真核細(xì)胞翻譯啟始子2α信號(hào)通路參與肺癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡進(jìn)程的機(jī)制

蛋白激酶B1基因介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)類似激酶/真核細(xì)胞翻譯啟始子2α信號(hào)通路參與肺癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡進(jìn)程的機(jī)制

Summary目的探討蛋白激酶B1(Akt1)基因介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)類似激酶(PERK)/真核細(xì)胞翻譯啟始子2α(eIF2α)信號(hào)通路參與肺癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法選擇人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549按實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染方案隨機(jī)分組，分為空白(Blank)組、沉默Akt1(si-Akt1)陰性對照(NC)組、si-Akt1組、過表達(dá)Akt1(OE-Akt1)NC組、OE-Akt1組、CCT020312(PERK選擇性激動(dòng)劑)組和OE-Akt1+CCT020312組。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot)檢測各組細(xì)胞中相關(guān)基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平；同時(shí)分別應(yīng)用噻唑藍(lán)(MTT)法和流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞增殖和凋亡水平。兩組間比較為t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果Si-Akt1組的Akt1的mRNA(0.99±0.05比0.45±0.03，t＝16.04，P<0.05)和蛋白表達(dá)(0.32±0.03比0.12±0.01，t＝10.95，P<0.05)低于si-Akt1NC組。si-Akt1組PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：0.97±0.04比1.77±0.07，t＝17.190，P<0.05；eIF2α：1.01±0.06比1.53±0.06，t＝10.610，P<0.05；GRP78：1.06±0.03比1.98±0.08，t＝18.650，P<0.05；CHOP：0.94±0.04比1.63±0.06，t＝16.570，P<0.05)和蛋白表達(dá)(p-PERK：1.15±0.05比2.23±0.11，t＝15.480，P<0.05；p-eIF2α：1.69±0.07比3.12±0.19，t＝12.230，P<0.05；GRP78：0.84±0.05比2.87±0.15，t＝22.650，P<0.05；CHOP：1.46±0.07比2.65±0.13，t＝14.400，P<0.05)明顯高于si-Akt1NC組；細(xì)胞增殖能力明顯低于si-Akt1NC組(48h：0.48±0.03比0.31±0.02，t＝8.167，P<0.05；72h：0.78±0.04比0.60±0.03，t＝6.235，P<0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯高于si-Akt1NC組(8.58±1.34比23.4±2.4，t＝9.250，P<0.05)。同時(shí)，CCT020312組PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：1.00±0.04比1.87±0.08，t＝26.940，P<0.05；eIF2α：1.00±0.05比1.57±0.07，t＝11.640，P<0.05；GRP78：1.00±0.03比2.02±0.10，t＝41.640，P<0.05；CHOP：1.00±0.06比1.66±0.07，t＝20.210，P<0.05)和蛋白表達(dá)(p-PERK：1.12±0.05比2.30±0.11，t＝16.910，P<0.05；p-eIF2α：1.65±0.05比3.20±0.18，t＝13.260，P<0.05；GRP78：0.80±0.04比2.74±0.15，t＝21.640，P<0.05；CHOP：1.44±0.06比2.61±0.13，t＝14.150，P<0.05)明顯高于Blank組；細(xì)胞增殖能力明顯低于Blank組(48h：0.46±0.03比0.29±0.02，t＝8.167，P<0.05；72h：0.80±0.04比0.57±0.03，t＝7.967，P<0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯高于Blank組和相應(yīng)NC組(8.71±1.44比23.43±2.36，t＝9.222，P<0.05)。然而，OE-Akt1組的Akt1的mRNA(0.99±0.05比1.88±0.09，t＝14.970，P<0.05)和蛋白表達(dá)(0.31±0.03比0.87±0.04，t＝19.400，P<0.05)明顯高于OE-Akt1NC組，PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：0.98±0.05比0.65±0.05，t＝8.656，P<0.05；eIF2α：1.03±0.05比0.47±0.04，t＝12.970，P<0.05；GRP78：1.2±0.04比0.32±0.03，t＝30.210，P<0.05；CHOP：0.99±0.03比0.55±0.04，t＝11.940，P<0.05)和蛋白表達(dá)(p-PERK：1.16±0.05比0.99±0.05，t＝4.164，P<0.05；p-eIF2α：1.69±0.07比1.23±0.07，t＝8.642，P<0.05；GRP78：0.86±0.04比0.34±0.02，t＝20.140，P<0.05；CHOP：1.48±0.06比0.71±0.04，t＝19.880，P<0.05)明顯低于OE-Akt1NC組，細(xì)胞增殖能力(48h：0.45±0.03比0.60±0.02，t＝7.206，P<0.05；72h：0.76±0.04比0.97±0.05，t＝5.681，P<0.05)明顯高于OE-Akt1NC組，細(xì)胞凋亡率(