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放射免疫試驗詳解演示文稿目前一頁\總數(shù)三十八頁\編于九點(優(yōu)選)放射免疫試驗?zāi)壳岸揬總數(shù)三十八頁\編于九點引言放射免疫試驗以放射性核素為特征,通過測定放射性強(qiáng)度評估抗原-抗體反應(yīng)的強(qiáng)度,從而實現(xiàn)對待測物質(zhì)的定量(或定性)分析。放射免疫試驗將放射性核素的高靈敏性與抗原-抗體間的高特異性結(jié)合于一體,具有較高的分析敏感性和分析特異性。目前三頁\總數(shù)三十八頁\編于九點引言放射免疫試驗創(chuàng)立了兩種重要標(biāo)記免疫分析模式即競爭性免疫分析(放射免疫分析方法)和非競爭性免疫分析(免疫放射分析方法),同時,也創(chuàng)立了固相吸附分離方法,以及劑量-反應(yīng)曲線的數(shù)學(xué)處理模型,為酶免疫試驗和發(fā)光免疫試驗奠定理論和實踐基礎(chǔ)。目前四頁\總數(shù)三十八頁\編于九點本章目錄第一節(jié)放射免疫分析方法第二節(jié)免疫放射分析方法第三節(jié)兩種方法比較第四節(jié)臨床應(yīng)用第五節(jié)關(guān)鍵因素目前五頁\總數(shù)三十八頁\編于九點重點提示放射免疫分析方法(原理)免疫放射分析方法(原理)目前六頁\總數(shù)三十八頁\編于九點第一節(jié)放射免疫分析方法目前七頁\總數(shù)三十八頁\編于九點相關(guān)知識放射免疫分析方法radioimmunoassay,RIA;首個用于超微量物質(zhì)定量的標(biāo)記免疫分析技術(shù);發(fā)明人:Yalow
andBerson1959目前八頁\總數(shù)三十八頁\編于九點一、分析原理放射免疫分析方法競爭性免疫分析模式標(biāo)記抗原和待檢抗原同質(zhì)分析體系中的抗體限量目前九頁\總數(shù)三十八頁\編于九點分析原理圖:放射免疫分析方法原理示意圖(1)目前十頁\總數(shù)三十八頁\編于九點圖:放射免疫分析方法原理示意圖(2)目前十一頁\總數(shù)三十八頁\編于九點技術(shù)(操作)要點抗原抗體反應(yīng)標(biāo)本與試劑混合并溫浴分離技術(shù)分離結(jié)合標(biāo)記物與游離標(biāo)記物發(fā)射性測量數(shù)據(jù)處理目前十二頁\總數(shù)三十八頁\編于九點二、抗原-抗體反應(yīng)競爭模式平衡法非平衡法溫浴條件溫度酸堿度基質(zhì)圖:非平衡法目前十三頁\總數(shù)三十八頁\編于九點三、分離技術(shù)非均相免疫分析結(jié)合標(biāo)記物(Bind,B)游離標(biāo)記物(Free,F(xiàn))分離方法聚乙二醇沉淀法雙抗體法目前十四頁\總數(shù)三十八頁\編于九點分離技術(shù)圖:聚乙二醇-雙抗體法(特異性和低成本)目前十五頁\總數(shù)三十八頁\編于九點四、放射性測量和數(shù)據(jù)處理抗原-抗體(溫?。┓蛛x結(jié)合標(biāo)記物放射性測量數(shù)據(jù)處理目前十六頁\總數(shù)三十八頁\編于九點放射性測量放射性核素
125Iγ射線測量儀器采用γ計數(shù)器目前十七頁\總數(shù)三十八頁\編于九點
圖:標(biāo)準(zhǔn)曲線實例:目前十八頁\總數(shù)三十八頁\編于九點第二節(jié)免疫放射分析方法目前十九頁\總數(shù)三十八頁\編于九點相關(guān)知識免疫放射分析
immunoradiometricassay,IRMA非競爭性免疫分析發(fā)明人:Miles
andHales1968目前二十頁\總數(shù)三十八頁\編于九點一、分析原理(1)免疫放射分析單位點法適合測定小分子抗原雙位點法適合測定小分子抗原目前二十一頁\總數(shù)三十八頁\編于九點一、分析原理(2)圖:免疫放射分析(單位點法)測定原理示意圖目前二十二頁\總數(shù)三十八頁\編于九點一、分析原理(3)圖:免疫放射分析(雙位點法)測定原理示意圖目前二十三頁\總數(shù)三十八頁\編于九點一、分析原理(4)雙位點法一對互相匹配的抗體捕獲抗體(與固相載體連接)檢測抗體(標(biāo)記放射性核素)非競爭性免疫分析模式體系中抗體保持過量目前二十四頁\總數(shù)三十八頁\編于九點技術(shù)要點抗原抗體反應(yīng)B、F的分離放射性測量數(shù)據(jù)處理目前二十五頁\總數(shù)三十八頁\編于九點二、分離技術(shù)固相吸附分離法固相材料捕獲抗體將結(jié)合標(biāo)記物捕獲于固相材料表面,而游離標(biāo)記物分布于液相中,經(jīng)洗滌去除液相中的游離標(biāo)記物。目前二十六頁\總數(shù)三十八頁\編于九點固相吸附技術(shù)目前二十七頁\總數(shù)三十八頁\編于九點固相吸附技術(shù)包被
Coating將捕獲抗體吸附于固相材料表面的過程封閉blocking用高溶度蛋白溶液封閉空白結(jié)合位點目前二十八頁\總數(shù)三十八頁\編于九點數(shù)據(jù)處理(實例)圖:標(biāo)準(zhǔn)曲線目前二十九頁\總數(shù)三十八頁\編于九點第三節(jié)兩種方法的比較目前三十頁\總數(shù)三十八頁\編于九點RIA&IRMA目前三十一頁\總數(shù)三十八頁\編于九點RIA&IRMA放射免疫分析液相狀態(tài)的抗原與抗體反應(yīng)免疫放射分析固相表面與液相狀態(tài)之間的抗原抗體反應(yīng)抗體固相化對抗體結(jié)構(gòu)和功能的影響目前三十二頁\總數(shù)三十八頁\編于九點第四節(jié)臨床應(yīng)用目前三十三頁\總數(shù)三十八頁\編于九點歷史地位方法建立
20世紀(jì)60年代快速發(fā)展
20世紀(jì)80年代~90年代目前三十四頁\總數(shù)三十八頁\編于九點臨床應(yīng)用體內(nèi)激素水平
病原體抗原或抗體腫瘤標(biāo)志物藥物測定目前三十五頁\總數(shù)三十八頁\編于九點臨床應(yīng)用現(xiàn)存檢測項目反三碘甲狀腺原氨酸(分子量651Da)、胃泌素(分子量2098Da)、醛固酮(分子量364Da)、血管緊張素-I(分子量1200Da)和血管緊張素-Ⅱ(分子量1046Da)目前三十六頁\總數(shù)三十八頁\編于九點第五節(jié)關(guān)鍵因素目前三十七頁\總
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