIIIRatParvovirusRatParvovirusRatCoronavirus/SialodacryoadenitisVirus目前三十一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點實驗動物微生物學標準

國家或國際組織動物細菌真菌支原體ICLAS小鼠/大鼠13/12中國小鼠/大鼠8+8/9+7芬蘭小鼠/大鼠11+9/10+9日本小鼠/大鼠10/10美國小鼠/大鼠(16)13/12澳大利亞小鼠/大鼠12/12荷蘭小鼠/大鼠7/18目前三十二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點合格動物群中常見微生物和寄生蟲污染及控制目前三十三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點普通級動物中弓形蟲(Toxoplasmagondii)污染

弓形蟲是一種人畜共患的寄生蟲,小鼠,大鼠,地鼠,豚鼠,家兔和非人靈長類實驗動物及貓,牛,羊,豬等都能感染。目前三十四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點弓形蟲是細胞內寄生蟲,根據(jù)不同發(fā)育階段分為五型:滋養(yǎng)體和包囊出現(xiàn)在中間宿主體內,裂殖體,配子體和卵囊只出現(xiàn)在終宿主--貓體內。目前三十五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點傳播途徑任何動物食入弓形蟲的包囊,卵囊或活體,都能受到感染而患弓形蟲病。貓科動物的糞便中,常帶有卵囊??梢晕廴静菰⒛翀?、蔬菜、水果等。貓的身上和口腔內常常有弓形蟲包囊和活體。直接接觸貓易受感染。狗的身上和口腔內常有包囊或活體,養(yǎng)狗的人不小心可能感染。其他家畜、家禽,如:雞、鴨、鵝、豬、牛、馬、羊等動物體內有時帶弓形蟲包囊和活體。所以食用肉、蛋奶也可能感染,魚肉體內有時也有弓形蟲包囊或活體。魚也是一個傳染源,另外某些吸血昆蟲,叮咬人時也可以感染。

市售的各種肉制品、香腸、火腿腸、罐頭也都可以成為傳染源。奶制品、奶油制品、蛋類制品、蛋糕、各類餅干、點心、冰點有時也能成為傳染源。

目前三十六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點滋養(yǎng)體排出體外,發(fā)育成熟,具感染性卵囊口,鼻,咽,呼吸道粘膜,眼結膜和皮膚機體有免適疫宜

發(fā)育宿主體內無性繁殖,引起發(fā)病急性力條無件癥下終宿主受精

宿主產生無癥狀有免疫力感染

腸絨毛上皮細胞內發(fā)育包囊裂殖體經貓消化道侵入腸上皮細胞發(fā)育繁殖滋養(yǎng)體目前三十七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點弓形蟲感染可引起腸粘膜和腸系膜淋巴、心、眼、腎上腺、脾、腦、肺、肝、胎盤及肌肉組織的壞死和損傷。小鼠感染后會嚴重影響實驗結果弓形蟲感染會改變白血病、乳腺癌、肝癌對化學致癌物的反應性。影響妊娠期胎兒發(fā)育目前三十八頁\總數(shù)七十六頁\編于十點弓形蟲污染的預防實驗動物設施內要保持清潔,定期消毒,嚴格阻斷貓及其排泄物對設施、飼料、墊料和飲水的污染。盡一切可能消滅野鼠。目前三十九頁\總數(shù)七十六頁\編于十點清潔級動物中的仙臺病毒仙臺病毒屬于副粘病毒科,副粘病毒屬,與人類HA-2病毒同被歸入副流感病毒Ⅰ型,它們之間有密切的抗原關系現(xiàn)在認為:嚙齒類實驗動物是仙臺病毒唯一自然宿主。目前四十頁\總數(shù)七十六頁\編于十點感染途徑空氣和接觸途徑是病毒傳播和擴善的方式。仙臺病毒除了鼻內途徑外,其它途徑均不引起小鼠的自然感染。鼻腔沖洗物或唾液,肺。偶爾可在腎、肝、脾、等器官發(fā)現(xiàn)病毒,但在尿、血和腸內則沒有病毒。目前四十一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點不同品系小鼠對仙臺病毒感染的易感性和敏感性明顯不同。在自發(fā)性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等死亡率接近0%,高度易感小鼠如Swiss裸鼠則可接近100%。感染的裸鼠其疾病癥狀出現(xiàn)的時間比有免疫機能的小鼠稍晚,并伴有進行性消瘦。在較長的時間里陸續(xù)死亡。目前四十二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點仙臺病毒在鼠群中引起兩種基本類型的感染慢性:不明顯的感染,在CV鼠群中長期存在。離乳不久至6周齡的小鼠,感染率很高,伴有血清學的轉變,病鼠逐漸康復。急性:顯形感染,一般持續(xù)2-7個月,以后自愈或轉為不顯形感染。臨床證狀:呼吸困難,新生仔鼠死亡,離乳率顯著減低,成年鼠妊娠期延長。目前四十三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點普通級鼠群中仙臺病毒感染是最難控制的病毒感染之一。凡新引進的動物必須經8周檢疫(檢查引入動物和“哨兵”動物的病毒抗體)。一旦在屏障環(huán)境內的鼠群中檢出仙臺病毒抗體陽性,若不及時清除所有被感染動物,將導致屏障設施的失敗。目前四十四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點2.暫停繁殖,在相對靜止條件下保存這種非繁殖群直至感染消除(約2個月),然后恢復繁殖。兩種方法

1.消滅已感染鼠群,重引符合標準的種鼠或用無菌技術剖腹取胎重建繁殖群。目前四十五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點小鼠肝炎病毒(MHV)屬冠狀病毒科,冠狀病毒屬,與人冠狀病毒(普通感冒,或肺炎),大鼠冠狀病毒(新生大鼠肺炎),大鼠唾液腺病毒(唾液腺,淚腺炎)同屬。有多種毒株。目前四十六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點小鼠肝炎病毒是實驗小鼠重要的病毒感染之一。呈現(xiàn)世界范圍分布,無明顯的季節(jié)性。臨床表現(xiàn)為肝炎,腦炎和腸炎。多數(shù)情況下是亞臨床或慢性感染。急性發(fā)病的臨床癥狀:被毛粗亂,小鼠倦怠,營養(yǎng)不良,脫水,體重減輕。同籠老鼠擠做一團,肌肉震顫,尿色變深,針刺時不愿移動等。老齡老鼠傾向于發(fā)生脫水和消瘦。目前四十七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點傳播途徑MHV傳播方式有經空氣和接觸兩種。小鼠是唯一能自然感染MHV;通過腦內接種,可實驗感染棉鼠,大鼠和地鼠,但兔和豚鼠無反應。目前四十八頁\總數(shù)七十六頁\編于十點MHV是普通級實驗小鼠難以清除的病毒之一。進行剖腹取胎術,結合屏障環(huán)境內維持飼養(yǎng),才能培育無MHV感染的清潔級以上小鼠。必須注意MHV垂直傳播的可能性。目前四十九頁\總數(shù)七十六頁\編于十點預防/處理定期檢測,有利及時發(fā)現(xiàn)屏障環(huán)境內的鼠群中鼠肝炎病毒感染。重新引進符合標準的種群無菌技術剖腹取胎重建繁殖群同步交配代乳方法重建繁殖群暫停繁殖方法重建繁殖群目前五十頁\總數(shù)七十六頁\編于十點同步交配的方法采用同步交配,把MHV陽性鼠群中懷孕母鼠自然分娩的新生鼠在分娩后的24小時內傳給符合標準的代乳鼠帶乳。然后在代乳鼠3周齡,6周齡和12周齡進行血清學檢測,可獲MHV陰性小鼠。目前五十一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點暫停繁殖法:從感染群中移去所有新生鼠,離乳鼠和妊娠鼠。停止繁殖15周,可排除感染。15周后出生的第一代新生在3-4周齡MHV血清陽性,四周后因從母方獲得的抗體衰退而血清陰性。在第二代小鼠3-9周齡MHV血清陰性。目前五十二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點SPF級實驗動物中的細菌污染綠膿桿菌金黃色葡萄球菌肺炎克雷伯氏桿菌PseudomonasaerugiosaStaphylococcusauresKlebsiellapneumoniae目前五十三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點綠膿桿菌綠膿桿菌是動物和人類胃腸道的一種常在菌。實驗動物可通過口咽和胃腸途徑感染,常可在小鼠的口咽部和腸道發(fā)現(xiàn)。目前五十四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點該菌可導致遠交群小鼠(Swiss-Webster)和近交系小鼠(C3H)斜頸和轉圈癥狀,被看作是小鼠疾患的主要細菌病原。對免疫環(huán)境遭受損害或抑制的宿主,綠膿桿菌可穿過局部淋巴環(huán)境和血管環(huán)境,導致致死性敗血癥。目前五十五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點傳播在常規(guī)小鼠群的飲水器中能檢到綠膿桿菌在溫暖、潮濕的環(huán)境中(如SPF飼養(yǎng)室的淋浴更衣處)也常檢到這種菌。正常人皮膚中也可攜帶綠膿桿菌,由SPF屏障環(huán)境內的工作人員帶入屏障環(huán)境。目前五十六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點預防定期對SPF小鼠進行微生物學監(jiān)測,及時淘汰被感染的鼠群。對屏障環(huán)境的淋浴更衣室常規(guī)進行徹底打掃消毒滅菌并要求進入屏障環(huán)境的工作人員嚴格執(zhí)行操作規(guī)程和個人防護用品的穿戴。通過酸化(用鹽酸調正PH2.5)氯化(10ppm)飲水來預防飲水器對SPF小鼠的感染目前五十七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點金黃色葡萄球菌在小鼠皮膚和粘膜上,常檢到致病的金黃色葡萄球菌和一般不致病的表皮葡萄球菌。雖然金黃色葡萄球菌還沒有被廣泛看作實驗小鼠的原發(fā)性疾病,但有些文獻中報道了其作為皮膚感染,淋巴感染或粘膜感染病原學因子。目前五十八頁\總數(shù)七十六頁\編于十點感染小鼠自發(fā)性葡萄球菌感染與小鼠品系,營養(yǎng)及屏障環(huán)境的操作管理有關。幼鼠比成年鼠易感。無胸腺裸小鼠因缺少保護性被毛,并缺乏T-細胞,而經常發(fā)生皮膚和眼窩的葡萄球菌感染。目前五十九頁\總數(shù)七十六頁\編于十點主要傳播途徑據(jù)對SPF設施的細菌學監(jiān)測發(fā)現(xiàn),從健康SPF小鼠分離的金黃色葡萄球菌的噬菌體型常與從動物管理員體表分離的品系一致。從有臨床癥狀的感染動物最常分離到的凝固酶陽性葡萄球菌的培養(yǎng)和噬菌體型也能從動物管理員那兒分離到。目前六十頁\總數(shù)七十六頁\編于十點預防/處理定期檢測及時淘汰患鼠酸化飲用水將飼料和墊料徹底消毒滅菌經常更換墊料飼養(yǎng)人員和實驗人員嚴格執(zhí)行隔離措施和操作細則目前六十一頁\總數(shù)七十六頁\編于十點肺炎克雷伯氏桿菌克雷伯氏桿菌是人和動物的腸道常在菌,是一種人和動物泌尿,呼吸道感染有關的條件性致病菌小鼠自發(fā)爆發(fā)的疾病臨床癥狀是:食欲不振,弓背,被毛粗亂,打噴嚏及呼吸加快。目前六十二頁\總數(shù)七十六頁\編于十點預防/處理為了從受感染的小鼠中清除這種病原體,很可能需要進行剖腹產和嚴格的屏障環(huán)境。目前六十三頁\總數(shù)七十六頁\編于十點三、實驗動物微生物學和寄生蟲學質量檢測檢測目的檢測方法檢測規(guī)則目前六十四頁\總數(shù)七十六頁\編于十點檢測目的排出人獸共患病,確保從事實驗動物生產的飼養(yǎng)人員和動物實驗的科研或教學人員身體健康排出危害實驗動物的常見病多發(fā)病,確保實驗動物種群的健康,為生命科學研究提供合格的試驗動物。1)對新引進的普通級動物進行檢疫,防止人獸共患病原體或動物烈性傳染病帶入實驗動物種群,或傳播給試驗人員2)定期對生產繁殖的試驗動物種群進行抽樣檢測,及時了解實驗動物生產群體微生物學和寄生蟲學質量;必要時作出淘汰或降級處理目前六十五頁\總數(shù)七十六頁\編于十點3)當實驗動物種群發(fā)生傳染病流行時,檢出感染途徑,提出控制或預防措施。4)對實驗動物生產或實驗設施進行靜態(tài)和動態(tài)檢測,及時掌握實驗動物環(huán)境條件,了解是否符合實驗動物國家標準。目前六十六頁\總數(shù)七十六頁\編于十點研究確定試驗動物微生物學和寄生從學登記標準的劃分,和不同等級實驗動物的微生物學和寄生蟲學質量控制指標。確保使用實驗動物的藥品和生物制品的質量,保證進行動物實驗的科學研究成果和各種動物試驗結果的可能性、準確性和重復性。目前六十七頁\總數(shù)七十六頁\編于十點檢測方法國內外通用,比較成熟,便于交流??刹僮餍詮?,檢測結果易判斷,檢測率較高。易實現(xiàn)標準化和規(guī)范化,便于推廣。國家推薦性標準《實驗動物微生物學檢測方法1~4》GB/T14926.1~14926.64-2001《實驗動物寄生蟲學檢測方法》GB/T18448.1~18448.10-2001目前六十八頁\總數(shù)七十六頁\編于

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